2. Materials and methods2.1. Fungal

2. Materials and methods
2.1. Fungal strains
The strain 30s-3-13, a mutant of T. reesei Rut C30 (ATCC 56765,
purchased from the Center of National Collection for Industrial
Microorganism, Beijing, China), was obtained by mutagenesis with
diethyl sulfate and then UV in our laboratory (Wu et al., 2011).
The strain was maintained on potato dextrose agar at 4 ◦C and
sub-cultured once in every three months.
2.2. Culture conditions
Spore suspension of 30s-3-13 was transferred into a 250 ml
Erlenmeyer flask containing 50 ml medium (g/l: microcrystalline
cellulose (MC) 20, corn steep liquor 15, glucose 10) with a final
concentration of 106–7/ml. After 24 h cultivation at 28 ◦C, 180 rpm,
a 5% (v/v) inoculum was inoculated into a 5-l stirred fermentor
(BIOTECH-5BG, Shanghai Baoxing Bio-Engineering Equipment Co.
Ltd, China) with working volume of 3 l, which contained MC 50 g/l,
corn steep liquor 17 g/l, (NH4)2SO4 5 g/l, KH2PO4 6 g/l, MgSO4 1 g/l,
CaCO3 2.5 g/l, glycerol 2.5 g/l, Tween-80 2 ml/l, initial pH 5.0. The
temperature was controlled at 26 ◦C, dissolved oxygen (DO) was
controlled above 30%, and pH was maintained at 5.0. Samples were
collected intermittently for analysis.
Fed-batch fermentation was carried out in 5-l stirred fermentor
with an initial volume of 2.4 l. Initial MC concentration was
30 g/l and the concentrations of other components were the same
as that in batch fermentation. After 30 h, MC was added in batches.
Temperature, DO and pH was controlled the same as in batch fermentation.
2.3. Analytical procedures
Cellulase activity was determined using filter paper assay as
described by Ghose (1987). Soluble protein was measured by a
modified Lowry method using bovine serum albumin as standard
(Lowry et al., 1951). Reducing sugar was measured by dinitrosalicylic
acid method, and the individual sugar concentrations were
detected by high performance liquid chromatography (Aminex
HPX-87P, 300 × 7.8 mm, at 70 ◦C with RI-detector) with distilled
water as mobile phase at a flow rate of 0.6 ml/min. Ammonia nitrogen
was measured referring to the reported (Liang et al., 2006

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เชื้อราสายพันธุ์พันธุ์ 30s-3-13, mutant ของต. reesei รูด C30 (ATCC 56765ซื้อจากศูนย์ของชาติคอลเลกชันสำหรับอุตสาหกรรมจุลินทรีย์ ปักกิ่ง จีน), กล่าว โดย mutagenesis ด้วยซัลเฟต diethyl กแล้ว UV ในห้องปฏิบัติการของเรา (Wu et al., 2011)สายพันธุ์ที่อยู่ในมันฝรั่งขึ้น agar ที่ 4 ◦C และย่อยอ่างหนึ่งครั้งในทุกสามเดือน2.2. วัฒนธรรมเงื่อนไขมีการโอนย้ายสปอร์ทุเลา 30s-3-13 เป็น 250 mlประกอบด้วยขนาดกลาง 50 ml (g/l:จุลหนาว erlenmeyerเซลลูโลส (MC) 20 ข้าวโพดสูงชันเหล้า 15 กลูโคส 10) กับตัวสุดท้ายเข้มข้น 106-7/ml หลังจากปลูก 24 ชมที่ 28 ◦C, 180 รอบต่อนาทีinoculum 5% (v/v) ที่ inoculated ใน fermentor คนที่ 5 l(ไบโอเทค 5BG เซี่ยงไฮ้ Baoxing ชีวภาพอุปกรณ์ จำกัดจำกัด จีน) ด้วยการทำเสียงของ 3 l ซึ่งประกอบด้วย MC 50 g/lสูงชันข้าวโพดสุรา 17 g/l, (NH4) 2SO4 5 g/l, KH2PO4 6 g/l, MgSO4 1 g/lCaCO3 2.5 g/l กลีเซอร 2.5 g/l, Tween-2 ml/l, pH เริ่มต้น 5.0 80 ที่มีควบคุมอุณหภูมิที่ 26 ◦C มีปริมาณออกซิเจนละลาย (DO)ควบคุมเหนือ 30% และค่า pH ที่คงที่ 5.0 ตัวอย่างดีรวบรวมเป็นระยะ ๆ สำหรับการวิเคราะห์เฟดชุดหมักถูกดำเนินใน fermentor คน 5 lมีปริมาตรความเข้มข้นเริ่มต้น MC l. 2.4 ได้30 g/l และความเข้มข้นของส่วนประกอบอื่น ๆ ก็เหมือนกันเป็นที่ในชุดหมัก หลังจาก 30 h, MC ถูกเพิ่มในชุดอุณหภูมิ DO และ pH ถูกควบคุมเดียวกันกับชุดหมัก2.3 การขั้นตอนที่วิเคราะห์กิจกรรม cellulase ถูกกำหนดโดยใช้กระดาษกรองวิเคราะห์เป็นอธิบาย โดย Ghose (1987) โปรตีนที่ละลายน้ำถูกวัดโดยการปรับเปลี่ยนวิธีการ Lowry ใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน(Lowry et al., 1951) ลดน้ำตาลถูกวัด โดย dinitrosalicylicวิธีกรด และที่ความเข้มข้นของน้ำตาลแต่ละตรวจพบ โดย chromatography เหลวประสิทธิภาพสูง (AminexHPX-87P, 300 × 7.8 มม. 70 ◦C กับ RI-เครื่องตรวจจับที่) กับกลั่นน้ำเป็นระยะที่เคลื่อนที่อัตราการไหลของแอมโมเนียไนโตรเจน 0.6 ml/นาทีมีวัดอ้างอิงกับการรายงาน (Liang et al., 2006

