Both rproFgCatL1 and rmatFgCatL1 cD

Both rproFgCatL1 and rmatFgCatL1 cDNA were sub cloned in to the pT-30b vector and transformed into E. coli BL21 (DE3). Theprotein expressions were induced with 0.1 mM isopropyl--D-thiogalactoside (IPTG) for 3 h at 37◦C, and purified by usingnickel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) affinity column under dena-turing condition. The elutes were dialyzed by using SnakeSkinTMPleated Dialysis Tubing, 10 K MWCO (Thermo Scientific, Rockford,IL, USA), in PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.4 mM KH2PO4, 10 mMNa2HPO4), pH 7.4 and concentrated by membrane filtration usingAmicon Ultra centrifugal filter devices with 10 K nominal

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

RproFgCatL1 และ rmatFgCatL1 cDNA ถูกย่อยโคลนในการเวกเตอร์ต้ม 30b pT และเปลี่ยนเป็น E. coli BL21 (DE3) Theprotein นิพจน์ถูกเหนี่ยวนำ ด้วย 0.1 mM isopropyl-D-thiogalactoside (IPTG) สำหรับ 3 ชม.ที่ 37◦C และบริสุทธิ์ โดย usingnickel nitrilotriacetic กรด (Ni-NTA) ความสัมพันธ์ของคอลัมน์ภายใต้เงื่อนไขที่ dena ทัวริง การ elutes dialyzed โดยใช้ท่อไต SnakeSkinTMPleated, 10 K MWCO (วิทยาศาสตร์เทอร์โม ร็อคฟอร์ด IL สหรัฐอเมริกา), ใน PBS (137 มม. NaCl, 2.7 mM KCl, 1.4 มม. KH2PO4, 10 mMNa2HPO4), ค่า pH 7.4 และเข้มข้น โดยเยื่อกรอง usingAmicon กรองแรงเหวี่ยงพิเศษอุปกรณ์กับ K 10 อัตรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งสอง rproFgCatL1 และ rmatFgCatL1 cDNA ถูกย่อยโคลนในเวกเตอร์ PT-30B และกลายเป็นเชื้อ E. coli BL21 (DE3) การแสดงออก Theprotein ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดกับ 0.1 มิลลิ isopropyl -? - D-thiogalactoside (IPTG) เป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่37◦Cและบริสุทธิ์โดยกรด usingnickel-nitrilotriacetic (Ni-NTA) คอลัมน์ความสัมพันธ์ภายใต้เงื่อนไข dena-ทัวริง elutes ถูก dialyzed โดยใช้ SnakeSkinTMPleated ไตท่อ 10 K MWCO (Thermo Scientific, ฟอร์ด, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) ในพีบีเอส (137 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 2.7 มิลลิโพแทสเซียมคลอไรด์ 1.4 มิลลิ KH2PO4 10 mMNa2HPO4) ค่า pH 7.4 และเข้มข้นโดยการกรองเมมเบรน อัลตร้า usingAmicon แรงเหวี่ยงอุปกรณ์กรองที่มี 10 K เล็กน้อย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้ง rprofgcatl1 rmatfgcatl1 cDNA และโคลนจะถูกย่อยใน pt-30b เวกเตอร์และแปลงเป็น E . coli BL21 ( DE3 ) สำนวนที่ถูกชักนำด้วยปริมาณ 0.1 มม. isopropyl -- d-thiogalactoside ( เอนไซม์ ) 3 H ที่ 37 ◦ C บริสุทธิ์โดย usingnickel กรดไนติโลไตรอะซิติก ( Ni NTA ) affinity คอลัมน์ดีน่าทำภายใต้เงื่อนไข การ elutes ได้โดยใช้ snakeskintmpleated ผ่านท่อไต , 10 k mwco ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , Rockford , IL , USA ) , ใน PBS ( 137 mM NaCl KCl , 2.7 mm 1.4 มิลลิเมตร kh2po4 10 mmna2hpo4 ) ที่ pH 7.4 และเข้มข้น โดยการกรองผ่านเยื่อกรอง usingamicon Ultra Centrifugal อุปกรณ์กับ 10 k ชื่อ