The c-jun N-terminal kinase 3 (JNK3

The c-jun N-terminal kinase 3 (JNK3) is a promising drug target for the treatment of neurological disorders. Here we report a direct ELISA including the optimization of a nonradioactive immunosorbent JNK3 activity assay to determine inhibitory potency of small-molecule inhibitors. Based on our previous JNK3 assay and our recently optimized p38α mitogen activated protein kinase (MAPK) protocol for monitoring the phosphorylation of activating-transcription factor 2 (ATF-2), we present a rapid and straightforward alternative to conventional radioactive and indirect ELISA kinase assays. To validate the assay with the optimized assay conditions we used reference compounds and achieved well comparable IC50 results to published data. The use of a linked monoclonal antibody increased the specificity and the sensitivity of the assay, reducing the required antibody concentration by approximately 100-fold. The novel protocol is an accurate, easy-to-handle and robust screening assay for JNK3 and the assay performance was reduced from 7.5 to 3 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Kinase เทอร์มินัล N c-3 jun (JNK3) เป็นเป้าหมายยาเสพติดสัญญาสำหรับการรักษาโรคระบบประสาท ที่นี่เราสามารถรายงาน ELISA โดยตรงรวมถึงการเพิ่มประสิทธิภาพของการ nonradioactive immunosorbent JNK3 กิจกรรมวิเคราะห์เพื่อกำหนดศักยภาพของลิปกลอสไขของ inhibitors โมเลกุลขนาดเล็ก ตามวิเคราะห์ JNK3 ก่อนหน้านี้ของเราและของเรา p38α เพิ่มประสิทธิภาพล่าสุด mitogen เรียกโปรตีน kinase (MAPK) โพรโทคอลตรวจสอบ phosphorylation ของ transcription เปิดคูณ 2 (ATF-2), เรานำเสนอเป็นอย่างรวดเร็ว และตรงไปตรงมาสำรองให้ปกติกัมมันตภาพ และอ้อม ELISA kinase assays การตรวจสอบวิเคราะห์ ด้วยเงื่อนไขทดสอบให้เหมาะ เราใช้สารอ้างอิง และทำได้ดีเทียบเท่า IC50 ผลการเผยแพร่ข้อมูล การใช้แอนติบอดี monoclonal เชื่อมโยงเพิ่มความไวของการทดสอบ การลดความเข้มข้นของแอนติบอดีที่ต้องการโดยประมาณ 100-fold และ specificity ที่ โพรโทคอนวนิยายเป็นการถูกต้อง ง่ายการจัดการ และวิเคราะห์คัดกรองมีประสิทธิภาพ JNK3 และทดสอบประสิทธิภาพถูกลดจาก 7.5 3 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

C-มิถุนายนไคเนส N-มินัล 3 (JNK3) เป็นเป้าหมายยาเสพติดที่มีแนวโน้มในการรักษาความผิดปกติของระบบประสาท ที่นี่เรารายงาน ELISA โดยตรงรวมทั้งการเพิ่มประสิทธิภาพของอิมมูโน nonradioactive ทดสอบกิจกรรม JNK3 เพื่อตรวจสอบความแข็งแรงของการยับยั้งสารยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็ก ขึ้นอยู่กับการทดสอบ JNK3 ก่อนหน้านี้และเมื่อเร็ว ๆ นี้ดีสุดของเราp38α mitogen โปรตีนไคเนสของเราเปิดใช้งาน (MAPK) โปรโตคอลสำหรับการตรวจสอบ phosphorylation ของปัจจัยการเปิดใช้งานการถอดความ-2 (ATF-2) เรานำเสนอเป็นทางเลือกที่รวดเร็วและตรงไปตรงมา ELISA ธรรมดากัมมันตรังสีและทางอ้อมการตรวจไคเนส . ในการตรวจสอบการทดสอบที่มีเงื่อนไขการทดสอบที่ดีที่สุดที่เราใช้สารอ้างอิงและประสบความสำเร็จเป็นอย่างดีผล IC50 เทียบเคียงได้กับข้อมูลที่เผยแพร่ ใช้แอนติบอดีที่เชื่อมโยงเพิ่มความจำเพาะและความไวของการตรวจสอบปริมาณการลดความเข้มข้นของแอนติบอดีที่จำเป็นโดยประมาณ 100 เท่า โพรโทคอนวนิยายเรื่องนี้ถูกต้องทดสอบการตรวจคัดกรองที่ง่ายต่อการจัดการและมีประสิทธิภาพสำหรับ JNK3 และประสิทธิภาพการทดสอบลดลง 7.5-3 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ถูก c-jun ไคเนส 3 ( jnk3 ) เป็นเป้าหมายของยาที่มีแนวโน้มสำหรับการรักษาความผิดปกติทางระบบประสาท . ที่นี่เรารายงานโดยตรง ( รวมถึงการเพิ่มประสิทธิภาพของ nonradioactive และกิจกรรมการทดสอบเพื่อตรวจสอบว่า jnk3 ความแรงของโปรตีนโมเลกุลเล็กบนพื้นฐานของการทดสอบ jnk3 ของเราก่อนหน้านี้และเราเพิ่งปรับ P38 αปรากฎเปิดโปรตีนไคเนส ( mapk ) โปรโตคอลสำหรับการตรวจสอบปฏิกิริยาฟอสโฟรีเลชันของการถอดความปัจจัย 2 ( atf-2 ) เราเสนอทางเลือกอย่างรวดเร็วและตรงไปตรงมาแบบกัมมันตรังสีและวิธี indirect ELISA พบว่าวิธี .การตรวจสอบการทดสอบกับการทดสอบเงื่อนไขที่เราปรับใช้สารอ้างอิงและบรรลุผล ic50 ได้ดีเทียบเท่ากับการเผยแพร่ข้อมูล การใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีเชื่อมโยงเพิ่มความจำเพาะและความไวของการทดสอบ , การลดใช้แอนติบอดีความเข้มข้นประมาณ 100 เท่า โปรโตคอลใหม่ที่ถูกต้องที่ง่ายและมีประสิทธิภาพสำหรับการคัดกรองการทดสอบประสิทธิภาพและการทดสอบ jnk3 ลดลงจาก 7.5 3 h