The development of rapid, easy and

The development of rapid, easy and safe non-infectious HIV-1 phenotyping methods is crucial for the management of subjects harbouring drug resistance mutations. Such methods have been reported previously.However, ideally, phenotypic systems would mimic physiological conditions; therefore, eukaryotic cells have been applied to develop new phenotypic systems using reporter genes.Lindsten et al.8 and Majerova-Uhlikova et al.reported a new protease assay based on the transient expression of a GFP–PR fusion protein. Treatment with protease inhibitors results in a dose-dependent accumulation of the GFP, which can be used to calculate the drug IC50. In the present study, we extended, improved and validated with clinical samples this phenotypic assay. We modified the cloning vector to facilitate the introduction of HIV-1 proteases from HIV-1 isolates of infected subjects. To do so, we replaced the original HIV-1 protease from the plasmid containing the GFP–PR with a polylinker before cloning 46 clinical isolates to further evaluate the method. We also improved detection of the GFP reporter gene using the molecular mechanism described above. When comparisons between values obtained by our assay and those of classic phenotyping assays were performed, the results showed that our method had a high degree of reliability and was comparable to other, widely used assays based on both genotypic and phenotypic data. Excellent correlations coefficients were observed in all cases. Therefore, we were able to evaluate and validate the predictive potential of our noninfectious method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การพัฒนาอย่างรวดเร็ว ง่าย และปลอดภัยไม่ติดเชื้อเอชไอวี-1 phenotyping วิธีเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการจัดการวิชารีวิวกลายพันธุ์ต้านทานยาเสพติด วิธีดังกล่าวมีการรายงานก่อนหน้านี้ อย่างไรก็ตาม,,ระบบฟีโนไทป์จะเลียนแบบสภาพสรีรวิทยา ดังนั้น เซลล์ eukaryotic ได้ถูกประยุกต์ใช้เพื่อพัฒนาระบบฟีโนไทป์ใหม่ใช้ยีน reporter Lindsten et al.8 และ Majerova Uhlikova et al.reported assay เป็นโปรติเอสใหม่อิงนิพจน์ transient GFP – PR โปรตีนฟิวชั่น รักษา ด้วยรตีผลลัพธ์ในการสะสมขึ้นอยู่กับปริมาณของ GFP ซึ่งสามารถใช้ในการคำนวณยา IC50 ในการศึกษาปัจจุบัน เราขยาย ปรับปรุง และตรวจสอบกับทางคลินิกอย่างทดสอบนี้ฟีโนไทป์ เราแก้ไข vector cloning เพื่อความสะดวกในการแนะนำของเอชไอวี-1 โปรตีเอสจากเอชไอวี-1 แยกวัตถุติดเชื้อ การทำงาน เราแทนโปรติเอสเอชไอวี-1 ฉบับจาก plasmid ที่ประกอบด้วย GFP – ประชาสัมพันธ์กับการ polylinker ก่อนที่จะโคลนทางคลินิก 46 แยกการประเมินวิธีการต่อไป นอกจากนี้เรายังปรับปรุงการตรวจหายีน reporter GFP ที่ใช้กลไกในระดับโมเลกุลอธิบายไว้ข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบค่าที่ได้ โดยการทดสอบของเราและของคลาสสิก phenotyping assays ดำเนินการ ผลการศึกษาพบว่า วิธีของเรามีความน่าเชื่อถือระดับสูง และเทียบเท่าอื่น ๆ ใช้ assays อิงข้อมูลทั้งจีโนไทป์ และฟีโนไทป์ ค่าสัมประสิทธิ์ความสัมพันธ์ยอดเยี่ยมถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้น เราก็สามารถที่จะประเมิน และตรวจสอบศักยภาพของวิธีการของเรา noninfectious ทำนาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การพัฒนาอย่างรวดเร็วง่ายและปลอดภัยไม่ติดเชื้อเอชไอวี -1 วิธี phenotyping เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการจัดการของอาสาสมัครเก็บงำกลายพันธุ์ต้านทานยาเสพติด วิธีการดังกล่าวได้รับการรายงาน previously.However นึกคิดระบบฟีโนไทป์จะเลียนแบบสภาพร่างกาย; ดังนั้นเซลล์ยูคาริโอได้ถูกนำมาใช้ในการพัฒนาระบบใหม่โดยใช้ฟีโนไทป์นักข่าว genes.Lindsten et