Virus rescue.To generate virus from

Virus rescue.To generate virus from the plasmids, HEp-2 cells grown in a six-well plate were infected with MVA-T7 at a multiplicity of infection (MOI) of 1 and then transfected with 1 μg of pLa and either pLa-H5w or pLa-H5m together with the following expression plasmids: pT7-NP at 0.4 μg, pT7-P at 0.2 μg, and pT7-L at 0.2 μg. After 16 h of incubation at 37°C, the medium was replaced with 2 ml of fresh Opti-MEM (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) containing 0.5 μg of the protease inhibitor N-tosyl-phenylalanine chloromethylketone (TPCK) trypsin, and the cells were incubated for another three days at 37°C. The supernatant was then inoculated into the allantoic cavities of 10-day-old embryonated SPF eggs. After 72 h of incubation at 39°C, the allantoic fluid was harvested and the virus was identified by hemagglutination assay using 0.5% chicken red blood cells. Viral RNAs were isolated from the rescued viruses, and the presence of the inserted foreign genes was confirmed by RT-PCR and sequence analysis. The rescued viruses were designated as rLa, rLa-H5w, and rLa-H5m.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กู้ภัยไวรัส สร้างไวรัสจากการ plasmids, HEp-2 เซลล์ที่เติบโตในจานหลุมหก MVA T7 การติดเชื้อที่หลายหลากของการติดเชื้อ (MOI) 1 และ transfected กับμ 1 ของปลา และปลา H5w หรือปลา H5m ร่วมกับการ plasmids นิพจน์ต่อไปนี้แล้ว: pT7 NP ที่ 0.4 μ P pT7 ที่ 0.2 μ และ L pT7 ที่ 0.2 μ หลังจาก h 16 การบ่มที่ 37° C สื่อถูกแทนที่ ด้วย 2 มล.ของสดทั้ง MEM (Invitrogen Corp. คาร์ลบาด CA) μ 0.5 ที่มีของทริปซิน chloromethylketone (TPCK) tosyl-N-phenylalanine ยับยั้งน้ำย่อย และเซลล์ได้รับการกกอีกสามวันที่ 37 องศาเซลเซียส Supernatant แก้ไขแล้ว inoculated เป็นผุ allantoic ไข่ 10 วันเก่า embryonated SPF หลังจาก h 72 ของบ่มที่ 39° C น้ำ allantoic ถูกเก็บเกี่ยว และไวรัสที่ถูกระบุ โดย hemagglutination ทดสอบโดยใช้เม็ดเลือดแดงไก่ 0.5% ไวรัส RNAs ถูกแยกจากไวรัสการกู้คืน และยืนยันสถานะของยีนต่างประเทศแทรกการ RT-PCR และลำดับวิเคราะห์ ไวรัสกู้คืนได้ถูกกำหนดเป็น rLa, rLa H5w และ rLa H5m

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไวรัส rescue.To สร้างไวรัสจากพลาสมิดที่ HEP-2 เซลล์ที่ปลูกในจานหกดีมีการติดเชื้อ MVA-T7 ที่หลายหลากของการติดเชื้อ (กระทรวงมหาดไทย) 1 และ transfected 1 ไมโครกรัมของ PLA และทั้ง PLA-H5w แล้ว หรือ PLA-H5m ร่วมกับพลาสมิดนิพจน์ต่อไปนี้: pT7-NP ที่ 0.4 ไมโครกรัม pT7-P ที่ 0.2 ไมโครกรัมและ pT7-L ที่ 0.2 ไมโครกรัม หลังจาก 16 ชั่วโมงของการบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C กลางถูกแทนที่ด้วย 2 มิลลิลิตรของสด Opti-Mem (Invitrogen คอร์ป, Carlsbad, CA) ที่มี 0.5 ไมโครกรัมของน้ำย่อยยับยั้ง N-tosyl-phenylalanine chloromethylketone (TPCK) trypsin และ เซลล์ถูกบ่มอีกสามวันที่ 37 ° C ใสได้รับเชื้อเข้าไปในโพรง allantoic 10 วันเก่าไข่ SPF embryonated หลังจาก 72 ชั่วโมงของการบ่มที่ 39 ° C, ของเหลว allantoic เก็บเกี่ยวและไวรัสถูกระบุ hemagglutination การทดสอบโดยใช้ 0.5% ไก่เซลล์เม็ดเลือดแดง RNAs ไวรัสที่แยกได้จากไวรัสได้รับการช่วยเหลือและการปรากฏตัวของยีนแปลกปลอมแทรกได้รับการยืนยันโดย RT-PCR และการวิเคราะห์ลำดับ ไวรัสที่ได้รับการช่วยเหลือที่ถูกกำหนดให้เป็น RLA, RLA-H5w และ RLA-H5m

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ช่วยเหลือการสร้างไวรัส ไวรัสจากเซลล์เพื่อ hep-2 โตในจานหกก็ติดเชื้อ mva-t7 ที่หลายหลากของการติดเชื้อ ( MOI ) 1 แล้ว transfected 1 μกรัมของปลา และ pla-h5w หรือ pla-h5m พร้อมกับต่อไปนี้การแสดงออกพลาส : pt7 NP ที่μ 0.4 กรัม pt7-p ที่μ 0.2 กรัม และ pt7-l 0.2 μกรัม หลังจาก 16 ชั่วโมง บ่มที่ 37 ° C ) ถูกแทนที่ด้วย 2 ml ของแหม่ม OPTI สด ( Invitrogen คอร์ป , Carlsbad , CA ) ที่มีμ 0.5 กรัมของโปรตีนยับยั้ง n-tosyl-phenylalanine chloromethylketone ( tpck ) เอนไซม์ และเซลล์ก็บ่มต่ออีก 3 วัน ที่อุณหภูมิ 37 องศา C จากนั้นนำเชื้อเข้าไปในโพรง allantoic เก่าวงจรชีวิต SPF 10 วันไข่ หลังจาก 72 ชั่วโมงของการบ่มที่ 39 ° C , ของเหลว allantoic คือการเก็บเกี่ยวและไวรัสที่ระบุ โดยใช้การทดสอบ การทดสอบการเกาะกลุ่ม ของเม็ดเลือดแดง 0.5% ไก่สีแดงเลือดเซลล์ ไวรัสที่แยกได้จากการช่วยเหลือ RNAs ไวรัสและการปรากฏตัวของต่างประเทศที่ได้รับการยืนยันโดยวิธีแทรกยีนและการวิเคราะห์ลำดับ ไวรัสถูก rescued RLA rla-h5w เขต , และ rla-h5m .