Extraction and assay of amylases (o

Extraction and assay of amylases (only in 2009) Freeze-dried root tissue (50 mg) was suspended in 1.0 ml of extraction buffer [50 mM 4-(2hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulphonic acid-KOH, 5.0 mM MgCl2, 1.0 mM EDTA, and 2.5 mM dithiothreitol; pH 7.5] and kept on ice for 10 min with repeated vortexing.After centrifugation (26,000  g for 15 min at 4ºC) the resulting supernatant was used as the enzyme extract. Total amylolytic activity was determined as described by Steup (1990) and by Bernfeld (1955).Two-fold diluted enzyme extract (50 µl) was mixed with 200 µl of assay buffer (0.1 M 4-morpholine ethanesulphonic acid-KOH, pH 6.2 plus 2 mM CaCl2) containing 1% (w/v) soluble starch (Zulkowsky starch; SIGMA-Aldrich) and incubated for 15 min at 30ºC in a water bath. To determine the extent of hydrolysis of soluble carbohydrates in the enzyme extract,starch was omitted from the assay buffer.The enzyme reaction was stopped by adding 250 µl of alkaline colour reagent,as described by Steup (1990), and the absorbance was measured spectrophotometrically at 546 nm.A calibration curve of maltose was prepared (1 ml samples of which contained 2 mg soluble starch and 0 – 1.5 µmol maltose). Maltose reacted with the alkaline colour reagent and was processed as described above.Total amylase activity was expressed in µmol maltose mg–1 DW min–1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสกัดและวิเคราะห์เนื้อเยื่อรากแห้ง amylases (เฉพาะใน 2009) (50 มิลลิกรัม) ถูกระงับใน 1.0 ml ของบัฟเฟอร์สกัด [50 มม. 4- (2hydroxyethyl) piperazine-1-ethanesulphonic กรดเกาะ dithiothreitol MgCl2, 1.0 mM EDTA และ 2.5 มม. 5.0 มม. pH 7.5] และเก็บไว้บนน้ำแข็ง 10 นาทีกับ vortexing ซ้ำ หลังจากหมุนเหวี่ยง (26,000 g 15 นาทีที่ 4ºC) supernatant ผลถูกใช้เป็นสารสกัดจากเอนไซม์ รวม amylolytic กิจกรรมที่ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ โดย Steup (1990) และ Bernfeld (1955) สารสกัดจากเอนไซม์เจือจางสองเท่า (50 µl) ถูกผสมกับ 200 µl assay บัฟเฟอร์ (กรด 0.1 M 4 morpholine ethanesulphonic เกาะ pH 6.2 พลัส 2 มม. CaCl2) ที่มี 1% (w/v) ละลายแป้ง (แป้ง Zulkowsky SIGMA-Aldrich) และรับการกกที่ 30ºC ในอ่างน้ำ 15 นาที การกำหนดขอบเขตของการย่อยสลายของคาร์โบไฮเดรตละลายในสารสกัดเอนไซม์ แป้งถูกตัดออกจากบัฟเฟอร์ assay หยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ โดยการเพิ่ม 250 µl ของรีเอเจนต์สีด่าง ตามที่อธิบายไว้ โดย Steup (1990), และค่าที่ถูกวัด spectrophotometrically ที่ 546 nm จัดทำเส้นโค้งการสอบเทียบของ maltose (ตัวอย่าง 1 มิลลิลิตรซึ่งมีอยู่ 2 มิลลิกรัมละลายแป้งและ 0 – 1.5 µmol maltose) Maltose ปฏิกิริยากับรีเอเจนต์สีด่าง และประมวลผลตามที่อธิบายไว้ข้างต้น อะไมเลสรวมกิจกรรมได้แสดงออกใน DW µmol maltose มิลลิกรัม – 1 นาที – 