The ability to selectively alter ge

The ability to selectively alter genomic DNA sequences in vivo is a powerful tool for basic and applied research. The CRISPR/Cas9 system precisely mutates DNA sequences in a number of organisms. Here, the CRISPR/Cas9 system is shown to be effective in soybean by knocking-out a green fluorescent protein (GFP) transgene and modifying nine endogenous loci.
RESULTS:
Targeted DNA mutations were detected in 95% of 88 hairy-root transgenic events analyzed. Bi-allelic mutations were detected in events transformed with eight of the nine targeting vectors. Small deletions were the most common type of mutation produced, although SNPs and short insertions were also observed. Homoeologous genes were successfully targeted singly and together, demonstrating that CRISPR/Cas9 can both selectively, and generally, target members of gene families. Somatic embryo cultures were also modified to enable the production of plants with heritable mutations, with the frequency of DNA modifications increasing with culture time. A novel cloning strategy and vector system based on In-Fusion® cloning was developed to simplify the production of CRISPR/Cas9 targeting vectors, which should be applicable for targeting any gene in any organism.
CONCLUSIONS:
The CRISPR/Cas9 is a simple, efficient, and highly specific genome editing tool in soybean. Although some vectors are more efficient than others, it is possible to edit duplicated genes relatively easily. The vectors and methods developed here will be useful for the application of CRISPR/Cas9 to soybean and other plant species.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สามารถเลือกเปลี่ยน genomic DNA ลำดับในสัตว์ทดลองเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการวิจัยพื้นฐาน และประยุกต์ ระบบ CRISPR/Cas9 mutates ลำดับดีเอ็นเอในสิ่งมีชีวิตได้อย่างแม่นยำ ที่นี่ ระบบ CRISPR/Cas9 จะแสดงจะมีผลบังคับใช้ในถั่วเหลือง โดยเคาะออก transgene โปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) และการปรับเปลี่ยน loci endogenous เก้าผลลัพธ์:พบกลายพันธุ์ของดีเอ็นเอเป้าหมาย 95% 88 ขนรากถั่วเหลืองเหตุการณ์วิเคราะห์ Bi allelic กลายพันธุ์พบในเหตุการณ์ที่แตกต่างของเวกเตอร์ targeting เก้าแปด ลบเล็กได้ทั่วไปชนิดของการกลายพันธุ์ในการผลิต แม้ว่า SNPs และแทรกสั้น ๆ ยังสุภัค Homoeologous ยีนได้สำเร็จเป้าหมายเดี่ยว และเห็นว่า CRISPR/Cas9 สามารถทั้งเลือก ทั่ว ไป เป้าหมายร่วมกัน สมาชิกของครอบครัวยีน วัฒนธรรมอ่อน somatic ยังได้ถูกปรับเปลี่ยนเพื่อให้การผลิตของพืชมีการกลายพันธุ์ heritable กับความถี่ของการปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นกับวัฒนธรรมเวลา นวนิยายโคลนระบบกลยุทธ์และเวกเตอร์ตามโคลนในฟิวชั่น®ได้รับการพัฒนาเพื่อทำการผลิตของ CRISPR/Cas9 กำหนดเป้าหมายเวกเตอร์ ซึ่งควรจะใช้เป้าหมายใด ๆ ยีนในสิ่งมีชีวิตใด ๆบทสรุป:CRISPR/Cas9 คือ เป็นกลุ่มอย่างง่าย มีประสิทธิภาพ และการแก้ไขเครื่องมือในถั่วเหลือง ถึงแม้ว่าบางเวกเตอร์จะมีประสิทธิภาพมากกว่าผู้อื่น มันจะสามารถแก้ไขยีนซ้ำกันค่อนข้างง่าย เวกเตอร์และวิธีพัฒนาที่นี่จะเป็นประโยชน์สำหรับโปรแกรมประยุกต์ของ CRISPR/Cas9 ถั่วเหลืองและพืชชนิดอื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความสามารถในการปรับเปลี่ยนการคัดเลือกลำดับดีเอ็นเอในร่างกายเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการวิจัยพื้นฐานและประยุกต์ใช้ CRISPR / ระบบ Cas9 แม่นยำแปรรูปดีเอ็นเอในจำนวนของสิ่งมีชีวิต นี่ CRISPR / ระบบ Cas9 ก็แสดงให้เห็นว่ามีประสิทธิภาพในถั่วเหลืองโดยการเคาะออกโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) ยีนและการปรับเปลี่ยนตำแหน่งภายนอกเก้า.
ผลการศึกษา:
การกลายพันธุ์ของดีเอ็นเอเป้าหมายถูกตรวจพบใน 95% ของ 88 รากขนเหตุการณ์ยีนวิเคราะห์ . การกลายพันธุ์ Bi-allelic ถูกตรวจพบในเหตุการณ์เปลี่ยนกับแปดเก้าเวกเตอร์กำหนดเป้าหมาย ลบขนาดเล็กเป็นชนิดที่พบบ่อยที่สุดของการกลายพันธุ์ที่ผลิตแม้ว่า SNPs และแทรกสั้นยังถูกตั้งข้อสังเกต ยีน Homoeologous เป็นเป้าหมายประสบความสำเร็จโดยลำพังและร่วมกันแสดงให้เห็นว่า CRISPR / Cas9 สามารถทั้งการคัดเลือกและโดยทั่วไปสมาชิกเป้าหมายของครอบครัวที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรม วัฒนธรรมตัวอ่อนร่างกายยังมีการแก้ไขเพื่อเปิดใช้งานการผลิตพืชที่มีการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมที่มีความถี่ของการปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอเพิ่มเวลาวัฒนธรรม กลยุทธ์การโคลนใหม่และระบบเวกเตอร์ขึ้นอยู่กับโคลนในFusion®ได้รับการพัฒนาเพื่อให้ง่ายต่อการผลิตของ CRISPR / Cas9 กำหนดเป้าหมายเวกเตอร์ซึ่งควรจะบังคับสำหรับการกำหนดเป้าหมายของยีนในสิ่งมีชีวิตใด ๆ .
สรุป
CRISPR / Cas9 คือการที่ง่ายและมีประสิทธิภาพ และเครื่องมือการแก้ไขจีโนมที่เฉพาะเจาะจงอย่างมากในถั่วเหลือง แม้ว่าเวกเตอร์บางอย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้นกว่าคนอื่น ๆ ก็เป็นไปได้ที่จะแก้ไขยีนที่ซ้ำกันค่อนข้างง่าย เวกเตอร์และวิธีการพัฒนาที่นี่จะเป็นประโยชน์สำหรับการประยุกต์ใช้ CRISPR / Cas9 ถั่วเหลืองและพืชชนิดอื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความสามารถในการเลือกเปลี่ยนลำดับจีโนมของ DNA ในสิ่งมีชีวิตเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับพื้นฐานและการวิจัยประยุกต์ ระบบ crispr / cas9 แน่นอนกลายพันธุ์ลำดับดีเอ็นเอในจำนวนของสิ่งมีชีวิต ที่นี่ระบบ crispr / cas9 แสดงผลในถั่วเหลืองโดยการเคาะออกมาเป็นสีเขียวเรืองโปรตีน ( GFP ) ยีนและปรับเปลี่ยนรูปแบบภายใน 9 .

