RAPD analysisA total of 100 random

RAPD analysis
A total of 100 random primers (Operon kits A, C, D, F and X) were tested, 20 of which produced clear and unambiguous bands when analysed by gel electrophoresis. These 20 primers (OPA-02, -03, -18; OPC-02, -06, -08, -11, -14, -20; OPD-07, -08, -13, -20; OPF-04, -14, -16; OPX-02, -03, -07 and -17) were then re-tested. RAPD reactions were performed in 96-well polycarbonate microplates (Techne, Duxford, UK) on a Techne PHC3 thermal cycler. A drop of light mineral oil (Sigma, Poole, UK) was placed in each well on the thermal cycler to ensure maximum heat transfer between the machine and the microplate. Reactions were carried out in 25 μL volumes containing 1 × reaction buffer (20 mm (NH4)2SO4, 75 mm Tris-HCl pH 9.0, 0.01% w/v Tween), 2.5 mm MgCl2, 0.1 mm dNTPs, 5 pmol primer (Operon Technologies, Alameda (CA), USA), 2.5 U ‘Red Hot’ DNA polymerase (Advanced Biotechnologies Ltd, Epsom, UK) and 25 ng template DNA. Reactants were covered with 30 μL light mineral oil (Sigma, Poole, UK) before cycling as follows: denaturation at 94°C for 2 min followed by 35 cycles of 94°C for 1 min, 35°C for 1 min and 72°C for 1 min (with a ramp rate from 35 to 72°C of 1°C every 4 s) with a final extension at 72°C for 10 min. Amplified bands were resolved by electrophoresing 20 μL of each reaction on a 1.5% (w/v) agarose gel in 0.5 × TBE (45 mm Tris-borate, 1 mm EDTA) stained with ethidium bromide (1 μg mL−1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ดีเอ็นเอ
รวม 100 ไพรเมอร์แบบสุ่ม (Operon ชุด A, C, D, F และ X) ได้มีการทดสอบ, 20 ซึ่งผลิตวงดนตรีที่ชัดเจนและโปร่งใสเมื่อวิเคราะห์โดย gel electrophoresis เหล่านี้ 20 ไพรเมอร์ (OPA-02, -03, -18; OPC-02, -06, -08, -11, -14, -20; OPD-07, -08, -13, -20; OPF-04, -14, -16; OPX-02, -03, -07 และ -17) ได้รับแล้วทดสอบอีกครั้ง ปฏิกิริยา RAPD ได้ดำเนินการใน 96 หลุมโพลีคาร์บอเนต microplates (Techne, Duxford สหราชอาณาจักร) ในการระบายความร้อน Cycler Techne PHC3 ลดลงของน้ำมันแร่แสง (Sigma, พูล, สหราชอาณาจักร) ถูกวางไว้ในแต่ละดีใน Cycler ความร้อนเพื่อให้แน่ใจว่าการถ่ายเทความร้อนสูงสุดระหว่างเครื่องและ microplate ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการใน 25 เล่มไมโครลิตรมี 1 ×บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (20 มิลลิเมตร (NH4) 2SO4 75 มม Tris-HCl ค่า pH 9.0 0.01% w / v Tween) 2.5 มม MgCl2 0.1 มม dNTPs 5 pmol ไพรเมอร์ (Operon Technologies, Alameda (CA), สหรัฐอเมริกา) 2.5 U 'Red Hot' ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (Advanced วิทยาการ จำกัด Epsom สหราชอาณาจักร) และ 25 NG แม่แบบดีเอ็นเอ สารตั้งต้นถูกปกคลุมไปด้วย 30 ไมโครลิตรน้ำมันแร่แสง (Sigma, พูล, สหราชอาณาจักร) ก่อนที่จะขี่จักรยานดังนี้ denaturation ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีตามด้วย 35 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที (อัตราลาด 35-72 ° C ที่ 1 ° C ทุก 4 s) มีนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที วงดนตรีที่ขยายได้รับการแก้ไขโดย electrophoresing 20 ไมโครลิตรของแต่ละปฏิกิริยาบน 1.5% (w / v) เจล agarose 0.5 × TBE (45 มม Tris-borate 1 มิ EDTA) ย้อมด้วย ethidium bromide (1 ไมโครกรัม ML-1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ RAPDรวม 100 ไพรเมอร์แบบสุ่ม ( โอเปอรอนชุด A , C , D , F , x ) ทดสอบ 20 ซึ่งผลิตที่ชัดเจนและชัดเจนและเมื่อวิเคราะห์ด้วยเจล เหล่านี้ 20 ชนิด ( opa-02 , - 03 - 18 opc-02 , - 06 - 08 - 11 - 14 - 20 opd-07 , - 08 - 13 - 20 opf-04 , - 14 - 16 ; opx-02 , - 03 - 07 - 17 ) แล้วทดสอบ ปฏิกิริยาโดยมีการปฏิบัติใน 96 ดีโพลีคาร์บอเนต microplates ( techne Duxford , สหราชอาณาจักร ) ใน techne phc3 Thermal cycler . หยดของน้ำมันเบา ( Sigma , พูล , UK ) ที่ถูกวางไว้ในแต่ละในรอบความร้อนเพื่อให้การถ่ายเทความร้อนสูงสุดระหว่างเครื่องจักรและพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . ปฏิกิริยาออกมา 25 μ L ปริมาณที่มีบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 1 × ( 20 มม. ( NH4 ) 2so4 75 มม. ซึ่ง HCl pH 9.0 0.01 % W / V ทวี ) , MgCl2 2.5 มม. , 0.1 มม. dntps 5 pmol รองพื้น ( เทคโนโลยี โอเปอรอนอาลา ( CA ) , USA ) , 2.5 U " สีแดง ร้อน " DNA polymerase ( เทคโนโลยีชีวภาพขั้นสูง จำกัด , Epsom , สหราชอาณาจักร ) และ 25 ของแม่แบบดีเอ็นเอ สารตั้งต้นที่ถูกปกคลุมด้วย 30 μน้ำมันผมแสง ( Sigma , พูล , อังกฤษ ) ก่อนที่จักรยานดังนี้ ( ที่ 94 ° C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 35 รอบ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที , 35 ° C เป็นเวลา 1 นาที 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที ( กับทางลาดคะแนนจาก 35 ถึง 72 ° C 1 ° C ทุก 4 S ) กับนามสกุลสุดท้ายที่ 72 ° C 10 นาทีขยายวงถูกแก้ไขโดย electrophoresing 20 μ L ของแต่ละปฏิกิริยาบน 1.5 % ( w / v ) เจล 0.5 ×ทีบี ( 45 มม. นอกจากนี้ บอเรต 1 mM EDTA ) ย้อมด้วยทิเดียมโบรไมด์ ( 1 μกรัมต่อมิลลิลิตร− 1 )