2. Materials and methods2.1. Reagen

2. Materials and methods
2.1. Reagents
Vemurafenib, erlotinib and sorafenib were purchased from LC
laboratories (Woburn, USA), HPLC grade acetonitrile, and dimethylsulfoxide
(DMSO) from VWR (Fontenay-sous-Bois, France). Glycine
and sodium chloride were purchased from Sigma (St. Louis, MO,
USA). Deionised purified water was prepared in the laboratory
using an ELGA system (Veolia, Le Plessis Robinson, France).
2.2. Stock and working standard solution
Stock solutions containing 1 mg/mL of vemurafenib, erlotinib
and sorafenib (internal standard, IS) were prepared in DMSO, then
aliquoted and stored at
−20 ◦C in the dark. Each day, working
solutions of vemurafenib (50 mg/L) and erlotinib (40 mg/L and
2 mg/L) were freshly prepared with drug-free plasma and from
these solutions a set of 7 calibrating standards ranging from 1.25
to 100 mg/L for vemurafenib and from 50 to 4000 g/L for erlotinib
was prepared. In-house quality controls (IQC) were prepared using
different stock solutions of vemurafenib and erlotinib. Concentrations
of IQC were 4, 20 and 100 mg/L for vemurafenib, and 160,
800 and 4000 g/L for erlotinib. Finally, a working solution of IS
(20 mg/L) was freshly prepared with deionised purified water.
2.3. Chromatographic apparatus and conditions
The chromatography system consisted of Dionex Ultimate 300
equipped with a gradient pump with degas option and gradient
mixer, a UV–visible detector, an autosampler, and a Chromeleon®
chromatography workstation (Dionex Corporation, Sunnyvale, CA,
USA). Chromatographic separation was achieved on C8 Xterra®
MS (250 mm
×
4.6 mm, 5 m; Waters, Milford, USA) associated
with a guard column packed with the same bonded phase. The
mobile phase consisted of a mixture of glycine buffer (pH 9.0,
100 mM,) and acetonitrile (45:55, v/v) and was delivered at a flow
rate of 0.9 mL/min throughout the 12-min run. Chromatography
was performed at 50 ◦C. Dual UV wavelength mode was used with
vemurafenib and sorafenib monitored at 249 nm, and erlotinib at
331 nm.
2.4. Sample preparation
First, 50 l of IS at 20 mg/L was added to 200 l of plasma (calibration
standard, IQC or plasma sample). After mixing, 250 l of
acetonitrile was added and the sample vortexed for 10 min with a
VX-2500 Multi-Tube Vortexer® (VWR). Then, the tubes were centrifuged
10 min at 10,900 rpm at room temperature. 400 l of the
supernatant were transferred into a glass tube and evaporated to
dryness at 40 ◦C under nitrogen stream. The residue was reconstituted
in 70 l of mobile phase and 50 l of each sample was injected
into the chromatographic system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. Materials and methods2.1. ReagentsVemurafenib, erlotinib and sorafenib were purchased from LClaboratories (Woburn, USA), HPLC grade acetonitrile, and dimethylsulfoxide(DMSO) from VWR (Fontenay-sous-Bois, France). Glycineand sodium chloride were purchased from Sigma (St. Louis, MO,USA). Deionised purified water was prepared in the laboratoryusing an ELGA system (Veolia, Le Plessis Robinson, France).2.2. Stock and working standard solutionStock solutions containing 1 mg/mL