Determination of effects of differe

Determination of effects of different concentrations of the crude extract of maggots on plasmid DNA replication by agarose gel electrophoresis
For gel preparation, 0.2 g of agarose was mixed with 20 mL of 1 × TAE and heated for 1 min. While the agarose was cooling, 1 μL of EB was added. The cooled agarose was then poured into a casting tray. Ten microliters of the samples (crude extract 2 mg/mL + plasmid, crude extract 80 mg/mL + plasmid, TNE + plasmid, plasmid alone, gentamicin 50 mg/mL + plasmid, and gentamicin 100 mg/mL
+ plasmid) were mixed with 2 μL of 6 × loading buffer and loaded into slots. Three microliters of 1 kDa DNA marker was also loaded. After loading, electrophoresis was conducted at a voltage of 80 V for about 20 min.
Separation and puri cation of the crude extract of maggots
DEAE-Sepharose Fast Flow ion exchange chro- matography and Sephacryls-200HR gel filtration chromatography were used to separate and purify the crude extract of maggots[18-20]. The eluent and eluant were obtained.
Determination of antibacterial effects of the crude extract of maggots, eluent and eluant by turbidimetric method
Two hundred microliters of the crude extract of maggots, eluent or eluant were mixed with 22 μL of 10% sterile tryptone, respectively. The mixture (150 μL) was added into a sterile 96 well plate, followed by the addition of 30 μL of diluted bacterial suspension. 1% sterile tryptone was used as a negative control. The plate was incubated at 37°C, and the OD at 589 nm was measured with an au- tomated microplate reader at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 and 24 h after zeroing the absorbance with a blank solution. The OD-T curve was plotted with time on X-axis and OD value on Y-axis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การกำหนดผลกระทบของความเข้มข้นแตกต่างกันของสารสกัดหยาบจากหนอนใน plasmid DNA การจำลองแบบโดย agarose เจอิสำหรับการเตรียมเจ 0.2 g ของ agarose ผสมกับ 20 mL ของ 1 × TAE และอุ่น 1 นาที ในขณะ agarose ถูกทำความเย็น μL 1 ของ EB ถูก Agarose เย็นถูกแล้วเทลงในถาดหล่อ Microliters สิบตัวอย่าง (ดิบสกัด plasmid + 2 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร ดิบดึง 80 mg/mL + plasmid, TNE + plasmid คนเดียว plasmid gentamicin 50mg/mL + plasmid และ gentamicin 100mg/mL+ plasmid) ผสมกับ μL 2 6 ×โหลดบัฟเฟอร์ และโหลดเข้าไปในช่อง นอกจากนี้ยังถูกโหลดสาม microliters ของเครื่องหมายดีเอ็นเอ kDa 1 หลังจากโหลด อิถูกดำเนินการที่แรงดันไฟฟ้า 80 V ประมาณ 20 นาทีแยกและปูรกน้ำมันดิบการแยกของหนอนDEAE Sepharose ไหลเร็ว chro-matography แลกเปลี่ยนไอออนและ chromatography กรองเจ Sephacryls 200 ชั่วโมงถูกใช้ในการแยก และทำให้บริสุทธิ์สารสกัดหยาบของหนอน [18-20] Eluent และ eluant ได้รับการกำหนดผลต้านเชื้อแบคทีเรียของสารสกัดหยาบของหนอน eluent และ eluant โดยวิธี turbidimetricTwo hundred microliters of the crude extract of maggots, eluent or eluant were mixed with 22 μL of 10% sterile tryptone, respectively. The mixture (150 μL) was added into a sterile 96 well plate, followed by the addition of 30 μL of diluted bacterial suspension. 1% sterile tryptone was used as a negative control. The plate was incubated at 37°C, and the OD at 589 nm was measured with an au- tomated microplate reader at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 and 24 h after zeroing the absorbance with a blank solution. The OD-T curve was plotted with time on X-axis and OD value on Y-axis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความมุ่งมั่นของผลกระทบของความเข้มข้นแตกต่างกันของสารสกัดหยาบของหนอนในการจำลองแบบพลาสมิดดีเอ็นเอโดยข่าวคราว agarose
สำหรับการเตรียมเจล 0.2 กรัม agarose ผสมกับ 20 มิลลิลิตร 1 × TAE และให้ความร้อนเป็นเวลา 1 นาที ในขณะที่ agarose ถูกระบายความร้อน 1 ไมโครลิตรของ EB ถูกเพิ่มเข้ามา agarose เย็นแล้วเทลงในถาดหล่อ สิบไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่าง (สารสกัดหยาบ 2 mg / ml + พลาสมิดสารสกัดหยาบ 80 mg / ml + พลาสมิด TNE + พลาสมิดพลาสมิดเพียงอย่างเดียว gentamicin 50 mg / ml + พลาสมิดและ gentamicin 100 mg / ml
+ พลาสมิด) ถูกผสม มี 2 ไมโครลิตรของ 6 ×โหลดบัฟเฟอร์และโหลดลงในช่อง สามไมโครลิตรของ 1 กิโลดาลตันเครื่องหมายดีเอ็นเอก็ยังโหลด หลังจากโหลด electrophoresis ได้ดำเนินการที่แรงดันไฟฟ้า 80 V ประมาณ 20 นาที.
แยกและการ Puri ไอออนของสารสกัดหยาบของหนอน
DEAE-Sepharose ไหลเร็วแลกเปลี่ยนไอออน matography chro- และ Sephacryls-200HR กรองเจลโครมาถูกนำมาใช้ในการแยกและชำระ สารสกัดหยาบของหนอน [18-20] ชะและ eluant ได้รับ.
การกำหนดผลกระทบต้านเชื้อแบคทีเรียของสารสกัดหยาบของหนอน, ชะและ eluant โดยวิธี turbidimetric
สองร้อยไมโครลิตรของสารสกัดหยาบของหนอน, ชะหรือ eluant ถูกผสมกับ Tryptone หมัน 22 ไมโครลิตร 10% ตามลำดับ ส่วนผสม (150 ไมโครลิตร) ถูกบันทึกเป็นหมัน 96 แผ่นดีตามด้วยนอกเหนือจาก 30 ไมโครลิตรของการระงับแบคทีเรียปรับลด 1% Tryptone หมันถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ จานได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ OD ที่ 589 นาโนเมตรวัดพร้อมกับเครื่องอ่านแบบอัตโนมัติ tomated microplate ที่ 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, ​​21 และ 24 ชั่วโมงหลังจาก zeroing การดูดกลืนแสงที่มีความว่างเปล่า วิธีการแก้. โค้ง OD-T ได้รับการพล็อตที่มีเวลาในแกน X และความคุ้มค่า OD บนแกน Y