Leaf mesophyll protoplasts from cv.

Leaf mesophyll protoplasts from cv. Thalassa were used for PEG-mediated transformation with the BoMinD plasmid. A total of 2 × 106 protoplasts were treated with BoMinD plasmid resulting in 6 hygromyc in resistant putative transgenic plants (Fig. 1Band C) giving an absolute transformation frequency (number of transgenic shoots per number of treated protoplasts) of 0.3 × 10−5,which is equal to or slightly lower than the frequency of 0.3 to 1.3 × 10−5 reported by Nugent et al. (2006) but is however much higher than the frequency of 0.05 × 10−5as reported by Radchuket al. (2002). Furthermore, fully developed transformed BoMinD cauliflower plants exhibited no morphological/physiological differences to WT cauliflower plants (Fig. 1C). Analysis via PCR with hptII and BoMinD specific primers indicated that all 6 BoMinD transgenic cauliflower lines (CM1–CM6) were positive for the presence of the two transgenes (data not shown). Further analysis of stable BoMinD transgenic cauliflower plants by Southern blotting and RT-PCR was performed using BoMinDRT For and E9-ter Rev primers that detects only transgene BoMinD but not endogenous BoMinD(Fig. 1D and E). Southern blotting of transgenic lines showed that,CM1 and CM6 lines contained five and three copies of the BoMinD transgene respectively, while CM4 and CM5 lines contained two transgene inserts (Fig. 1D). Gene expression analysis, by RT-PCR(Fig. 1E) and also measurement of BoMinD by western blot (Fig. 1F) indicated that the transgene number did not relate to the BoMinD transgene expression, particularly in transgenic events CM4, CM5 and CM6 lines as the transgene expression is dependent on many factors such as; promoter strength, transgene integration site andalso on the number of transgene integrations (Stam et al., 1997;Matzke and Matzke, 1998). Though there were good levels of total BoMinD transcript in transgenic cauliflower (CM1–CM6) lines using RT-PCR with BoMinD primers, there was only weak BoMinD trans-gene expression detected in CM4, CM5 and CM6 lines with BoMinDFor and E9-ter Rev primers (Fig. 1E). Examination of BoMinD levels by western blotting with anti-MinD antibody also showed very low BoMinD levels in stable BoMinD transgenic cauliflower lines(Fig. 1F).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พลาสต์ mesophyll ของใบจากพันธุ์สซาถูกใช้สำหรับการแปลงสื่อ PEG มี BoMinD plasmid จำนวน 2 × 106 พลาสต์ได้รับการรักษา ด้วย BoMinD plasmid ใน 6 hygromyc ในพืชจำลอง putative ทน (รูป 1Band C) ให้ความถี่เปลี่ยนแปลงสัมบูรณ์ (จำนวนของหน่อที่จำลองการรักษาพลาสต์) ของ 0.3 × 10−5 ซึ่งเท่ากับ หรือต่ำกว่าความถี่ของ 0.3 ถึง 1.3 × 10−5 รายงานโดย Nugent et al. (2006) เล็กน้อย แต่อย่างไรก็ตามสูงกว่าความถี่ของ 