3.3. In situ hybridization (ISH) of

3.3. In situ hybridization (ISH) of EHP
All 3 major species of farmed penaeid shrimp, P. vannamei, P.
stylirostris and P. monodon, were shown to be infected by EHP
based both on histology and on in situ hybridization (Tourtip
et al., 2009; Tangprasittipap et al., 2013). However, ISH was more
sensitive in detecting the causative agents; as cells with no visible
signs of inclusions or microsporidian spores by histological examination
were found to be positive by ISH. In our study, the cloned
18S rRNA gene fragment was labeled with digoxigenin and used
as a probe for ISH to the infected P. vannamei. The probe reacted
intensely to the basophilic inclusions within the cytoplasm
(Fig. 1B). Our P. stylirostris samples collected from Brunei in 2006
also showed the presence of microsporidium spores within the
hepatopancreas (Fig. 1C), where the tubule epithelial cells had a
positive reaction by ISH (Fig. 1D). In both cases, the hepatopancreas
was the only tissue that reacted to the EHP probe, and the
ISH results were associated with lesions detected by H&E
histology. These results are similar to those described by
Tangprasittipap et al. (2013) with samples of EHP-infected
P. vannamei. The diagnosis of EHP in the samples from Brunei also
show that EHP has been present in shrimp farms in Asia at least
since 2006, earlier than previously thought.
The probe appears to be highly specific. No reaction was seen in
any of the tissues prepared from SPF shrimp (data not shown). We
also tested the EHP probe to a P. monodon affected with cotton
shrimp disease, in which the tail muscle was severely infected with
a Pleistophora-like microsporidium, of which the spores appeared
more eosinophilic (Fig. 1E). The EHP probe did not react to this P.
monodon with cotton shrimp disease (Fig. 1F).
From this cotton shrimp disease shrimp, we cloned a fragment
(1.1 kb) of 18S rRNA gene and labeled with diagoxigenin for ISH.
This probe reacted to the cotton shrimp disease P. monodon (see
the inserted photo in Fig. 1F). The sequence of this 18S rRNA gene
fragment had a 94% identity to a member of the genus Pleistophora,
which appears distant from Enterocytozoon spp. based on the SSU
rRNA gene-phylogeny (Stentiford et al., 2013). This also explains
why the EHP probe did not cross react to the microsporidium of
