CsCath L specific activity was meas

CsCath L specific activity was measured according to the
methodology of Stephens et al ( 2012) with slight modifications.
The activity was determined by using the cathepsin L
fluorogenic substrate (Ac-HRYR-ACC) (Merck) in protein
extracts obtained from various organs of C. striatus including
liver, spleen, heart, kidney, head kidney, blood, skin, gill,
brain, muscle and intestine. The assays were conducted at
30◦
C in 96-well plates as follows: 20 µL of protein (concentration
= 500 µg) extract from fish organs were mixed with a
buffer solution (100 mM sodium acetate, 1.5 mM ethylenediaminetetraacetic
acid, 2 mM dithiothreitol and 0.05% Triton
X-100; pH 5.5). The reaction was set by adding the
cathepsin L fluorogenic substrate to a final concentration
of 100 µM. The activity was recorded, measured at 440 nm
and calculated as explained by manufacturer’s protocol. The
similar protocol was followed to study the enzyme activity
at various time points (3, 6, 12, 24 and 48 h) in spleen tissue
infected with fungus and bacteria. PBS (1X) served as
control. All the assays were performed in three duplicates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

CsCath L เฉพาะกิจกรรมซึ่งวัดได้ตามวิธีของสตีเฟนส์ et al (2012) การแก้ไขเล็กน้อยกำหนดกิจกรรมโดย cathepsin Lพื้นผิว fluorogenic (ACC HRYR Ac) (Merck) ในโปรตีนสารสกัดที่ได้จากอวัยวะต่าง ๆ ของปลาช่อน C. รวมทั้งตับ ม้าม หัวใจ ไต หัวไต เลือด ผิวหนัง เหงือกสมอง กล้ามเนื้อ และลำไส้ Assays ได้ดำเนินการที่30◦C ในจาน 96 หลุมเป็นดังนี้: 20 µL (ความเข้มข้นของโปรตีน= 500 µg) แยกจากอวัยวะถูกผสมกับปลาเป็นละลายบัฟเฟอร์ (100 mM โซเดียมอะซิเตท 1.5 มม. ethylenediaminetetraaceticกรด dithiothreitol 2 มม. และ 0.05% ไทรทันX-100 pH 5.5) ปฏิกิริยาที่ถูกกำหนด โดยการเพิ่มการพื้นผิว fluorogenic cathepsin L เพื่อความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 ไมครอน กิจกรรมที่บันทึกไว้ วัดที่ 440 นิวตันเมตรและคำนวณตามที่อธิบายไว้ โดยผู้ผลิตโพรโทคอล การตามมาศึกษากิจกรรมเอนไซม์คล้ายโพรโทคอลหลายครั้งจุด (3, 6, 12, 24 และ 48 ชั่วโมง) ในเนื้อเยื่อม้ามการติดเชื้อแบคทีเรียและเชื้อรา PBS (1 X) เป็นการควบคุม Assays ทั้งหมดถูกดำเนินการในสามซ้ำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

CsCath L เฉพาะกิจกรรมที่วัดตาม
วิธีการของสตีเฟนส์, et al (2012) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
กิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยใช้ cathepsin L
แจงสารตั้งต้น (AC-HRYR-ACC) (เมอร์ค) โปรตีน
สารสกัดที่ได้จากอวัยวะต่าง ๆ ของซี striatus รวมทั้ง
ตับม้ามหัวใจ, ไต, ไต, เลือด, ผิวหนังเหงือก
สมองกล้ามเนื้อและลำไส้ ตรวจได้ดำเนินการที่
30◦
ซีในแผ่น 96 หลุมดังนี้ 20 ไมโครลิตรของโปรตีน (ความเข้มข้น
= 500 ไมโครกรัม) สารสกัดจากอวัยวะปลาผสมกับ
สารละลายบัฟเฟอร์ (100 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตท 1.5 มิลลิ Ethylenediaminetetraacetic
กรด dithiothreitol 2 mm และ 0.05% Triton
X-100; ค่า pH 5.5)
ปฏิกิริยาที่ถูกกำหนดโดยการเพิ่ม cathepsin L พื้นผิวการแจงความเข้มข้นสุดท้าย
100 ไมครอน กิจกรรมที่ถูกบันทึกไว้โดยวัดที่ 440 นาโนเมตร
และคำนวณตามที่อธิบายไว้โดยโปรโตคอลของผู้ผลิต
โปรโตคอลที่คล้ายกันคือใช้เพื่อการศึกษากิจกรรมของเอนไซม์
ที่จุดต่างๆเวลา (3, 6, 12, 24 และ 48 ชั่วโมง) ในเนื้อเยื่อของม้าม
ติดเชื้อราและแบคทีเรีย พีบีเอส (1X) ทำหน้าที่เป็นผู้
ควบคุม การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการในสามรายการที่ซ้ำกัน 24 และ 48 ชั่วโมง) ในเนื้อเยื่อของม้าม ติดเชื้อราและแบคทีเรีย พีบีเอส (1X) ทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการในสามรายการที่ซ้ำกัน 24 และ 48 ชั่วโมง) ในเนื้อเยื่อของม้าม ติดเชื้อราและแบคทีเรีย พีบีเอส (1X) ทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการในสามรายการที่ซ้ำกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง cscath ผมวัดไปตามวิธีการของสตีเฟ่น et al ( 2012 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยกิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยการใช้ความเป็นนักพัฒนาfluorogenic พื้นผิว ( AC hryr ACC ) ( Merck ) ในโปรตีนสารสกัดที่ได้จากอวัยวะต่าง ๆ ของ สด ได้แก่ตับ ม้าม หัวใจ ไต สมอง ไต เลือด ผิวหนัง เหงือกสมอง กล้ามเนื้อ และไส้ หรือจำนวนที่30 ◦C ใน 96 ดีแผ่นดังนี้ 20 µ L ( ความเข้มข้นของโปรตีนµ = 500 กรัม สารสกัดจากปลาผสมกับอวัยวะสารละลายบัฟเฟอร์ ( 100 mM โซเดียมอะซิเตต , 1.5 มิลบอนกรด , 2 มม. บัตรแข็งและ 0.05 % ไทรทันเมื่อ ; พีเอช 5.5 ) ปฏิกิริยาที่ถูกตั้งโดย เพิ่มความเป็นนักพัฒนา fluorogenic วัสดุความเข้มข้นสุดท้าย100 เมตร µกิจกรรมที่วัด nm 440 บันทึกและคำนวณโดยอธิบายขั้นตอนของผู้ผลิต ที่ขั้นตอนที่คล้ายกันคือตามการศึกษากิจกรรมของเอนไซม์ณ จุดเวลาต่าง ๆ ( 3 , 6 , 12 , 24 และ 48 ชั่วโมง ) ในเนื้อเยื่อที่ม้ามติดเชื้อราและแบคทีเรีย ( 1 ) ทำหน้าที่เป็นช่องควบคุม พบทั้งหมดจำนวน 3 ซ้ำกัน