of vemurafenib, erlotiniband sorafenib (internal standard, IS) were prepared in DMSO, thenaliquoted and stored at−20 ◦C in the dark. Each day, workingsolutions of vemurafenib (50 mg/L) and erlotinib (40 mg/L and2 mg/L) were freshly prepared with drug-free plasma and fromthese solutions a set of 7 calibrating standards ranging from 1.25to 100 mg/L for vemurafenib and from 50 to 4000 g/L for erlotinibwas prepared. In-house quality controls (IQC) were prepared usingdifferent stock solutions of vemurafenib and erlotinib. Concentrationsof IQC were 4, 20 and 100 mg/L for vemurafenib, and 160,800 and 4000 g/L for erlotinib. Finally, a working solution of IS(20 mg/L) was freshly prepared with deionised purified water.2.3. Chromatographic apparatus and conditionsThe chromatography system consisted of Dionex Ultimate 300equipped with a gradient pump with degas option and gradientmixer, a UV–visible detector, an autosampler, and a Chromeleon®เวิร์กสเตชัน chromatography (Dionex Corporation, Sunnyvale, CAสหรัฐอเมริกา) แยก chromatographic สำเร็จบน C8 XterraMS (250 มม.×4.6 มม. ม. 5 น้ำ ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) มีการเชื่อมโยงมีคอลัมน์รักษาบรรจุ ด้วยผูกระยะเดียวกัน ที่ระยะเคลื่อนที่ประกอบด้วยส่วนผสมของ glycine บัฟเฟอร์ (pH 9.0100 มม.,) และ acetonitrile (45:55, v/v) และมีขั้นตอนการส่งอัตรา 0.9 mL/min ตลอดนาที 12 ที่ทำงาน Chromatographyที่ดำเนินการใน 50 ◦C ใช้กับโหมดความยาวคลื่น UV สองvemurafenib และตรวจสอบที่ 249 nm และ erlotinib ที่ sorafenib331 nm2.4. ตัวอย่างครั้งแรก เพิ่ม l 50 ของ IS ที่ 20 mg/L กับ l 200 ของพลาสมา (เทียบมาตรฐาน IQC หรือพลาสม่าตัวอย่าง) หลังจากผสม 250 ลิตรเพิ่ม acetonitrile และ vortexed ตัวอย่างใน 10 นาทีด้วยการVX-2500 หลายหลอด Vortexer ® (VWR) จากนั้น มี centrifuged หลอดที่เพียง 10900 rpm ที่อุณหภูมิห้อง 10 นาที 400 ลิตรของการsupernatant เป็นหลอดแก้ว และการที่หายไปความแห้งกร้านที่ ◦C 40 ภายใต้กระแสไนโตรเจน สารตกค้างถูก reconstitutedใน 70 l ของเฟสเคลื่อนที่ และ l 50 ของแต่ละอย่างถูกฉีดเข้าสู่ระบบ chromatographic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 รีเอเจนต์
Vemurafenib, erlotinib และ sorafenib ที่ซื้อมาจาก LC
ห้องปฏิบัติการ (วูสหรัฐอเมริกา) เกรด HPLC acetonitrile และ Dimethylsulfoxide
(DMSO) จาก VWR (Fontenay-sous-Bois ฝรั่งเศส) Glycine
และโซเดียมคลอไรด์ที่ซื้อมาจากซิกม่า (เซนต์หลุยส์, MO,
USA) น้ำบริสุทธิ์ Deionised
ถูกจัดทำขึ้นในห้องปฏิบัติการใช้ระบบELGA (โอเลียเลอ Plessis โรบินสันฝรั่งเศส).
2.2 หุ้นและการทำงานแก้ปัญหามาตรฐานการแก้ปัญหาที่มีสต็อก 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร Vemurafenib erlotinib, และ sorafenib (มาตรฐานภายใน IS) ได้จัดทำขึ้น DMSO แล้วaliquoted และเก็บไว้ที่-20 ◦Cในที่มืด ในแต่ละวันการทำงานการแก้ปัญหาของ Vemurafenib (50 มิลลิกรัม / ลิตร) และ erlotinib (40 มิลลิกรัม / ลิตรและ 2 มิลลิกรัม / ลิตร) ได้จัดทำสดใหม่ที่มีพลาสม่ายาเสพติดฟรีและวิธีการเหล่านี้ชุดของ7 มาตรฐานการสอบเทียบตั้งแต่ 1.25 ถึง 100 มก. / L สำหรับ Vemurafenib และ 50-4000? กรัม / ลิตรสำหรับ erlotinib ถูกจัดทำขึ้น ในบ้านที่มีคุณภาพการควบคุม (IQC) ได้จัดทำขึ้นโดยใช้การแก้ปัญหาที่แตกต่างกันของหุ้นVemurafenib และ erlotinib ความเข้มข้นของ IQC 4, 20 และ 100 มิลลิกรัม / ลิตรสำหรับ Vemurafenib และ 160, 800 และ 4000? กรัม / ลิตรสำหรับ erlotinib สุดท้ายวิธีการแก้ปัญหาการทำงานของ IS (20 มิลลิกรัม / ลิตร) ถูกจัดทำสดใหม่ด้วยน้ำบริสุทธิ์ deionised. 