cotton shrimp disease.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3. situ ใน hybridization (อิชโบ) ของ EHPทั้งหมด 3 หลักพันธุ์ farmed penaeid กุ้ง P. vannamei พีstylirostris และ P. monodon ถูกแสดงว่าติดเชื้อ โดย EHPโดยใช้ทั้งลักษณะทางเนื้อเยื่อ และ การใน situ hybridization (Tourtipร้อยเอ็ด al., 2009 Tangprasittipap et al., 2013) อย่างไรก็ตาม อิชโบถูกเพิ่มเติมสำคัญในการตรวจสอบตัวแทนสาเหตุการ เป็นเซลล์ที่ไม่มีปรากฏสัญญาณของตัวหรือเพาะเฟิร์น microsporidian โดยตรวจสรีรวิทยาพบเป็นบวก โดยอิชโบ ในการศึกษาของเรา การโคลนติดป้าย digoxigenin และใช้ส่วนยีน rRNA 18Sเป็นการโพรบสำหรับอิชโบกับกุลา P. ติดไวรัส โพรบปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นเจี๊ยบไปรวม basophilic ภายในไซโทพลาซึม(Fig. 1B) ตัวอย่างของ P. stylirostris ที่รวบรวมจากบรูไนในปี 2006ยัง แสดงให้เห็นสถานะของเพาะเฟิร์น microsporidium ภายในhepatopancreas (Fig. 1C), ซึ่งมีเซลล์ epithelial tubule เป็นปฏิกิริยาเชิงบวก โดยอิชโบ (Fig. 1D) ในทั้งสองกรณี hepatopancreasมีเนื้อเยื่อเฉพาะที่ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับโพรบ EHP และอิชโบก็เกี่ยวข้องกับตรวจพบ H และ E ได้มิญชวิทยา ผลลัพธ์เหล่านี้จะเหมือนกับที่อธิบายไว้โดยTangprasittipap et al. (2013) ด้วยตัวอย่างของการติดเชื้อ EHPP. vannamei การวินิจฉัยของ EHP ในตัวอย่างจากบรูไนยังแสดงว่า EHP ได้ในฟาร์มกุ้งในเอเชียน้อย2549 ก่อนหน้าคิดว่า ก่อนหน้านี้โพรบที่ต้องการแล้ว ปฏิกิริยาไม่ได้เห็นในมีเนื้อเยื่อที่เตรียมจากกุ้ง SPF (ข้อมูลไม่แสดง) เรานอกจากนี้ยัง ทดสอบโพรบ EHP การดำ P. ที่กระทบกับฝ้ายโรคกุ้ง ซึ่งกล้ามเนื้อหางเป็นรุนแรงติดการ microsporidium เช่น Pleistophora ซึ่งเพาะเฟิร์นที่ปรากฏเพิ่มเติม eosinophilic (Fig. 1E) โพรบ EHP ไม่ได้ตอบสนองพีนี้ดำกับฝ้ายโรคกุ้ง (Fig. 1F)จากนี้ฝ้ายกุ้งโรคกุ้ง เรา cloned ส่วน(1.1 kb) ของยีน 18S rRNA และติดป้าย ด้วย diagoxigenin สำหรับอิชโบโพรบนี้ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับฝ้ายกุ้งโรค P. monodon (ดูแทรกภาพใน Fig. 1F) ลำดับของยีนนี้ rRNA 18Sส่วนมีตัว 94% ให้กับสมาชิกในสกุล Pleistophoraปรากฏซึ่งไกลจาก Enterocytozoon โอตาม SSUrRNA ยีน-phylogeny (Stentiford et al., 2013) นี้ยังอธิบายทำไมไม่ได้ข้ามโพรบ EHP ตอกกลับ microsporidium ของผ้าฝ้ายโรคกุ้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 ในแหล่งกำเนิดพันธุ์ (ISH) ของ EHP
ทั้งหมด 3 ชนิดที่สำคัญของสัตว์เลี้ยงในฟาร์มกุ้ง, กุ้งขาวพีพี
stylirostris และกุ้งกุลาดำได้แสดงให้เห็นว่าการติดเชื้อโดย EHP
ตามทั้งในเนื้อเยื่อและในแหล่งกำเนิดพันธุ์ (Tourtip
et al, 2009. Tangprasittipap et al, 2013) อย่างไรก็ตาม ISH
