Western blot analysisHepG2 cells we

Western blot analysisHepG2 cells were treated with varied concentrations of segeto-side I (0, 0.956, 9.56, 95.6 M) or 5-FU (0, 10.77, 107.7, 1077 M)and then cultured at 48 h. Total protein was extracted from thecells after 0.25% trypsin digestion and centrifuged with lysis buffercontaining protease inhibitor. The proteins were subject to 12%SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and after that transferredto a polyvinylidene difluoride (PVDF, Millipore Co., Bedford, MA)membrane at 4◦C for 4 h. The membrane was blocked with 5% driedmilk protein for 1 h and incubated at 4◦C overnight with the fol-lowing primary antibodies at a dilution of 1:500 rabbit anti-Baxand rabbit anti-Bcl-2. Each of the samples was washed (3×) withtriethanolamine-buffered saline (TBS) for 10 min. After that themembrane was incubated at room temperature for 1 h with a goatanti-rabbit horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodyat the same dilution ratio. The blots were visualized using ECL afterre-washing with TBS under the same conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

น้าตะวันตก analysisHepG2 ที่เซลล์ได้รับการรักษาด้วยหลากหลายความเข้มข้นของ segeto ฝั่งผม (0, 0.956, 9.56, 95.6 M) หรือ 5-FU (0, 10.77, 107.7 ม. 1077) และล้างแล้ว ที่ h. 48 รวมสกัดจาก thecells หลังจาก 0.25% ทริปซินย่อยโปรตีน และผลิตภัณฑ์กับสารยับยั้ง lysis buffercontaining โปรติเอส โปรตีนถูก แปลง 12% SDS-ตรวจสอบวิเคราะห์เจอิ และหลัง จากนั้น transferredto เยื่อ difluoride (PVDF มิลลิพอร์ Co. กลาสโกว์ MA) polyvinylidene ที่ 4◦C สำหรับ 4 h เมมเบรนเป็นบล็อกแบบ driedmilk 5% โปรตีนสำหรับ 1 h และได้รับการกกที่ 4◦C ข้ามคืนกับแอนติบอดีหลัก fol ควายเหล็กที่เจือจาง 1: 500 กระต่าย Baxand ป้องกันกระต่ายป้องกัน-Bcl-2 แต่ละตัวอย่างถูกล้าง (3 ×) บัฟเฟอร์ withtriethanolamine น้ำเกลือ (TBS) 10 นาที หลังจากที่ themembrane incubated อุณหภูมิห้องสำหรับ h 1 กับการ goatanti-กระต่ายเป็ดน้ำผันฮอสรอง antibodyat อัตราส่วนเจือจางเดียวกัน จัดถูกแสดงเป็นภาพด้วย ECL afterre ล้าง TBS ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เวสเทิร์เซลล์ analysisHepG2 เปื้อนได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของ segeto ข้างฉัน (0, 0.956, 9.56, 95.6? M) หรือ 5 FU (0, 10.77, 107.7, 1077? M) และจากนั้นเพาะเลี้ยงใน 48 ชั่วโมง โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดจาก thecells หลังจาก trypsin ย่อยอาหาร 0.25% และปั่นด้วยสลาย buffercontaining น้ำย่อยยับยั้ง โปรตีนเป็นเรื่องที่ข่าวคราว 12% SDS-polyacrylamide และหลังจาก transferredto ว่า difluoride Polyvinylidene (PVDF, อร์ค จำกัด , ฟอร์ด, MA) เมมเบรนที่4◦C 4 ชั่วโมง เมมเบรนถูกบล็อกไปด้วยโปรตีน driedmilk 5% เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและบ่มที่4◦Cค้างคืนกับ Fol-ควายเหล็กแอนติบอดีหลักที่เจือจาง 1: 500 ปีกระต่ายปีกระต่ายป้องกัน Baxand ป้องกัน Bcl-2 แต่ละกลุ่มตัวอย่างถูกล้าง (3 ×) withtriethanolamine บัฟเฟอร์น้ำเกลือ (TBS) เป็นเวลา 10 นาที หลังจาก themembrane ที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับพืชชนิดหนึ่ง goatanti กระต่าย peroxidase-ผันรอง antibodyat อัตราส่วนการเจือจางเดียวกัน blots ถูกมองเห็นโดยใช้ ECL afterre ซักผ้ากับ TBS ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Western blot analysishepg2 เซลล์ได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของ segeto ข้างฉัน ( 0 , 0.956 9.56 95.6 , , M ) หรือ 5-fu ( 0 , 10.77 107.7 อย่างดี , , M ) จากนั้นนำไปเลี้ยงที่เวลา 48 ชั่วโมง รวมโปรตีนสกัดจาก thecells หลังจากการย่อยเอนไซม์ 0.25% และระดับกับการสลาย buffercontaining protease inhibitor . โปรตีนเป็นเรื่อง 12 % SDS polyacrylamide gel electrophoresis และหลังจากนั้น transferredto เป็นีนไดฟลูออไรด์ ( PVDF , มิลลิ Co . , ฟอร์ด , MA ) เยื่อที่ 4 ◦ C เป็นเวลา 4 ชั่วโมง เมมเบรนอุดตัน 5% driedmilk โปรตีน 1 H และบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส◦ค้างคืนกับ fol lowing แอนติบอดีที่หลัก เจือจาง 1 : 500 แต้ม baxand กระต่ายกระต่าย anti-bcl-2 . ของแต่ละตัวอย่างถูกล้าง ( 3 × ) withtriethanolamine ในน้ำเกลือ ( TBS ) นาน 10 นาที หลังจากนั้น themembrane ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง กับ goatanti เอนไซม์ conjugated มัธยมกระต่าย . antibodyat อัตราส่วนการเจือจางเดียวกัน เป็นปรากฏการณ์การ blots เครื่องซักผ้ากับ TBS ECL afterre ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน