2. Materials and methods
2.1. Raw material (substrate)
The method of juice extraction, its treatment
and chemical composition were described by
Nigam (1999).
2.2. Carrageenan
Carrageenan used for the cell immobilization
was obtained from the (Kobenkavns Rektinfabrik,
Denmark). It was a Genugel type X-0828
especially developed for immobilization
procedures.
2.3. Microorganism and culture conditions
The maintenance and culture conditions of
Saccharomyces cere6isiae ATCC 24553, were described
by Nigam (1999). The cells were harvested
in the late exponential growth phase and
concentrated.
2.4. Feed medium
Juice extracted from the cannery effluent contained
ca. 82.3 g l1 of the total sugars, was
supplemented with (g l1): NH4Cl, 2.5;
MgSO4 · 7H2O, 0.5; Tween 80, 0.5; oleic acid,
0.1; CaCl2, 0.05; and corn steep liquor (CSL), 5.
Antifoam, 0.1 g (FG-10, Dow Corning Corp,
USA) was added. The medium pH was adjusted
to 4.5.
2.5. Immobilization
Concentrated cells were added to a previously
sterilized 4% (w:v) solution of k-carrageenan at
35°C. The suspension was then extruded as
small drops by means of hypodermic syringe
into a stirred solution of KCl (20 g l1) and
CaCl2 (0.2 g1) at 4°C where spherical beads of
0.7–0.8 mm were formed. After 30 min the
beads were recovered, washed with (9 g 11)
NaCl, immersed in a 0.075 M Al(NO3)3 solution
for 5 min and washed once again before use.
2.6. Packed-bed tapered glass column reactor
Reactor consist of water-jacketed borosilicate
glass tapered column (top, 5 cm i.d.; bottom, 3
cm i.d.; and height, 30 cm) equipped with a
stainless steel wire mesh at the bottom of the
reactor and four sampling ports distributed
along it. The beads were aseptically transferred
to the sterilized reactor. The bead volume was
about 65% of the working reactor volume of
385 ml. The initial cell concentration, dry weight
was 48 g of bead volume, which was equivalent
to about 31.2 g of working reactor volume.
2.7. Operating conditions
Reactor temperature was maintained at 309
0.2°C. A variable speed peristaltic pump (Watson–
Marlow, model MHRE 22) was used to
feed the reactor. Nitrogen gas was flushed from
the bottom of the reactor at a flow rate of 1 l
h1 in order to facilitate CO2 removal, to improve
the ethanol productivity. The pH was constant
in the reactor. Dilution rates ranging from
0.2 to 2.5 h1 were evaluated and then run at a
dilution rate of 1 h1 for 87 days to determine
the operational stability. Following fermentation
the concentrations of ethanol, and sugars in the
exit stream was measured.
2.8. Analytical methods
The concentrations of cells, ethanol and sugar
in the exit stream were determined as described
by Nigam et al. (1985). The dry weight of entrapped
cells was determined by dissolving the
beads in sterile sodium citrate solution (10 g
11) with gentle shaking at 35°C for 15 min.
The resulting cell suspension was centrifuged,
washed and dried at 105°C, to a constant
weight.
2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัตถุดิบ (พื้นผิว)วิธีการสกัดน้ำผลไม้ การรักษาและได้อธิบายองค์ประกอบทางเคมีNigam (1999)2.2. carrageenanใช้สำหรับตรึงโปเซลล์ carrageenanกล่าวจาก (Kobenkavns Rektinfabrikเดนมาร์ก) มันเป็นชนิด Genugel X-0828โดยเฉพาะอย่างยิ่งพัฒนาสำหรับตรึงโปขั้นตอนการ2.3. จุลินทรีย์และวัฒนธรรมเงื่อนไขสภาพการบำรุงรักษาและวัฒนธรรมของมีอธิบาย saccharomyces cere6isiae ATCC 24553โดย Nigam (1999) มีการเก็บเกี่ยวเซลล์ในระยะปลายเรขาคณิต และเข้มข้น2.4. อาหารกลางน้ำที่สกัดจากน้ำแคนนารีโรว์อยู่ca. l 82.3 g 1 ของน้ำตาลรวม ถูกเสริม ด้วย (แยก 1): NH4Cl, 2.5MgSO4 · 7H2O, 0.5 Tween 80, 0.5 oleic กรด0.1 CaCl2, 0.05 และข้าวโพดสูงชันน้ำมันยาง (CSL), 5Antifoam, 0.1 g (FG-10 ดาวคอร์นทำ Corpสหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่ม มีการปรับปรุง pH ปานกลางการ 4.52.5 การตรึงโปมีเพิ่มเซลล์เข้มข้นที่ก่อนหน้านี้sterilized โซลูชัน 4% (w:v) ของ k-carrageenan ที่35 องศาเซลเซียส การระงับถูก extruded แล้วเป็นหยดน้ำเล็กโดยใช้เข็มฉีดยาเป็นทางออกหนึ่งคนของ KCl (20 g l 1) และCaCl2 (0.2 g 1) ที่ 4° C ซึ่งลูกปัดทรงกลมของ0.7 – 0.8 มม.มีรูปแบบ หลังจาก 30 นาทีลูกปัดได้รับการกู้คืน ล้าง ด้วย (9 กรัม 1 1)NaCl ดื่มด่ำไปกับอัล M 0.075 (NO3) 3 โซลูชัน5 นาทีและใช้หินอีกครั้งก่อน2.6. เตียง Packed เรียวเครื่องปฏิกรณ์คอลัมน์แก้วประกอบด้วยเครื่องปฏิกรณ์ water-jacketed borosilicateคอลัมน์กระจกเรียว (ประชาชน 5 ซม. ด้านบน ด้านล่าง 3ซม.ประชาชน และ 30 ซม. ความสูง) พร้อมกับการตาข่ายลวดเหล็กกล้าไร้สนิมที่ด้านล่างของใบเครื่องปฏิกรณ์และสี่พอร์ตที่สุ่มกระจายตามนั้น ลูกปัดมีการถ่ายโอน asepticallyการปล่อย sterilized มีเสียงลูกปัดประมาณ 65% ของปริมาณเครื่องปฏิกรณ์ทำงาน385 มล. ความเข้มข้นเริ่มต้นเซลล์ น้ำหนักแห้งมี g 48 ไดรฟ์ข้อมูลลูกปัด ที่เทียบเท่าจะประมาณเท่ากับ 31.2 กรัมปริมาตรเครื่องปฏิกรณ์ทำงาน2.7 การปฏิบัติเงื่อนไขมีรักษาอุณหภูมิของเครื่องปฏิกรณ์ที่ 3090.2 องศาเซลเซียส ปั๊ม peristaltic เร็ว (Watson –ลิตี้มาร์โลว์ รุ่น MHRE 22) ถูกใช้ในการเลี้ยงปล่อย ก๊าซไนโตรเจนถูกล้างจากด้านล่างของเครื่องปฏิกรณ์ที่อัตราการไหลของ 1 lh 1 เพื่อช่วยในการกำจัด CO2 เพื่อปรับปรุงผลิตเอทานอล PH คงในเครื่องปฏิกรณ์ ตั้งแต่อัตราเจือจาง0.2-2.5 h 1 ประเมิน และเรียกใช้ในการอัตราเจือจาง 1 h 1 87 วันในการกำหนดความมั่นคงในการดำเนินงาน หมักต่อไปนี้ความเข้มข้นของเอทานอล และน้ำตาลในการออกจากกระแสที่วัด2.8 การวิเคราะห์วิธีความเข้มข้นของน้ำตาล และเอทานอล เซลล์ในกระแสออกถูกกำหนดตามโดย Nigam et al. (1985) น้ำหนักแห้งของเก็บกักเซลล์ที่ถูกกำหนด โดยการยุบตัวลูกปัดในโซลูชันใส่โซเดียมซิเตรต (10 g1 1) ด้วยการสั่นเบา ๆ ที่ 35 ° C สำหรับ 15 นาทีการระงับเซลล์ผลลัพธ์ถูก centrifugedหิน และอบแห้งที่ 105° C ให้ค่าคงน้ำหนัก
การแปล กรุณารอสักครู่..

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัตถุดิบ (พื้นผิว)
วิธีการสกัดน้ำผลไม้,
การรักษาองค์ประกอบและสารเคมีที่ได้รับการอธิบายโดย
Nigam (1999).