0.05 × 10−5as รายงาน โดย Radchuket al. (2002) นอกจากนี้ พืชกะหล่ำ BoMinD รับการเปลี่ยนแปลงพัฒนาอย่างเต็มที่จัดแสดงความแตกต่างไม่สรีรวิทยาสัณฐาน WT กะหล่ำพืช (รูปที่ 1C) วิเคราะห์ทาง PCR กับ hptII และ BoMinD เฉพาะไพรเมอร์ระบุว่า บรรทัดทั้งหมด 6 BoMinD จำลองกะหล่ำ (CM1 – CM6) ได้ค่าบวกสำหรับการปรากฏตัวของ transgenes สอง (ไม่แสดงข้อมูล) การวิเคราะห์เสถียรภาพ BoMinD ทำกะหล่ำจำลองพืชโดยใต้ blotting วิธี RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์สำหรับ BoMinDRT และ Rev E9-ter ที่ตรวจพบเพียง transgene BoMinD แต่ภายนอกไม่ BoMinD (1D มะเดื่อและ E) Blotting วิธีใต้บรรทัดจำลองแสดงให้เห็นว่า CM1 และ CM6 อยู่ BoMinD transgene สำเนาห้า และสามตามลำดับ ในขณะที่เส้น CM4 CM5 อยู่สอง transgene แทรก (รูป 1D) วิเคราะห์นิพจน์ที่ยีน RT PCR(Fig. 1E) และวัด BoMinD โดยน้าตะวันตก (รูปที่ 1F) ระบุว่า หมายเลข transgene ไม่เกี่ยว BoMinD transgene นิพจน์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเหตุการณ์จำลอง CM4, CM5 และ CM6 เป็น transgene นิพจน์ขึ้นอยู่กับหลายปัจจัยเช่น โปรโมเตอร์ความแข็งแรง transgene andalso ไซต์รวมจำนวนการรวม transgene (Stam et al. 1997 Matzke และ Matzke, 1998) ถึงแม้ว่ามีเสียงบรรยาย BoMinD รวมในระดับดีในกะหล่ำจำลอง (CM1 – CM6) บรรทัดที่ใช้ RT-PCR กับไพรเมอร์ BoMinD ได้เฉพาะอ่อน BoMinD ทรานส์ยีนพบใน CM4, CM5 และ CM6 บรรทัดด้วยไพรเมอร์ BoMinDFor และความเร็วรอบ E9-ter (รูปที่ 1E) การตรวจระดับ BoMinD โดย blotting วิธีตะวันตกกับแอนติบอดีป้องกันทราบยังแสดงให้เห็นระดับ BoMinD ที่ต่ำมากในเสถียร BoMinD จำลองกะหล่ำบรรทัด (รูป 1F)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตพลา mesophyll ใบจากพันธุ์ Thalassa ถูกนำมาใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลง PEG-ไกล่เกลี่ยกับพลาสมิด BoMinD รวม 2 × 106 โปรโตพลาได้รับการรักษาที่มีพลาสมิด BoMinD ผลใน 6 hygromyc ในทนพืชดัดแปรพันธุกรรมสมมุติ (รูป. 1Band C) ให้ความถี่ในการเปลี่ยนแปลงแน่นอน (จำนวนหน่อต่อยีนจำนวนโปรโตพลาได้รับการรักษา) 0.3 × 10-5, ซึ่งเท่ากับหรือต่ำกว่าความถี่ของ 0.3-1.3 × 10-5 รายงานโดยนูเจนท์, et al เล็กน้อย (2006) แต่อย่างไรก็ตามสูงกว่าความถี่ของ 0.05 × 10-5as ที่รายงานโดยอัล Radchuket (2002) นอกจากนี้การพัฒนาอย่างเต็มที่เปลี่ยน BoMinD พืชกะหล่ำแสดงไม่มีก้าน / ความแตกต่างทางสรีรวิทยาการ WT พืชกะหล่ำ (รูป. 1C) การวิเคราะห์ทางเทคนิค PCR กับ hptII และ BoMinD ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงชี้ให้เห็นว่าทั้ง 6 BoMinD ดัดแปรพันธุกรรมสายกะหล่ำ (CM1-CM6) เป็นบวกสำหรับการปรากฏตัวของทั้งสอง transgenes (ที่ไม่ได้แสดงข้อมูล) การวิเคราะห์ต่อไปของการมีเสถียรภาพ BoMinD พืชดัดแปรพันธุกรรมกะหล่ำโดยซับภาคใต้และ RT-PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ BoMinDRT สำหรับและ E9-ตรีไพรเมอร์เรฟที่ตรวจพบเพียงยีน BoMinD แต่ไม่ BoMinD ภายนอก (รูป. 1D และ E) ซับใต้ของสายการดัดแปรพันธุกรรมพบว่า CM1 และ CM6 สายที่มีอยู่ห้าและสามสำเนาของยีน BoMinD ตามลำดับในขณะ CM4 และ CM5 