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เชื้อราสายพันธุ์สายพันธุ์ 30s-3-13 กลายพันธุ์ของ T. reesei Rut C30 (ATCC 56765, ซื้อจากศูนย์แห่งชาติเพื่อการเก็บอุตสาหกรรมจุลินทรีย์, ปักกิ่ง, จีน) ได้มาจากการกลายพันธุ์ที่มีซัลเฟตdiethyl แล้วรังสียูวีของเรา ห้องปฏิบัติการ (Wu et al., 2011). สายพันธุ์ที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่งที่ 4 ◦Cและย่อยเลี้ยงหนึ่งครั้งในทุกสามเดือน. 2.2 วัฒนธรรมเงื่อนไขการระงับสปอร์ของยุค 30-3-13 ถูกย้ายเป็น 250 มล. ขวด Erlenmeyer มี 50 มล. ขนาดกลาง (g / l: microcrystalline เซลลูโลส (MC) 20, ข้าวโพดสุราสูงชัน 15 กลูโคส 10) เป็นครั้งสุดท้ายที่มีความเข้มข้นของ106-7 / ml หลังจากการเพาะปลูกตลอด 24 ชั่วโมงวันที่ 28 ◦C 180 รอบต่อนาที, 5% (v / v) หัวเชื้อได้รับเชื้อเป็น 5 ลิตรกวนถังหมัก(เทคโนโลยีชีวภาพ-5BG เซี่ยงไฮ้ Baoxing Bio-วิศวกรรม Equipment Co. , Ltd ประเทศจีน) มีปริมาณการทำงาน 3 ลิตรซึ่งประกอบด้วย MC 50 กรัม / ลิตร, ข้าวโพดสุราสูงชัน 17 g / l (NH4) 2SO4 5 g / l, KH2PO4 6 กรัม / ลิตร, MgSO4 1 กรัม / ลิตร, CaCO3 2.5 g / l, กลีเซอรีน 2.5 กรัม / ลิตร, Tween-80 2 มิลลิลิตร / ลิตร, pH เริ่มต้น 5.0 อุณหภูมิถูกควบคุมที่ 26 ◦Cออกซิเจนที่ละลายในน้ำ (DO) ได้รับการควบคุมดังกล่าวข้างต้น30% และพีเอชได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 5.0 ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมเป็นระยะ ๆ สำหรับการวิเคราะห์. หมักเฟดชุดได้ดำเนินการใน 5 ลิตรกวนถังหมักที่มีปริมาณการเริ่มต้นของ2.4 ลิตร เริ่มต้นความเข้มข้น MC เป็น30 g / l และความเข้มข้นขององค์ประกอบอื่น ๆ ได้เหมือนกันว่าในการหมักชุด หลังจาก 30 ชั่วโมง MC ถูกเพิ่มเข้ามาใน batches. อุณหภูมิ, DO และพีเอชที่ถูกควบคุมเช่นเดียวกับในการหมักชุด. 2.3 การวิเคราะห์กิจกรรมเซลลูเลสถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบกระดาษกรองเป็นอธิบายโดยGhose (1987) โปรตีนที่ละลายน้ำได้ถูกวัดโดยวิธีโลว์รีย์ปรับเปลี่ยนโดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน(Lowry et al., 1951) ลดน้ำตาลโดยวัดจาก dinitrosalicylic วิธีกรดและความเข้มข้นของน้ำตาลของแต่ละบุคคลที่ถูกตรวจพบโดยประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (Aminex HPX-87P, 300 × 7.8 มิลลิเมตรที่ 70 ◦Cกับ RI-เครื่องตรวจจับ) ที่มีการกลั่นน้ำเป็นเฟสเคลื่อนที่ในการไหลอัตรา 0.6 มล. / นาที แอมโมเนียไนโตรเจนวัดหมายถึงรายงาน (เหลียง et al., 2006