al.8 และ Majerova-et Uhlikova al.reported ทดสอบน้ำย่อยใหม่บนพื้นฐานของการแสดงออกชั่วคราวของโปรตีน GFP-PR ฟิวชั่น การรักษาด้วยสารยับยั้งเอนไซม์โปรติเอผลลัพธ์ในการสะสมปริมาณขึ้นอยู่กับ GFP ซึ่งสามารถนำมาใช้ในการคำนวณค่า IC50 ยาเสพติด ในการศึกษาปัจจุบันเราขยายปรับปรุงและตรวจสอบกับตัวอย่างนี้ทางคลินิกทดสอบฟีโนไทป์ เราปรับเปลี่ยนพาหะเพื่ออำนวยความสะดวกการแนะนำของ HIV-1 โปรตีเอสจาก HIV-1 สายพันธุ์ของอาสาสมัครที่ติดเชื้อ จะทำเช่นนั้นเราได้แทนที่เดิม HIV-1 protease จากพลาสมิดที่มี GFP-PR กับ polylinker ก่อนโคลน 46 ไอโซเลททางคลินิกเพื่อประเมินวิธีการที่ เรายังมีการปรับปรุงการตรวจสอบของผู้สื่อข่าวยีน GFP ใช้กลไกในระดับโมเลกุลที่อธิบายข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา จะทำเช่นนั้นเราได้แทนที่เดิม HIV-1 protease จากพลาสมิดที่มี GFP-PR กับ polylinker ก่อนโคลน 46 ไอโซเลททางคลินิกเพื่อประเมินวิธีการที่ เรายังมีการปรับปรุงการตรวจสอบของผู้สื่อข่าวยีน GFP ใช้กลไกในระดับโมเลกุลที่อธิบายข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา จะทำเช่นนั้นเราได้แทนที่เดิม HIV-1 protease จากพลาสมิดที่มี GFP-PR กับ polylinker ก่อนโคลน 46 ไอโซเลททางคลินิกเพื่อประเมินวิธีการที่ เรายังมีการปรับปรุงการตรวจสอบของผู้สื่อข่าวยีน GFP ใช้กลไกในระดับโมเลกุลที่อธิบายข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา เราแทนที่เดิม HIV-1 protease จากพลาสมิดที่มี GFP-PR กับ polylinker ก่อนโคลน 46 ไอโซเลททางคลินิกเพื่อประเมินวิธีการที่ เรายังมีการปรับปรุงการตรวจสอบของผู้สื่อข่าวยีน GFP ใช้กลไกในระดับโมเลกุลที่อธิบายข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา เราแทนที่เดิม HIV-1 protease จากพลาสมิดที่มี GFP-PR กับ polylinker ก่อนโคลน 46 ไอโซเลททางคลินิกเพื่อประเมินวิธีการที่ เรายังมีการปรับปรุงการตรวจสอบของผู้สื่อข่าวยีน GFP ใช้กลไกในระดับโมเลกุลที่อธิบายข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบและของผู้ตรวจ phenotyping คลาสสิกของเราได้ดำเนินการผลการศึกษาพบว่าวิธีการของเรามีระดับสูงของความน่าเชื่อถือและเมื่อเปรียบเทียบกับคนอื่น ๆ , การตรวจใช้กันอย่างแพร่หลายอยู่บนพื้นฐานของทั้งพันธุกรรมและฟีโนไทป์ข้อมูล ความสัมพันธ์ที่ดีเยี่ยมสัมประสิทธิ์ถูกตั้งข้อสังเกตในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงมีความสามารถในการประเมินและตรวจสอบที่มีศักยภาพในการทำนายของวิธี noninfectious ของเรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพัฒนาอย่างรวดเร็วง่ายและปลอดภัยไม่ติดเชื้อ HIV-1 อวิธีการเป็นสิ่งสำคัญในการจัดการกับการดื้อยาและการกลายพันธุ์ วิธีการดังกล่าวมีรายงานก่อนหน้านี้ อย่างไรก็ตาม นอกจากระบบจะเลียนแบบเงื่อนไขทางสรีรวิทยาของเซลล์ยูคาริโอติกเซลล์ จึงถูกนำมาใช้เพื่อพัฒนาระบบคุณสมบัติใหม่ใช้นักข่าว ยีน lindsten et al . 8 และ majerova uhlikova et al.reported ใหม่เอส ( ขึ้นอยู่กับมีการแสดงออกของ GFP และ PR ของโปรตีน . การรักษาด้วยเอนไซม์โปรตีเอสอินฮิบิเตอร์มีผลในการรายงานของ GFP ซึ่งสามารถใช้คำนวณยา ic50 . ในการศึกษาปัจจุบันที่เราขยาย ปรับปรุง และการตรวจสอบกับตัวอย่างทางคลินิก การทดสอบคุณสมบัตินี้ เราปรับเปลี่ยนการโคลนเวกเตอร์เพื่ออำนวยความสะดวกเบื้องต้นของเชื้อ HIV-1 สายพันธุ์ proteases จากกลุ่มที่ติดเชื้อ ให้เราเปลี่ยนโปรในต้นฉบับจากพลาสมิดที่มี GFP –พีอาร์กับ polylinker ก่อนการแยก 46 ทางคลินิกเพิ่มเติม ประเมินวิธีการ เรายังมีการปรับปรุงการตรวจสอบของผู้สื่อข่าว ยีน GFP โดยใช้โมเลกุลกลไกที่อธิบายข้างต้น เมื่อเปรียบเทียบระหว่างค่าที่ได้จากการทดสอบของเราและบรรดาวิธีการคลาสสิกแสดงอ พบว่าวิธีของเราได้ในระดับสูงของความน่าเชื่อถือและถูกเมื่อเทียบกับ อื่น ๆ , ใช้กันอย่างแพร่หลาย สามารถยึดทั้งผู้ป่วยและข้อมูลที่ใกล้เคียง . สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์พบว่ายอดเยี่ยมในทุกกรณี ดังนั้นเราจึงสามารถที่จะประเมิน และตรวจสอบศักยภาพพยากรณ์ของวิธี noninfectious ของเรา