MATERIALS AND METHODSThe following

MATERIALS AND METHODS
The following methodology was used for obtaining the chromatogram of each standard phenolic compound as well as a mixture of all the phenolic compounds. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) analysis was performed using four different gradients of mobile phase in different run times. Collection of samples: The standard phenolic compounds were purchased from reputed manufacturers such as Quercetin Dihydrate & Salicylic Acid from Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd, Mumbai; Aspirin, L-Ascorbic Acid, Tannic Acid, Benzoic Acid, Gallic Acid & Catechol from Nice Chemicals Pvt. Ltd, Cochin; and Vanillin, Ellagic Acid, Phloroglucinol GR & Resorcinol Recryst from Merck Specialties Pvt. Ltd, Mumbai. Preparation of sample standards: 6mg of each standard compound was dissolved in 10 ml of HPLC grade Methanol resulting in a sample concentration of 600 μgm/ml. This was sonicated and then passed through Whatman Nylon Membrane Filter (0.45μm & 47mm diameter) before injecting it in the column. Specification of the HPLC instrument: Analysis of all the standard samples was performed using 515 HPLC pumps and 2489 UV/VIS detectors of Waters company, USA, having reverse phase water guard Column: Symmetry C18 (5μm, 4.6*250mm) and Hamilton microliter syringe using an injection volume of 20 μl. The data analysis was done using Empower 2 software. Methods for HPLC analysis: Four HPLC methods using different mobile phases selected on the basis of varying gradations of solvent systems in specific retention times and elute detections were used [8]. In general, it was found that UV detection was quite pronounced at wavelengths of 280 nm and 360 nm using a flow rate of 1.0 ml/min. The mobile phase gradient elutions and run times used in the four methods were as follows: Method A 1.Total run time was 22 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Methanol) and Solvent B (Acetic acid in water (1:25)) [13]. The gradient program was begun with 100 % B and was held at this concentration for the first 4 minutes. This was followed by 50 % eluent A for the next 6 minutes after which concentration of A was increased to 80 % for the next 10 minutes and then reduced to 50 % again for the following 2 minutes. Method B 1. Total run time was 25 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Methanol) and Solvent B (1% Acetic acid in water) [13]. The gradient program was started with 60 % of A and then changed to obtain 35, 10, 60 and 60 % of eluent A at 5, 10, 15 and 20 minutes respectively. Method C 1.Total run time was 30 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Acetonitrile) and Solvent B (0.1% Phosphoric acid in water) [14]. The gradient program was begun with 85 % B and was held at this concentration for the first 12 minutes. This was followed by 75 % eluent B for the next 10 minutes after which its concentration was again increased to 85 % for the next 8 minutes. Method D 1.Total run time was 45 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Acetonitrile) and Solvent B (0.1% Phosphoric acid in water) [15]. The gradient program was started with 8 % of A for the first 35 minutes and then increased to 22 % for the next 10 minutes before bringing it down again to 8 %.