2.5. Microsatellites and PCR amplif

2.5. Microsatellites and PCR amplifications
Microsatellite markers (GM150, GM258, GM526, UNH104,
UNH982, UNH985 and UNH995) were chosen from the tilapia genetic
linkage map (Lee et al., 2005). All PCRs were performed using the
tailed primer method (Boutin-Ganache et al., 2001). A standard
primer sequence or “tail” was added to the 5′-end of either the reverse
or forward primer, depending on the marker. Additional universal
primer labelled with fluorescent dye (which has the tail sequence)
was used to label the PCR products. PCR was carried out in 15 μl
reactions containing 1X PCR buffer, 2 mM MgCl2, 200 μM of each
dNTP, 0.5 units Taq enzyme (Thermo Scientific, UK), 4 pmol of reverse
or forward primer (non-tailed), 0.2 pmol of tailed primer, 4 pmol of
labelled primer and 60–100 ng genomic DNA. PCR conditions were as
follows: one cycle of 2 min at 95 °C, 30 cycles of 1 min at 95 °C, 1 min
at 57 °C, 1 min at 72 °C, with a final extension step of 30 min at 72 °C.
PCR products were first checked by electrophoresis in 1.2% agarose
gels with 0.5X TAE buffer, stained with 2% ethidium bromide. Sizing of
PCR products was accomplished using CEQ 8800 Genetic Analysis
System automated DNA sequencer (Beckman Coulter) and allele sizes
were analysed with CEQ8800 software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 amplifications Microsatellites และ PCRเมตตา (GM150, GM258, GM526, UNH104UNH982, UNH985 และ UNH995) ที่ถูกเลือกจากนิลพันธุกรรมแผนที่เชื่อมโยง (Lee et al., 2005) PCRs ทั้งหมดได้ดำเนินการโดยใช้การแจงวิธีรองพื้น (Boutin Ganache et al., 2001) มาตรฐานลำดับรองพื้นหรือ "หาง" เพิ่มท้าย 5′ ใดตรงกันข้ามหรือรอง พื้นไปข้างหน้า ตามหมาย สากลเพิ่มเติมรองพื้นมัน มีสีเรืองแสง (ซึ่งมีลำดับหาง)ใช้กับป้ายชื่อผลิตภัณฑ์ PCR PCR ถูกดำเนินการใน 15 μlประกอบด้วยบัฟเฟอร์ X PCR 1, 2 มม. MgCl2, μM 200 ของแต่ละปฏิกิริยาdNTP เอนไซม์ Taq 0.5 หน่วย (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ UK), pmol 4 ของกลับหรือส่งต่อ (ไม่ใช่หาง) สีรองพื้น pmol 0.2 พื้นหาง pmol 4 ของมันพื้นและ 60 – 100 ng genomic DNA เงื่อนไข PCR ได้เป็นดังต่อไปนี้: รอบเดียว 2 นาทีที่ 95 ° C, 30 รอบ 1 นาทีที่ 95 ° C, 1 นาทีที่ 57 ° C, 1 นาทีที่° C 72 กับขั้นสุดท้ายต่อ 30 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียสผลิตภัณฑ์ PCR ถูกตรวจสอบก่อน โดย electrophoresis ใน agarose 1.2%เจกับบัฟเฟอร์เต้ X 0.5 สีกับโบรไมด์ ethidium 2% ปรับขนาดของผลิตภัณฑ์ PCR ได้สำเร็จโดยใช้การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมของ 8800 CEQระบบอัตโนมัติ DNA sequencer (Beckman Coulter) และขนาด alleleมี analysed กับซอฟต์แวร์ CEQ8800