สายมีสองแทรกยีน (รูป. 1D) การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนโดย RT-PCR (รูป. 1E) และการวัด BoMinD โดยดวงตะวัน (รูป. 1F) ชี้ให้เห็นว่าจำนวนของยีนไม่ได้เกี่ยวข้องกับการแสดงออกของยีน BoMinD เฉพาะอย่างยิ่งในเหตุการณ์จำลองพันธุ์ CM4, CM5 และ CM6 สาย การแสดงออกของยีนนั้นขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายอย่างเช่น; ความแข็งแรงก่อการเว็บไซต์บูรณายีน andalso กับจำนวนของการผสานรวมยีน (Stam, et al, 1997;. Matzke และ Matzke, 1998) แม้ว่าจะมีระดับที่ดีของหลักฐาน BoMinD รวมในกะหล่ำดัดแปรพันธุกรรม (CM1-CM6) สายใช้ RT-PCR กับไพรเมอร์ BoMinD มีเพียงอ่อนแอ BoMinD แสดงออกทรานส์ยีนตรวจพบใน CM4, CM5 และ CM6 เส้นที่มี BoMinDFor และ E9-เธอเรฟ ไพรเมอร์ (รูป. 1E) การตรวจสอบระดับ BoMinD ผ่าน Western blotting กับการป้องกันจิตใจแอนติบอดียังแสดงให้เห็นระดับ BoMinD ที่ต่ำมากในเสถียรภาพ BoMinD ดัดแปรพันธุกรรมสายกะหล่ำ (รูป. 1F)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ใบ มีโซฟีลล์โปรโตพลาสต์จากพันธุ์ ใช้สำหรับการแปลง ( Thalassa ตรึงกับ bomind พลาสมิด รวมของ 2 × 106 พบว่าพลาสมิดที่ได้รับ bomind ที่เกิดใน 6 hygromyc ในต้นพืชซึ่งทน ( รูปที่ 1band C ) ให้ความถี่เปลี่ยนแปลงแน่นอน ( จำนวนหน่อต่อต้น จำนวนการรักษาที่เหมาะสม ) × 10 − 0.3 5 ซึ่งเท่ากับหรือต่ำกว่าเล็กน้อยความถี่ 0.3 1.3 × 10 − 5 รายงานโดยสรุป et al . ( 2006 ) แต่อย่างไรก็ตามสูงกว่าความถี่ 0.05 × 10 − 5as radchuket รายงานโดยอัล ( 2002 ) นอกจากนี้ การพัฒนาเต็มที่เปลี่ยน bomind กะหล่ำดอกพืชมีความแตกต่างทางสัณฐานวิทยาสรีรวิทยา / WT กะหล่ำดอกพืช ( ภาพที่ 1c ) การวิเคราะห์ทาง PCR กับ hptii bomind และไพร์เมอร์จำเพาะ พบว่า 6 bomind ต้นกะหล่ำเส้น ( CM1 – cm6 ) บวกกับการแสดงตนของทั้งสอง transgenes ( ข้อมูลไม่แสดง ) การวิเคราะห์การดัดแปรพันธุกรรมพืช โดยภาคใต้มี bomind กะหล่ำดอกวิธี RT-PCR ทำการใช้ bomindrt และ e9 เธอหมุนรอบชนิดที่ตรวจพบยีน bomind เท่านั้นแต่ไม่พบ bomind ( ภาพ 1D และ E ) ภาคใต้ของเส้นยีน blotting พบว่ามีอยู่ห้า cm6 CM1 สายและสามชุดของยีน bomind ตามลำดับ ขณะที่ cm4 ชนิดสองเส้นและมียีนแทรก ( ภาพดี ) การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนโดยวิธี RT-PCR ) ( ภาพที่ 1e ) และการวัด bomind โดย Western blot ( รูปที่ชั้น 1 ) พบว่า ยีนหมายเลขไม่ได้เกี่ยวข้องกับ bomind ยีนการแสดงออกของยีนชนิดโดยเฉพาะอย่างยิ่งใน cm4 เหตุการณ์ , และสาย cm6 เป็นยีนการแสดงออกจะขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ เช่น มากมาย โปรโมเตอร์ยีนแรง รวมเว็บไซต์ และจำนวนของยีน integrations ( สตัม et al . , 1997 ; แมทซ์เค และ แมทซ์เค , 1998 ) แม้ว่าระดับของหลักฐาน bomind ทั้งหมดในกะหล่ำดอกพันธุ์ ( CM1 – cm6 ) สายที่ใช้กับ bomind ชนิดนี้ มีเพียงคนอ่อนแอ bomind ทรานส์ยีนที่ตรวจพบใน cm4 ชนิด , และสาย cm6 กับ bomindfor e9 เธอหมุนรอบและไพรเมอร์ ( ภาพที่ 1e ) การตรวจสอบ bomind ระดับโดย Western blotting กับแอนติบอดีต่อต้าน รังเกียจ พบน้อยมากในระดับ bomind มั่นคง bomind ต้นกะหล่ำดอกสาย ( รูปที่ชั้น 1 )