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการThe following methodology was used for obtaining the chromatogram of each standard phenolic compound as well as a mixture of all the phenolic compounds. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) analysis was performed using four different gradients of mobile phase in different run times. Collection of samples: The standard phenolic compounds were purchased from reputed manufacturers such as Quercetin Dihydrate & Salicylic Acid from Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd, Mumbai; Aspirin, L-Ascorbic Acid, Tannic Acid, Benzoic Acid, Gallic Acid & Catechol from Nice Chemicals Pvt. Ltd, Cochin; and Vanillin, Ellagic Acid, Phloroglucinol GR & Resorcinol Recryst from Merck Specialties Pvt. Ltd, Mumbai. Preparation of sample standards: 6mg of each standard compound was dissolved in 10 ml of HPLC grade Methanol resulting in a sample concentration of 600 μgm/ml. This was sonicated and then passed through Whatman Nylon Membrane Filter (0.45μm & 47mm diameter) before injecting it in the column. Specification of the HPLC instrument: Analysis of all the standard samples was performed using 515 HPLC pumps and 2489 UV/VIS detectors of Waters company, USA, having reverse phase water guard Column: Symmetry C18 (5μm, 4.6*250mm) and Hamilton microliter syringe using an injection volume of 20 μl. The data analysis was done using Empower 2 software. Methods for HPLC analysis: Four HPLC methods using different mobile phases selected on the basis of varying gradations of solvent systems in specific retention times and elute detections were used [8]. In general, it was found that UV detection was quite pronounced at wavelengths of 280 nm and 360 nm using a flow rate of 1.0 ml/min. The mobile phase gradient elutions and run times used in the four methods were as follows: Method A 1.Total run time was 22 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Methanol) and Solvent B (Acetic acid in water (1:25)) [13]. The gradient program was begun with 100 % B and was held at this concentration for the first 4 minutes. This was followed by 50 % eluent A for the next 6 minutes after which concentration of A was increased to 80 % for the next 10 minutes and then reduced to 50 % again for the following 2 minutes. Method B 1. Total run time was 25 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Methanol) and Solvent B (1% Acetic acid in water) [13]. The gradient program was started with 60 % of A and then changed to obtain 35, 10, 60 and 60 % of eluent A at 5, 10, 15 and 20 minutes respectively. Method C 1.Total run time was 30 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Acetonitrile) and Solvent B (0.1% Phosphoric acid in water) [14]. The