A panel consisting of 25 microsatel

A panel consisting of 25 microsatellite markers was selected for the
diversity analysis of Tibetan sheep population. These were chosen from
literature related with sheep diversity studies aiming to analyze highly
polymorphic markers spread across the genome. These markers also
adhere to the guidelines of International Society for Animal Genetics
and FAO (http://dad.fao.org/en/refer/library/guidelin/marker.pdf).
Detailed information on primers is presented in Table 1. Forwardprimer
of each marker was 5′ labeled with fluorescent dye, i.e. FAM, NED, PET
and VIC. PCR amplification was performed in a reaction volume of
25 μl on i-cycler. Reaction mixture consisted of 50–100 ng of genomic
DNA, 200 μM of each dNTP, 50 pM of each primer and 0.5 units of Taq
DNA polymerase. The amplification was carried out using a Touchdown
program for all microsatellite loci, which consists of initial denaturation
of 95 °C for 1min; 3 cycles of 95 °C for 45 s and 60 °C for 1 min, 3 cycle of
95 °C for 45 s and 57 °C for 1 min; 3 cycles of 95 °C for 45 s and 54 °C for
1 min, 3 cycles of 95 °C for 45 s and 51 °C for 1 min and 20 cycles of 95 °C
for 45 s and 48 °C for 1 min. The PCR amplification was confirmed by
electrophoresing the products in 1.8% agarose gel followed by staining
with ethidium bromide (0.5 mg/ml). PCR products were multiplexed
(Table 1) and genotyping was carried out on an automated ABI-3100
DNA sequencer (Applied Biosystems, USA) using LIZ 500 as the
internal size standard (Applied Biosystems, USA). Allele sizing was
done using GeneMapper™ software v 3.7. Stutter related scoring
error, often seen in dinucleotide repeats, was absent and alleles could
be scored unambiguously.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แผงประกอบด้วยเมตตา 25 เลือกสำหรับการการวิเคราะห์ความหลากหลายของประชากรแกะทิเบต เหล่านี้ถูกเลือกจากวรรณกรรมที่เกี่ยวข้องกับการศึกษาความหลากหลายของแกะการวิเคราะห์สูงเครื่องหมาย polymorphic แพร่กระจายทั่วจีโน เครื่องหมายเหล่านี้ยังปฏิบัติตามแนวทางของสังคมนานาชาติพันธุศาสตร์สัตว์และ FAO (http://dad.fao.org/en/refer/library/guidelin/marker.pdf)รายละเอียดเกี่ยวกับไพรเมอร์จะแสดงในตารางที่ 1 Forwardprimerของแต่ละเครื่องหมายถูกติดป้ายชื่อ ด้วยสีย้อมฟลูออเรสเซนต์ เช่น FAM, NED สัตว์เลี้ยงของ 5′และทำ VIC. ปลักในปฏิกิริยาระดับΜl 25 บน i cycler ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา 50-100 ฉบับของจีโนมของดีเอ็นเอ 200 μ m ของแต่ละ dNTP, 50 น.ของแต่ละสีรองพื้นและ Taq 0.5 หน่วยดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ขยายการดำเนินการใช้ทัชดาวน์โปรแกรมทุกชนิด microsatellite loci ซึ่งประกอบด้วยต้น denaturation95 องศาเซลเซียส 1 นาที รอบ 3 95 ° c 45 s และ 60 ° C เป็นเวลา 1 นาที 3 รอบของ95 ° C สำหรับ s และ 57 ° C เป็นเวลา 1 นาที 45 รอบ 3 95 ° c สำหรับ s 45 และ 54 ° C สำหรับ1 นาที รอบ 3 95 ° c สำหรับ s 45 และ 51 ° C เป็นเวลา 1 นาทีและ 20 รอบ 95 ° cสำหรับ s 45 และ 48 ° C เป็นเวลา 1 นาที ปลักการยืนยันการelectrophoresing ผลิตภัณฑ์ใน 1.8% agarose เจลตาม ด้วยย้อมสีมีโบรไมด์ ethidium (0.5 mg/ml) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูก multiplexed(ตารางที่ 1) และ genotyping ดำเนินในการ ABI-3100 อัตโนมัติดีเอ็นเอซีเควนเซอร์ (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ USA) ใช้ 500 ลิซเป็นการภายในขนาดมาตรฐาน (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ สหรัฐอเมริกา) มีขนาดอัลลีลทำได้โดยใช้ GeneMapper™ ซอฟต์แวร์ v 3.7 Stutter ที่เกี่ยวข้องในการให้คะแนนข้อผิดพลาด มักจะเห็นใน dinucleotide ทำซ้ำ ขาด และอาจ allelesคะแนนอย่างชัดเจน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แผงประกอบด้วย 25 เครื่องหมายไมโครได้รับเลือกสำหรับ
การวิเคราะห์ความหลากหลายของประชากรแกะทิเบต เหล่านี้ได้รับการแต่งตั้งจาก
วรรณกรรมที่เกี่ยวข้องกับความหลากหลายแกะศึกษามีวัตถุประสงค์เพื่อวิเคราะห์สูง
เครื่องหมาย polymorphic แผ่กระจายไปทั่วจีโนม เครื่องหมายเหล่านี้ยัง
เป็นไปตามหลักเกณฑ์ของสมาคมระหว่างประเทศเพื่อสัตว์พันธุศาสตร์
และ FAO (http://dad.fao.org/en/refer/library/guidelin/marker.pdf).