ผล :เป้าหมายดีเอ็นเอการกลายพันธุ์ พบว่า 95% ของ 88 ขนรากจำลองเหตุการณ์วิเคราะห์ บี allelic การกลายพันธุ์ พบว่าเหตุการณ์เปลี่ยนกับแปดในเก้าเป้าหมายเวกเตอร์ ลบขนาดเล็กชนิดที่พบมากที่สุดของการผลิต แต่ snps และสั้นครั้งยังสังเกต homoeologous ยีนเป้าหมายเดี่ยวเรียบร้อยแล้ว และกันแสดงให้เห็นว่า crispr / cas9 ทั้งสองสามารถเลือก และโดยทั่วไปเป้าหมายสมาชิกของครอบครัว วัฒนธรรมของโซมาก็ดัดแปลงเพื่อให้สามารถผลิตพืชที่มีการกลายพันธุ์ที่มีความถี่ของการปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นกับเวลา วัฒนธรรมระบบกลยุทธ์การนวนิยายและเวกเตอร์อินฟิวชั่น®โคลนถูกพัฒนาขึ้นเพื่อลดความซับซ้อนของการผลิต crispr / cas9 เป้าหมายเวกเตอร์ ซึ่งควรจะใช้เพื่อเป้าหมายใด ๆ ยีนในสิ่งมีชีวิต .

สรุป : crispr / cas9 เป็นง่าย มีประสิทธิภาพสูง และสูงเฉพาะจีโนมแก้ไขเครื่องมือในถั่วเหลือง แม้ว่าบางเวกเตอร์จะมีประสิทธิภาพมากขึ้นกว่าคนอื่น ๆมันเป็นไปได้ที่จะแก้ไขคัดลอกยีนค่อนข้างง่าย เวกเตอร์และวิธีการพัฒนานี้จะเป็นประโยชน์สำหรับการประยุกต์ใช้ crispr / cas9 กับถั่วเหลืองและพืชชนิดอื่น ๆ