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . สายพันธุ์ของเชื้อราสายพันธุ์ 30s-3-13
, T . reesei กลายพันธุ์ของร่อง C30 และ 56765
, ซื้อจากศูนย์แห่งชาติสำหรับอุตสาหกรรม
จุลินทรีย์ , ปักกิ่ง , จีน ) , ได้รับการพร้อม
ไดซัลเฟต และ ยูวี ในห้องปฏิบัติการของเรา ( Wu et al . , 2011 ) .
สายพันธุ์ไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ที่◦
4 C และย่อยอาหารทุกๆสามเดือน
2.2 . เพาะเลี้ยงสปอร์แขวนลอยของ 30s-3-13
ถูกโอนไป 250 ml . ขวดบรรจุขนาด 50 มล.
เออร์เลนเมเยอร์ ( g / L :
เซลลูโลส Microcrystalline ( MC ) 20 , ข้าวโพดสุราสูงชัน 15 , กลูโคส 10 ) ที่มีความเข้มข้นสุดท้าย
ของ 106 – 7 / มิลลิลิตรหลังการเพาะ 24 H ที่ 28 ◦ C 180 รอบต่อนาที ,
5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เป็นเชื้อที่แยกได้เชื้อในถังหมักกวน
( biotech-5bg เซี่ยงไฮ้ Baoxing ชีวภาพวิศวกรรมอุปกรณ์ Co .
Ltd , China ) กับปริมาณการทำงานของ 3 ลิตร ซึ่งมี MC 50 กรัม / ลิตร
ข้าวโพดสุราสูงชัน 17 กรัม / ลิตร ( NH4 ) 2so4 5 กรัม / ลิตร kh2po4 6 G / L , MgSO4 ใ 1 g / l ,
CaCO3 2.5 กรัมต่อลิตร ฉันกลีเซอรอล 2.5 กรัม / ลิตรมิลลิลิตร tween-80 2 ลิตร pH เริ่มต้น 5.0 .
อุณหภูมิถูกควบคุมไว้ที่ 26 ◦ C , ออกซิเจนละลาย ( DO ) คือ
ควบคุมเหนือ 30% , และ pH ไว้ที่ 5.0 . จำนวน
เก็บรวบรวมเป็นระยะ ๆสำหรับการวิเคราะห์ .
ที่ได้รับการหมักแบบอาหารเหลวได้ดำเนินการในถังหมักกวน
ด้วยปริมาณเริ่มต้นของ 2.4 ลิตร ความเข้มข้นเริ่มต้น MC
30 กรัม / ลิตรและที่ความเข้มข้นของส่วนประกอบอื่น ๆเหมือนเดิม
เป็นชุดการหมัก หลังจาก 30 ชั่วโมง พิธีกร ได้เพิ่มใน batches .
อุณหภูมิ และ pH ควบคุมเช่นเดียวกับในการหมักแบบ
2.3 วิเคราะห์ขั้นตอน
กิจกรรมของเอนไซม์ถูกกำหนดใช้กรองกระดาษ ( เช่น
อธิบายโดย ghose ( 1987 ) ปริมาณโปรตีนที่ถูกวัดด้วยวิธีการดัดแปลงการใช้เบส

( อัลบูมินเป็นมาตรฐานเบส et al . , 1951 ) ลดน้ำตาลถูกวัดโดยวิธีกรด dinitrosalicylic

และความเข้มข้นน้ำตาลแต่ละตัวที่ตรวจพบโดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( aminex
hpx-87p 300 × 7.8 มิลลิเมตรที่ 70 ◦ C กับเครื่องกลั่นน้ำ
ริ ) กับอัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่ที่ 0.6 มิลลิลิตร / นาที
แอมโมเนีย - ไนโตรเจนได้อ้างถึงรายงาน ( Liang et al . , 2006