ข้อมูลรายละเอียดเกี่ยวกับไพรเมอร์จะนำเสนอในตารางที่ 1 Forwardprimer
ของแต่ละเครื่องหมายเป็น 5 'กำกับด้วยสีย้อมเรืองแสงคือ FAM, NED, PET
และ VIC ขยาย PCR ที่ได้ดำเนินการในปริมาณปฏิกิริยาของ
25 ไมโครลิตร I-Cycler ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 50-100 NG ของจีโนม
ดีเอ็นเอ 200 ไมครอนของแต่ละ dNTP 50 นของแต่ละไพรเมอร์และ 0.5 หน่วย Taq
DNA Polymerase ขยายได้ดำเนินการโดยใช้ทัชดาวน์
โปรแกรมสำหรับทุกตำแหน่งไมโครซึ่งประกอบด้วย denaturation เริ่มต้น
จาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที; 3 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 และ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 3 วงจรของ
95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 และ 57 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที; 3 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 และ 54 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
1 นาที 3 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 และ 51 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 20 รอบของ 95 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 45 และ 48 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที . ขยาย PCR ได้รับการยืนยันโดย
electrophoresing สินค้าในเจล agarose 1.8% ตามมาด้วยการย้อมสี
ด้วย ethidium bromide (0.5 mg / ml) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มี multiplexed
(ตารางที่ 1) และ genotyping ได้ดำเนินการบนอัตโนมัติ ABI-3100
ดีเอ็นเอซีเควน (Applied Biosystems, สหรัฐอเมริกา) โดยใช้ LIZ 500 เป็น
ขนาดมาตรฐานภายใน (Applied Biosystems, สหรัฐอเมริกา) ศาสตร์การปรับขนาดได้รับการ
ทำโดยการใช้ซอฟแวร์ GeneMapper ™ V 3.7 พูดติดอ่างเกณฑ์การให้คะแนนที่เกี่ยวข้องกับ
ข้อผิดพลาดที่มักจะเห็นในซ้ำ dinucleotide, ขาดและอัลลีลอาจ
จะได้คะแนนอย่างไม่น่าสงสัย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แผงประกอบด้วย 25 เครื่องหมายไมโครแซทเทลไลท์ถูกเลือกสำหรับการวิเคราะห์ความหลากหลายของประชากรแกะชาวธิเบต เหล่านี้ได้รับเลือกจากวรรณกรรมที่เกี่ยวข้องกับความหลากหลายของการศึกษามุ่งวิเคราะห์สูง แกะที่มีเครื่องหมายกระจายทั่วจีโนม . เครื่องหมายเหล่านี้ยังตามแนวทางของสมาคมพันธุศาสตร์สัตว์และ องค์การอาหารและเกษตรแห่งสหประชาชาติ ( http : / / พ่อ เฝ้า . org / en / อ้างอิง / ห้องสมุด / guidelin / เครื่องหมาย . pdf )ข้อมูลรายละเอียดเกี่ยวกับดีเอ็นเอที่แสดงในตารางที่ 1 forwardprimerของแต่ละเครื่องหมาย 5 ได้รับข้อความด้วยสีเรืองแสง , เช่น แฟม เน็ด สัตว์เลี้ยงและ วิค PCR ( แสดงในปฏิกิริยา ปริมาณของ25 μ L ใน i-cycler . ผสมปฏิกิริยาจำนวน 50 – 100 กรัมของจีโนมดีเอ็นเอ , 200 μ M ของแต่ละ dntp 50 PM ของแต่ละสีและ 0.5 หน่วยของทัคดีเอ็นเอพอลิเมอเรส . การเพิ่มปริมาณการใช้ทัชดาวน์โปรแกรมของชนิดทั้งหมดซึ่งประกอบด้วย ( เริ่มต้น95 องศา C เป็นเวลา 1 นาที 3 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 45 และ 60 องศา C เป็นเวลา 1 นาที 3 รอบ95 องศา C เป็นเวลา 45 และ 56 ° C เป็นเวลา 1 นาที 3 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 45 และ 54 ° C สำหรับ1 นาที , 3 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 45 และ 51 ° C เป็นเวลา 1 นาที และ 20 รอบ 95 องศา C45 และ 48 องศา C เป็นเวลา 1 นาที การตรวจแบบยืนยันโดยelectrophoresing ผลิตภัณฑ์ 1.8 % เจลตามด้วย .กับทิเดียมโบรไมด์ ( 0.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ผลิตภัณฑ์ PCR เป็นมัลติเพลกซ์( ตารางที่ 1 ) และเขตข้อมูลใน abi-3100 อัตโนมัติลำดับของดีเอ็นเอ ( Applied Biosystems , USA ) ใช้ลิซ 500 เป็นขนาดมาตรฐานภายใน ( Applied Biosystems สหรัฐอเมริกา ) ซึ่งเป็นขนาดทำโดยใช้ซอฟต์แวร์™ genemapper V 3.7 การพูดติดอ่างที่เกี่ยวข้องการให้คะแนนข้อผิดพลาดที่มักจะเห็นในไดนิวคลีโอไทด์ที่ซ้ำกัน , การขาดและอัลลีลที่สามารถได้รับคะแนนอย่างไม่น่าสงสัย .