For comparison with the UHPLC pigment data, especially for the DHI-Mix standard, we adopted a conventional Shimadzu HPLC system consisting of a CBM-20A system controller, two LC-10AT VP pumps (binary high-pressure mixing system), a DGU-20 A5 online degasser, a modified SIL-20 AC autosampler capable of sample pre-treatment with a 500 μl sample loop, a CTO-10 AC VP column oven and a SPD-M20A PDA detector (W lamp, 4 nm bandwidth, 1.2 nm slit, 640 ms sampling frequency, 640 ms time-constant for data filtering, and 400–700 nm in detection range) equipped with a 10 mm path length flow cell (10 μL in volume). An Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8 Rapid Resolution column (3.5 μm particle size, 4.6 × 150 mm, 80 × 10− 10 m pore size, 180 m2 g− 1 surface area, double end-capped, and 7.6% carbon load) connected with an Agilent Eclipse XDB-C8 cartridge (3.5 μm particle size, 4.6 × 30 mm) as a guard column was installed in the column oven. The eluents and column temperature of the HPLC system were the same as those of the UHPLC described above. Following Van Heukelem and Thomas (2001), chlorophylls and carotenoids were separated with a linear gradient from 5% to 95% of Eluent B over the course of 22 min, followed by an isocratic hold at 95% of Eluent B for 8 min. The flow rate was set at 1.2 mL min− 1. The sample holder in the autosampler was cooled at 4 °C. For sample injection, the pigment extract or standard (total 125 μL) and 28 mM TBAA solution (total 125 μL) were drawn into the sample loop of the autosampler in a similar manner as in the UHPLC technique (i.e., sample 25 μL × 5 times, TBAA solution 25 μL × 5 times, insert 2 μL of air between sample and TBAA solution; cf. Table 2) and were subsequently injected onto the column. The methods for the identification and quantification of pigments were the same as those in the UHPLC technique described above.
เปรียบเทียบกับ uhplc สีข้อมูล โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ Dh ผสมมาตรฐาน เราใช้แบบ Shimadzu HPLC ระบบประกอบด้วย ระบบ cbm-20a ตัวควบคุมสองปั๊ม VP lc-10at ( ไบนารีระบบแรงดันสูงผสม ) , dgu-20 A5 ออนไลน์ degasser , แก้ไข sil-20 AC autosampler สามารถตัวอย่างก่อนด้วย 500 μ l ตัวอย่างวง , ตู้อบคอลัมน์ cto-10 AC VP และ spd-m20a PDA เครื่องตรวจจับ ( W โคมไฟ 4 nm แบนด์วิธ 1.2 nm เชือด , 640 นางสาวการสุ่มตัวอย่างความถี่ , 640 นางสาวเวลาคงที่สำหรับการกรองข้อมูล และ 400 - 700 nm ในรัศมี ) พร้อมกับ 10 มม. ความยาวเส้นทางการไหลของเซลล์ ( 10 μ L ในเล่ม ) เป็นเลนต์ zorbax คราส xdb-c8 อย่างรวดเร็วแก้ไขคอลัมน์ ( 3.5 μ M ขนาด 4.6 150 มม. ×× 10 − 10 , 80 M ขนาดรูพรุน 180 m2 G − 1 พื้นที่ผิว คู่สุดท้ายปรบมือ และ 7.6% คาร์บอนโหลด ) เชื่อมต่อกับ Agilent คราส xdb-c8 ตลับ ( 3.5 μ M ขนาด 4.6 × 30 มม. ) เป็นการ์ดคอลัมน์คอลัมน์ถูกติดตั้งในเตาอบ ตัวชะและคอลัมน์ที่อุณหภูมิของระบบ HPLC เป็นเช่นเดียวกับที่ของ uhplc อธิบายไว้ข้างต้น ตามรถตู้ heukelem โธมัส ( 2001 ) , คลอโรฟิลล์และแคโรทีนอยด์ ต้องแยกจากกัน ด้วยการไล่ระดับสีเส้นจาก 5% ถึง 95% ของตัว B มากกว่าหลักสูตรของ 22 นาทีตามด้วยการถือ Isocratic ที่ 95% ของตัว B 8 นาทีอัตราการไหลไว้ที่ 1.2 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 ตัวอย่างที่ใส่ใน autosampler คือเย็น 4 องศา สำหรับการฉีดตัวอย่าง , เม็ดสารสกัดหรือมาตรฐาน ( รวม 125 μ L ) และโซลูชั่น tbaa 28 มม. ( รวม 125 μ L ) ถูกดึงเข้าไปในตัวอย่างของห่วง autosampler ในลักษณะคล้ายเทคนิค uhplc ( เช่น ตัวอย่าง 25 μ L × 5 ครั้ง tbaa โซลูชั่น 25 μ L × 5 ครั้ง ใส่μ L ของอากาศระหว่างตัวอย่างและ tbaa โซลูชั่น ; CF . ตารางที่ 2 ) และเมื่อฉีดลงบนคอลัมน์ วิธีการสำหรับการระบุและปริมาณของเม็ดสีได้เช่นเดียวกับใน uhplc เทคนิคที่อธิบายข้างต้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