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ไมโคร PCR และเครื่องขยายเสียง
เครื่องหมายไมโคร (GM150, GM258, GM526, UNH104,
UNH982, UNH985 และ UNH995) ได้รับการแต่งตั้งจากปลานิลพันธุกรรม
แผนที่เชื่อมโยง (ลี et al., 2005) PCRs ทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้
วิธีการศึกษามีหาง (Boutin-Ganache et al., 2001) มาตรฐาน
ลำดับไพรหรือ "หาง" ถูกบันทึกอยู่ใน 5'-ปลายทั้งสองกลับ
หรือศึกษาไปข้างหน้าขึ้นอยู่กับเครื่องหมาย สากลเพิ่มเติม
รองพื้นกำกับด้วยสีเรืองแสง (ซึ่งมีลำดับหาง)
ถูกใช้ในการติดฉลากผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ PCR ได้รับการดำเนินการใน 15 ไมโครลิตร
ปฏิกิริยาที่มีบัฟเฟอร์ 1X PCR, 2 มิลลิ MgCl2, 200 ไมโครโมลาร์ของแต่ละ
dNTP, 0.5 หน่วยเอนไซม์ Taq (เทอร์โมวิทยาศาสตร์สหราชอาณาจักร), 4 pmol ของย้อนกลับ
ไปข้างหน้าหรือประถมศึกษา (Non-tailed) 0.2 pmol ของ ไพรเมอร์เทลด์ 4 pmol ของ
ไพรเมอร์ที่มีข้อความและ 60-100 ดีเอ็นเอศึกษา เงื่อนไข PCR มีดัง
ต่อไปนี้หนึ่งรอบของ 2 นาทีที่ 95 ° C, 30 รอบ 1 นาทีที่ 95 ° C, 1 นาที
ที่ 57 ° C, 1 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียสด้วยขั้นตอนสุดท้ายของการขยาย 30 นาทีที่ 72 ° C
ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูกตรวจสอบเป็นครั้งแรกโดย electrophoresis ใน 1.2% agarose
เจลที่มีบัฟเฟอร์ 0.5X TAE, ย้อมด้วยสี 2% โบรไมด์ ethidium ขนาดของ
ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการประสบความสำเร็จโดยใช้ CEQ 8800 ทางพันธุกรรมการวิเคราะห์
ระบบซีเควนดีเอ็นเออัตโนมัติ (Beckman Coulter) และขนาดอัลลีล
ที่ได้มาวิเคราะห์ด้วยซอฟต์แวร์ CEQ8800

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ไมโครแซทเทลไลท์และ PCR amplifications
ใช้เครื่องหมาย ( gm150 gm258 gm526 unh104 , , , ,
unh982 unh985 , และ unh995 ) ได้รับเลือกจากปลานิลพันธุ
การเชื่อมโยงแผนที่ ( ลี et al . , 2005 ) ทั้งหมดคือการใช้ pcrs
หางวิธีรองพื้น ( บูแตน Ganache et al . , 2001 ) รองพื้นมาตรฐาน
ลำดับ หรือ " หาง " เพิ่ม 5 ’ - จบให้ย้อนกลับหรือส่งต่อรองพื้น
,ขึ้นอยู่กับเครื่องหมาย รองพื้นด้วยสีเรืองแสงดับสากล
เพิ่มเติม ( ซึ่งมีลำดับหาง )
ใช้ฉลากผลิตภัณฑ์ PCR โดยได้ดำเนินการใน 15 μ L
ปฏิกิริยา PCR buffer ที่มี 1 , 2 มม. ชุดละ 200 μ M
dntp 0.5 หน่วยเอนไซม์ ทัค ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , อังกฤษ ) , 4 pmol Reverse
หรือส่งต่อรองพื้น ( ไม่ใช่หาง ) , 0.2 pmol หางของไพรเมอร์ pmol
4 แห่งรองพื้นและ 60 – 100 นาโนที่มีจีโนมดีเอ็นเอ เงื่อนไข PCR เป็น
ดังนี้ : 1 รอบ 2 นาทีที่ 95 องศา C 30 รอบ 1 นาทีที่ 95 องศา C ,
1 นาทีที่ 57 องศา C , 1 นาทีที่ 72 ° C ด้วยขั้นตอนการสุดท้าย 30 นาทีที่ 72 ° C .
) ผลิตภัณฑ์แรกตรวจสอบโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสใน 1.2 %
( โรสเจลกับแท บัฟเฟอร์ ย้อมด้วย 2% ทิเดียมโบรไมด์ . ขนาดของ
ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ โดยใช้การวิเคราะห์ทางพันธุกรรม DNA sequencer CEQ 8800
ระบบอัตโนมัติ ( เบคแมน คูลเตอร์ ) และในขนาด
วิเคราะห์ด้วยโปรแกรม ceq8800 .