2.3 เครื่องโครมาและเงื่อนไขระบบโคประกอบด้วย Dionex สุดยอด 300 ติดตั้งเครื่องสูบน้ำที่มีตัวเลือกการไล่ระดับสีเดอกาส์และการไล่ระดับสีผสม, เครื่องตรวจจับรังสียูวีที่มองเห็นการฉีดตัวอย่างอัตโนมัติและChromeleon®เวิร์กสเตชันโค(Dionex คอร์ปอเรชั่นซันนีเวล, CA, USA) แยกโครมาก็ประสบความสำเร็จใน C8 Xterra® MS (250 มม× 4.6 มิลลิเมตร, 5 เมตร; Waters, ฟอร์ดประเทศสหรัฐอเมริกา) ที่เกี่ยวข้องกับคอลัมน์ยามเต็มไปด้วยขั้นตอนการผูกมัดเดียวกัน เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยส่วนผสมของบัฟเฟอร์ไกลซีน (pH 9.0, 100 มิลลิ) และ acetonitrile (45:55, v / v) และได้รับการส่งมอบที่ไหลอัตรา0.9 มิลลิลิตร / นาทีตลอดระยะเวลา 12 นาที โครมาโตได้ดำเนินการที่ 50 ◦C โหมดความยาวคลื่นรังสียูวีที่ใช้คู่กับVemurafenib และ sorafenib ตรวจสอบที่ 249 นาโนเมตรและมี erlotinib ที่331 นาโนเมตร. 2.4 การเตรียมความพร้อมตัวอย่างแรก 50 ลิตรเป็น 20 มิลลิกรัม / ลิตรถูกบันทึกอยู่ใน 200 ลิตรพลาสม่า (การสอบเทียบมาตรฐานIQC หรือตัวอย่างพลาสม่า) หลังจากผสม 250 ลิตรacetonitrile ถูกบันทึกและตัวอย่างการ vortex เวลา 10 นาทีกับVX-2500 Multi-Tube Vortexer® (VWR) จากนั้นหลอดที่ถูกปั่น10 นาทีที่ 10,900 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้อง 400? ลิตรของสารละลายถูกย้ายลงในหลอดแก้วและระเหยเพื่อความแห้งกร้านที่40 ◦Cภายใต้กระแสไนโตรเจน ที่เหลือได้รับการสร้างขึ้นใน 70 ลิตรเฟสเคลื่อนที่และ 50 ลิตรแต่ละตัวอย่างถูกฉีดเข้าสู่ระบบโครมา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมี
vemurafenib erlotinib โซราฟีนิบ , และซื้อมาจากห้องปฏิบัติการ LC
( Woburn , USA ) , ไนเกรด HPLC และไดเมทิลซัลฟอกไซด์
( DMSO ) จากอนาคีเมีย ( ฟอนทาเน่ซูบัวส์ , ฝรั่งเศส ) ไกลซีน
และโซเดียมคลอไรด์ ซื้อมาจาก Sigma ( St . Louis , MO
, USA ) deionised น้ำบริสุทธิ์เตรียมขึ้นในห้องปฏิบัติการโดยใช้ระบบ (
elga Veolia ,เลอเพล ิส โรบินสัน , ฝรั่งเศส ) .
2.2 . หุ้นและหุ้นโซลูชั่นที่มีการทำงานมาตรฐานโซลูชั่น
1 มก. / มล. vemurafenib erlotinib โซราฟีนิบ (
, และมาตรฐานภายใน ) เตรียมใน DMSO แล้ว

aliquoted และเก็บไว้ที่− 20 ◦องศาเซลเซียสในที่มืด ในแต่ละวัน , โซลูชั่นการทำงาน
ของ vemurafenib ( 50 mg / L ) ที ( 40 mg / l และ
2 มก. / ล. ) สด เตรียมยาในพลาสมาและจาก
ฟรีโซลูชั่นเหล่านี้ชุด 7 สอบเทียบมาตรฐานตั้งแต่ 1.25
100 มิลลิกรัม / ลิตร สำหรับ vemurafenib และจาก 50 000  กรัม / ลิตรสำหรับ erlotinib
ที่เตรียมไว้ ในการควบคุมคุณภาพบ้าน ( IQC ) เตรียมใช้
แตกต่างกันหุ้นโซลูชั่นของ vemurafenib ที . ความเข้มข้น
ของ IQC จำนวน 4 , 20 และ 100 มก. / ล. vemurafenib และ 160 , 000 
800 กรัมต่อลิตร erlotinib . สุดท้าย การทำงานแก้ปัญหาของ
( 20 mg / L ) คือสดใหม่ ปรุงด้วยน้ำบริสุทธิ์ deionised .
2.3 เครื่องมือและเงื่อนไขโครมโครม
ประกอบด้วย DIONEX สูงสุด 300
พร้อมปั๊มลาดด้วยเดอกาส์ตัวเลือกผสมและลาด
, UV –มองเห็นเครื่องเป็น autosampler และเวิร์กสเตชันโครม chromeleon ®
( DIONEX Corporation , Sunnyvale , CA ,
สหรัฐอเมริกา )ดิ้นรนอยู่ได้ xterra ดอง®
MS ( 250 มม. ×

4.6 มม. , 5  M ; น้ำที่มิลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา ) ที่เกี่ยวข้องกับคอลัมน์ที่บรรจุด้วย
ยามเดียวกัน ผูกพัน เฟส
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยส่วนผสมของไกลซีนบัฟเฟอร์ pH 9.0
100 มม. ) และไน ( 45:55 , v / v ) และถูกส่งในอัตราการไหล
0 มล. / นาทีตลอด 12 นาทีวิ่ง โครมาโตกราฟี
แสดงที่ 50 ◦ C