gradient program was begun with 85 % B and was held at this concentration for the first 12 minutes. This was followed by 75 % eluent B for the next 10 minutes after which its concentration was again increased to 85 % for the next 8 minutes. Method D 1.Total run time was 45 minutes 2.Gradient elution of two solvents was used- Solvent A (Acetonitrile) and Solvent B (0.1% Phosphoric acid in water) [15]. The gradient program was started with 8 % of A for the first 35 minutes and then increased to 22 % for the next 10 minutes before bringing it down again to 8 %.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
ดังต่อไปนี้วิธีการที่ใช้สำหรับการได้รับ chromatogram ของแต่ละสารประกอบฟีนอลมาตรฐานเช่นเดียวกับที่มีส่วนผสมของสารประกอบฟีนอ ที่มีประสิทธิภาพสูงโครมาโตเหลว (HPLC) การวิเคราะห์ได้ดำเนินการใช้สี่การไล่ระดับสีที่แตกต่างกันของเฟสเคลื่อนที่ในระยะเวลาที่ต่างกัน การเก็บตัวอย่าง: สารประกอบฟีนอมาตรฐานกำลังซื้อจากผู้ผลิตที่มีชื่อเสียงเช่น Quercetin Dihydrate และ Salicylic Acid จากห้องปฏิบัติการวิจัย Sisco Pvt จำกัด มุมไบ; แอสไพริน, L-Ascorbic Acid, แทนนิคกรดเบนโซอิคกรดกรดฝรั่งเศสและ catechol จากสารเคมีที่ดี Pvt จำกัด ตะเภา; และวานิล, Ellagic Acid, Phloroglucinol GR & Resorcinol Recryst จากเมอร์พิเศษ Pvt จำกัด มุมไบ การจัดทำมาตรฐานตัวอย่าง: 6mg ของแต่ละสารมาตรฐานถูกละลายใน 10 มิลลิลิตรเกรด HPLC เมทานอลส่งผลให้ความเข้มข้นของกลุ่มตัวอย่าง 600 μgm / ml นี้ถูก sonicated และผ่านแล้วผ่าน Whatman ไนล่อนกรองเมมเบรน (0.45μmและ 47mm เส้นผ่าศูนย์กลาง) ก่อนที่จะฉีดในคอลัมน์ สเปคของเครื่อง HPLC: การวิเคราะห์ของทุกตัวอย่างมาตรฐานที่ได้ดำเนินการโดยใช้วิธี HPLC 515 ปั๊มและ 2489 UV / VIS ตรวจจับของ บริษัท วอเตอร์ส, สหรัฐอเมริกามีน้ำเฟสกลับยามคอลัมน์: สมมาตร C18 (5μm 4.6 * 250 มม) และแฮมิลตันเข็มฉีดยาไมโครลิตร โดยใช้ปริมาณการฉีด 20 ไมโครลิตร การวิเคราะห์ข้อมูลที่ได้กระทำโดยใช้อำนาจ 2 ซอฟแวร์ วิธีการในการวิเคราะห์ HPLC: สี่วิธี HPLC โดยใช้โทรศัพท์มือถือที่แตกต่างกันขั้นตอนที่เลือกบนพื้นฐานของความแตกต่างของระบบการไล่ตัวทำละลายในช่วงเวลาการเก็บรักษาที่เฉพาะเจาะจงและการตรวจจับชะถูกนำมาใช้ [8] โดยทั่วไปพบว่าการตรวจจับรังสียูวีค่อนข้างเด่นชัดในช่วงความยาวคลื่น 280 นาโนเมตรของและ 360 นาโนเมตรโดยใช้อัตราการไหล 1.0 มล. / นาที ลาดเฟสเคลื่อนที่ elutions และเรียกใช้ในครั้งสี่วิธีดังนี้วิธี 1.Total เวลาทำงาน 22 นาที 2.Gradient ชะสองตัวทำละลายเป็น used- Solvent (เมทานอล) และตัวทำละลาย B (กรดอะซิติกในน้ำ (01:25)) [13] โปรแกรมการไล่ระดับสีได้รับการเริ่มต้นด้วย B 100% และได้รับการจัดขึ้นที่ความเข้มข้นนี้ได้ 4 นาทีแรก ตามด้วยตัวชะ 50% ต่อไปอีก 6 นาทีหลังจากที่ความเข้มข้นของเพิ่มขึ้นถึง 80% เป็นเวลา 10 นาทีแล้วลดลงถึง 50% อีกต่อไป 2 นาที วิธี B 1. เวลาทำงานรวมเป็น 25 นาที 2.Gradient ชะสองตัวทำละลายเป็น used- Solvent (เมทานอล) และตัวทำละลาย B (1% กรดอะซิติกในน้ำ) [13] โปรแกรมการไล่ระดับสีเริ่มต้นด้วย 60% ของแล้วเปลี่ยนที่จะได้รับ 35, 10, 60 และ 60% ของตัวชะที่ 5, 10, 15 และ 20 นาทีตามลำดับ วิธี C 1.Total เวลาทำงานเป็นเวลา 30 นาที 2.Gradient ชะสองตัวทำละลายเป็น used- Solvent (Acetonitrile) และตัวทำละลาย B (กรดฟอสฟอรัส 0.1% ในน้ำ) [14] โปรแกรมการไล่ระดับสีได้รับการเริ่มต้นด้วย B 85% และได้รับการจัดขึ้นที่ความเข้มข้นนี้สำหรับ 12 นาทีแรก ตามด้วย 75% ชะ B ต่อไปอีก 10 นาทีหลังจากที่ความเข้มข้นเพิ่มขึ้นอีก 85% ต่อไปอีก 8 นาที วิธี D 1.Total เวลาทำงานเป็นเวลา 45 นาที 2.Gradient ชะสองตัวทำละลายเป็น used- Solvent (Acetonitrile) และตัวทำละลาย B (กรดฟอสฟอรัส 0.1% ในน้ำ) [15] โปรแกรมการไล่ระดับสีเริ่มต้นด้วย 8% ของสำหรับครั้งแรก 35 นาทีและจากนั้นเพิ่มขึ้นถึง 22% ต่อไปอีก 10 นาทีก่อนที่จะนำมันลงอีก 8%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