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดและการทดสอบของอะมัยเลส (เฉพาะในปี 2009) เนื้อเยื่อรากแช่แข็งแห้ง (50 mg) ถูกระงับใน 1.0 มล. ของบัฟเฟอร์สกัด [50 มิลลิ 4- (2hydroxyethyl) piperazine-1-ethanesulphonic กรดเกาะ 5.0 มิลลิ MgCl2 1.0 มิลลิ EDTA และขนาด 2.5 มม dithiothreitol; พีเอช 7.5] และเก็บไว้ในน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาทีด้วยซ้ำ vortexing.After หมุนเหวี่ยง (26,000? กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่4ºC) เดอะใสส่งผลให้ถูกใช้เป็นสารสกัดจากเอนไซม์ กิจกรรมเอนไซม์ทั้งหมดถูกกำหนดตามที่อธิบาย Steup (1990) และโดยการ Bernfeld (1955) .Two เท่าเจือจางสารสกัดเอนไซม์ (50 ไมโครลิตร) ผสมกับ 200 ไมโครลิตรของ buffer ทดสอบ (0.1 M 4 morpholine ethanesulphonic กรดเกาะพีเอช 6.2 บวก 2 มิลลิ CaCl2) ที่มี 1% (w / v) แป้งที่ละลายน้ำได้ (แป้ง Zulkowsky; Sigma-Aldrich) และบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่ 30 องศาเซลเซียสในอ่างน้ำ เพื่อกำหนดขอบเขตของการย่อยสลายของคาร์โบไฮเดรตที่ละลายในสารสกัดจากเอนไซม์, แป้งถูกตัดออกจากการทดสอบปฏิกิริยาเอนไซม์ buffer.The ก็หยุดโดยการเพิ่ม 250 ไมโครลิตรของสารอัลคาไลน์สีตามที่อธิบาย Steup (1990) และการดูดกลืนแสงที่ถูกวัด spectrophotometrically ที่ 546 nm.A สอบเทียบโค้งมนของมอลโตสถูกจัดทำขึ้น (1 มล. ตัวอย่างที่มี 2 มิลลิกรัมแป้งละลายน้ำและ 0-1.5 ไมโครโมมอลโตส) มอลโตสปฏิกิริยากับน้ำยาสีด่างและได้รับการประมวลผลตามที่อธิบายกิจกรรมอะไมเลส above.Total ถูกแสดงออกในไมโครโมมอลโตส MG-1 DW-1 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดและวิเคราะห์ของกลุ่ม พันธมิตรประชาชนเพื่อประชาธิปไตย ( 2009 ) ตรึงเนื้อเยื่อรากแห้ง ( 50 มิลลิกรัม ) ถูกระงับใน 1.0 มิลลิลิตรสกัดบัฟเฟอร์ [ 50 mm 4 - ( 2hydroxyethyl ) piperazine-1-ethanesulphonic กรดเกาะ , MgCl2 5.0 มม. 1.0 mM EDTA และ 2.5 มม. บัตรแข็ง ; พีเอช 7.5 ] และเก็บไว้ในที่เย็นประมาณ 10 นาที vortexing ซ้ำ หลังจากปั่น ( 26 , 000 G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 º C ) ซึ่งนำมาใช้เป็นเอนไซม์สกัดเข้มข้น กิจกรรมไมโลไลติก ทั้งหมดถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้โดย steup ( 1990 ) และโดย bernfeld ( 1955 ) สองพับ ซึ่งเอนไซม์สกัด ( 50 µลิตร ) ผสมกับ 200 ลิตรต่อµบัฟเฟอร์ ( 0.1 M 4-morpholine ethanesulphonic กรดเกาะ , pH 6.2 บวก 2 มม. CaCl2 ) ที่ประกอบด้วย 1% ( w / v ) แป้ง ( ที่ละลายน้ำ zulkowsky แป้ง ซิกม่า Aldrich ) โดย 15 นาทีที่ 30 º C ในการอาบน้ำ เพื่อกำหนดขอบเขตของการปริมาณคาร์โบไฮเดรตในเอนไซม์สกัด แป้งอาจจะถูกละเว้นจากการทดสอบกันชน ของปฏิกิริยาถูกหยุดโดยการเพิ่ม 250 µผมด่างสารเคมีสี , ตามที่อธิบายไว้โดย steup ( 1990 ) และค่าวัดนี้ที่ 546 นาโนเมตร เป็นรูปโค้งของน้ำตาลที่เตรียมไว้ ( 1 มล ตัวอย่าง ซึ่งมี 2 มก. ปริมาณแป้งและน้ำตาลµ 0 – 1.5 mol ) ปฏิกิริยากับสารละลายด่าง สี น้ำตาล และดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น กิจกรรมเอนไซม์อะไมเลสทั้งหมดถูกแสดงในµ mol มอลโตสมิลลิกรัม ) 1 DW นาที– 1