ได้มากขึ้นมีความสำคัญในการตรวจสอบตัวแทนสาเหตุ; เป็นเซลล์ที่มีไม่สามารถมองเห็นสัญญาณของการรวมหรือสปอร์ microsporidian โดยการตรวจเนื้อเยื่อพบว่าเป็นบวกโดยISH ในการศึกษาของเราโคลน18S rRNA ส่วนของยีนที่ถูกกำกับด้วย digoxigenin และใช้เป็นโพรบสำหรับISH การติดเชื้อ P. vannamei การสอบสวนมีปฏิกิริยาตอบสนองอย่างเข้มข้นกับการรวม basophilic ภายในพลาสซึม (รูป. 1B) ตัวอย่างพี stylirostris เราเก็บรวบรวมจากบรูไนในปี 2006 นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่าการปรากฏตัวของสปอร์ microsporidium ภายในตับ(รูป. 1C) ซึ่งหลอดเซลล์เยื่อบุผิวมีปฏิกิริยาบวกโดยISH (รูป. 1D) ในทั้งสองกรณีตับเป็นเนื้อเยื่อที่เดียวที่มีปฏิกิริยาตอบสนองกับการสอบสวน EHP และผลISH มีความสัมพันธ์กับรอยโรคที่ตรวจพบโดย H & E จุล ผลลัพธ์เหล่านี้จะคล้ายกับที่อธิบายโดยTangprasittipap et al, (2013) ที่มีตัวอย่างของ EHP เชื้อพี กุ้งขาว การวินิจฉัยของ EHP ในตัวอย่างจากบรูไนยังแสดงให้เห็นว่าEHP ได้รับอยู่ในฟาร์มกุ้งในเอเชียอย่างน้อยตั้งแต่ปี2006 ก่อนหน้านี้กว่าที่เคยคิด. สอบสวนที่ดูเหมือนจะมีความเฉพาะเจาะจงสูง ปฏิกิริยาไม่เห็นใด ๆ ของเนื้อเยื่อที่ทำจากกุ้ง SPF (ไม่ได้แสดงข้อมูล) เรายังผ่านการทดสอบสอบสวน EHP ไปยังกุ้งกุลาดำได้รับผลกระทบด้วยผ้าฝ้ายโรคกุ้งที่กล้ามเนื้อหางติดเชื้ออย่างรุนแรงกับmicrosporidium Pleistophora เหมือนที่สปอร์ที่ปรากฏมากขึ้นeosinophilic (รูป. 1E) สอบสวน EHP ไม่ได้ตอบสนองนี้พีกุลาดำที่มีโรคกุ้งฝ้าย(รูป. 1F). จากโรคกุ้งกุ้งฝ้ายนี้เราโคลนเศษ(1.1 กิโลไบต์) ของยีน 18S rRNA และติดป้ายที่มี diagoxigenin สำหรับ ISH. การสอบสวนนี้มีปฏิกิริยาตอบสนอง การเกิดโรคกุ้งฝ้ายกุ้งกุลาดำ (ดูภาพที่แทรกอยู่ในรูป. 1F) ลำดับของ 18S rRNA ยีนนี้ส่วนที่มีความเป็นเอกลักษณ์ที่94% ที่จะเป็นสมาชิกของพืชและสัตว์ Pleistophora ที่ซึ่งปรากฏอยู่ห่างจากเอสพีพีEnterocytozoon ขึ้นอยู่กับซุrRNA ยีนเชื้อชาติ (Stentiford et al., 2013) นอกจากนี้ยังอธิบายว่าทำไมการสอบสวน EHP ไม่ตอบสนองต่อการข้าม microsporidium ของโรคกุ้งฝ้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 . ใน situ hybridization ( ish ) อันดับเครดิต
3 หลักชนิดของฟาร์มกุ้ง ตามหน้า vannamei , หน้า
stylirostris กุ้งกุลาดำ และถูกแสดงเป็นติดเชื้อโดยอันดับเครดิตที่ใช้ทั้งในเนื้อเยื่อ
และใน situ hybridization ( tourtip
et al . , 2009 ; tangprasittipap et al . , 2013 ) อย่างไรก็ตาม คุณเป็นสำคัญในการตรวจสอบตัวแทน
~
; เป็นเซลล์กับไม่มองเห็นสัญญาณของการผนวกหรือไมโครสปอริเดียนสปอร์โดยครีบ
พบเป็นบวกด้วยจ้ะ ในการศึกษาของเรา การโคลนยีน 18S rRNA บางส่วนถูก

โดยติดและใช้เป็นโพรบสำหรับคุณที่จะติดเชื้อ P . vannamei . ด้วยปฏิกิริยา
จ้านรวม basophilic ภายในไซโตปลาสซึม
( รูปที่ 1A ) ของเราหน้า stylirostris ตัวอย่างที่เก็บจากบรูไนในปี 2006
นอกจากนี้ยังพบการปรากฏตัวของ microsporidium สปอร์ภายใน
ตับ ( ภาพที่ 1c ) ที่ท่อเซลล์เยื่อมี
ปฏิกิริยาเป็นบวก โดยอิช ( ภาพดี ) ในทั้งสองกรณี , ตับและตับอ่อน
เป็นเพียงเนื้อเยื่อที่ทำปฏิกิริยาต่ออันดับเครดิตด้วย และผลที่ได้รับมีความสัมพันธ์กับอังกฤษ
รอยโรคที่ตรวจพบโดย H & E
ขึ้นไป ผลลัพธ์เหล่านี้จะคล้ายกับที่อธิบายได้ด้วย
tangprasittipap et al .