วิธีการต่อไปนี้ที่ถูกใช้สำหรับการได้รับ chromatogram ของแต่ละมาตรฐาน สารประกอบฟีนอลิก รวมทั้งส่วนผสมของสารประกอบฟีนอลทั้งหมด . วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) วิเคราะห์สี่ไล่สีที่แตกต่างกันของเฟสเคลื่อนที่ในเวลาเรียกใช้ที่แตกต่างกัน คอลเลกชันของตัวอย่างมาตรฐานสารประกอบฟีนอล ซื้อจากผู้ผลิตที่มีชื่อเสียงเช่นเควอซิติน 2 & salicylic acid จากห้องปฏิบัติการวิจัย Sisco Pvt . Ltd มุมไบ ; แอสไพริน , L-Ascorbic Acid กรดเบนโซอิก , กรดแทนนิค , เพิ่มขึ้นจาก&แคติคอลดีเคมี Pvt . Ltd , Cochin และ VANILLIN , ลาจิก กรด , ฟลอโรกลูซินอล GR &รี recryst อาหาร Pvt . Ltd จากเมอร์ค , Mumbai .การเตรียมมาตรฐานตัวอย่าง : 6mg ของแต่ละมาตรฐานสารถูกละลายใน 10 ml ของ HPLC เกรด ส่งผลให้ความเข้มข้นของเมทานอลจำนวน 600 μกรัม / มล. นี้ sonicated แล้วผ่านเยื่อกรอง whatman ไนลอน ( 0.45 μ M &เส้นผ่าศูนย์กลาง 47mm ) ก่อนฉีด ในคอลัมน์ คุณสมบัติของเครื่องมือ HPLCการวิเคราะห์มาตรฐานทั้งหมด จำนวน 515 HPLC โดยใช้ปั๊มและ 2489 UV / VIS ตรวจจับของบริษัทสหรัฐอเมริกาน้ำ มีคอลัมน์กลับเฟสน้ำยาม : c18 สมมาตร ( 5 μม. 4.6 * 250 มม. ) และเข็มฉีดยาไมโครลิตรแฮมิลตันใช้ปริมาณ 20 μ . การวิเคราะห์ข้อมูลได้ใช้พลัง 2 ซอฟต์แวร์ วิธีการในการวิเคราะห์ HPLC :สี่วิธีการที่ใช้และแตกต่างกันมือถือระยะที่เลือกบนพื้นฐานของการเปลี่ยนแปลงหนึ่งของระบบตัวทำละลายในเวลาที่เฉพาะเจาะจงและ elute ตรวจจับการใช้ [ 8 ] โดยทั่วไปพบว่าตรวจจับยูวีค่อนข้างเด่นชัดที่ความยาวคลื่น 280 nm และ 360 nm ใช้อัตราการไหล 1.0 มล. / นาที เฟสเคลื่อนที่และการเรียกใช้ elutions ครั้ง ใน 4 วิธี ดังนี้วิธีที่ 1 . ใช้ เวลา รวมเป็น 22 นาที 2 . การใช้ตัวทำละลายที่ใช้สอง - ตัวทำละลาย ( methanol ) และ B ( กรดละลายในน้ำ ( 25 ) ) [ 13 ] โปรแกรมไล่ระดับเริ่มต้นด้วย 100 % B และถูกจัดขึ้นที่ความเข้มข้นสำหรับ 4 นาทีก่อนนี้ตามด้วย 50% นี้เป็นในอีก 6 นาทีหลังจากที่ความเข้มข้นของเพิ่มเป็น 80 % ในอีก 10 นาที แล้วลดลงเหลือ 50 % อีก 2 นาทีต่อไปนี้ วิธี B 1 ใช้ เวลา รวมเป็น 25 นาที 2 . การใช้ตัวทำละลายที่ใช้สอง - ตัวทำละลาย ( methanol ) และตัวทำละลาย B ( 1% กรดอะซิติกในน้ำ ) [ 13 ]โปรแกรมการเริ่มต้นกับ 60% ของแล้วก็เปลี่ยนให้ได้ 35 , 10 , 60 และ 60 % ของตัวที่ 5 , 10 , 15 และ 20 นาที ตามลำดับ วิธีการ C 1 . ใช้ เวลา รวมเป็น 30 นาที 2 . การใช้ตัวทำละลายที่ใช้สอง - ตัวทำละลาย ( ไน ) และตัวทำละลาย B ( 0.1% กรดฟอสฟอรัสในน้ำ ) [ 14 ]โปรแกรมไล่ระดับเริ่มต้นด้วย 85 % B และถูกจัดขึ้นที่ความเข้มข้นสำหรับ 12 นาทีก่อน นี้ตามด้วย 75 % ตัว B สำหรับถัดไป 10 นาทีหลังจากที่ความเข้มข้นของมันอีกครั้งเพิ่มขึ้นเป็น 85% ในอีก 8 นาที วิธี D 1 . ใช้ เวลารวม 45 นาที 2 . การใช้ตัวทำละลายที่ใช้สอง - ตัวทำละลาย ( ไน ) และตัวทำละลาย B ( 01 เปอร์เซ็นต์ กรดฟอสฟอริค ในน้ำ ) [ 15 ] โปรแกรมการเริ่มต้นกับ 8% ของสำหรับ 35 นาทีแรก และเพิ่มขึ้นร้อยละ 22 ในอีก 10 นาที ก่อนนำลงอีกถึง 8 %