2.2 คาราจีแนนคาราจีแนนที่ใช้ในการตรึงเซลล์ที่ได้รับจาก(Kobenkavns Rektinfabrik, เดนมาร์ก) มันเป็นประเภท Genugel X-0828 ได้รับการพัฒนาโดยเฉพาะสำหรับการตรึงขั้นตอน. 2.3 จุลินทรีย์และเงื่อนไขวัฒนธรรมบำรุงรักษาและเงื่อนไขวัฒนธรรมของSaccharomyces cere6isiae ATCC 24553 ได้รับการอธิบายโดยNigam (1999) เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวในช่วงปลายระยะการเจริญเติบโตและความเข้มข้น. 2.4 ฟีดกลางน้ำผลไม้สกัดจากน้ำทิ้งกระป๋องที่มีอยู่แคลิฟอร์เนีย ? 82.3 GL 1 ของน้ำตาลทั้งหมดได้รับการเสริมด้วย(GL 1): NH4Cl 2.5; MgSO4 · 7H2O, 0.5; Tween 80, 0.5; กรดโอเลอิก, 0.1; CaCl2, 0.05; และข้าวโพดสุราสูงชัน (CSL) 5. Antifoam, 0.1 กรัม (FG-10, Dow Corning คอร์ปประเทศสหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่มเข้ามา ค่าความเป็นกรดขนาดกลางที่ได้รับการปรับ4.5. 2.5 การตรึงเซลล์เข้มข้นที่ถูกเพิ่มเข้าก่อนหน้านี้ผ่านการฆ่าเชื้อ4% (w: V) การแก้ปัญหาของ k-คาราจีแนนที่35 องศาเซลเซียส ระงับถูกอัดแล้วเป็นหยดเล็ก ๆ โดยวิธีการของเข็มฉีดยาเป็นวิธีการแก้ปัญหากวนจากโพแทสเซียมคลอไรด์(20 GL 1) และCaCl2 (0.2 กรัม 1) ที่ 4 ° C ที่ลูกปัดทรงกลม0.7-0.8 มมกำลังก่อตัวขึ้น หลังจาก 30 นาทีลูกปัดหายล้างด้วย(9 กรัม 1? 1) โซเดียมคลอไรด์, แช่อยู่ในอัล 0.075 M (NO3) 3 การแก้ปัญหาเป็นเวลา5 นาทีและล้างอีกครั้งก่อนการใช้งาน. 2.6 บรรจุเตียงคอลัมน์แก้วเรียวเครื่องปฏิกรณ์เครื่องปฏิกรณ์ประกอบด้วย borosilicate น้ำเสื้อแก้วคอลัมน์เรียว(ด้านบนรหัส 5 ซมล่าง 3 รหัสซม. และความสูง 30 เซนติเมตร) พร้อมกับตาข่ายลวดสแตนเลสที่ด้านล่างของเครื่องปฏิกรณ์และสี่พอร์ตการสุ่มตัวอย่างกระจายตามมัน ลูกปัดถูกย้ายปลอดเชื้อให้กับเครื่องปฏิกรณ์ผ่านการฆ่าเชื้อ ปริมาณลูกปัดเป็นประมาณ 65% ของปริมาณการทำงานของเครื่องปฏิกรณ์ 385 มล. ความเข้มข้นของเซลล์เริ่มต้นน้ำหนักแห้ง48 กรัมปริมาณลูกปัดซึ่งเท่ากับประมาณ31.2 กรัมของปริมาณการทำงานของเครื่องปฏิกรณ์. 2.7 สภาพการใช้งานที่อุณหภูมิเครื่องปฏิกรณ์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 309 0.2 องศาเซลเซียส ความเร็วตัวแปรปั๊ม peristaltic (Watson- มาร์โลว์รุ่น MHRE 22) ถูกใช้ในการเลี้ยงเครื่องปฏิกรณ์ ก๊าซไนโตรเจนได้รับการล้างจากด้านล่างของเครื่องปฏิกรณ์ที่อัตราการไหล 1 ลิตรต่อชั่วโมง1 เพื่อความสะดวกในการกำจัด CO2 เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการผลิตเอทานอล ค่า pH คงที่ในเครื่องปฏิกรณ์ อัตราการเจือจางตั้งแต่0.2 ไป 2.5 ชั่วโมง 1 ได้รับการประเมินแล้วทำงานที่อัตราการเจือจาง1 ชั่วโมง 1 สำหรับ 87 วันเพื่อตรวจสอบความมั่นคงในการดำเนินงาน ต่อไปนี้การหมักความเข้มข้นของเอทานอลและน้ำตาลในกระแสออกจากวัด. 2.8 วิธีการวิเคราะห์ความเข้มข้นของเซลล์เอทานอลและน้ำตาลในกระแสออกได้รับการพิจารณาตามที่อธิบายไว้โดยNigam et al, (1985) น้ำหนักแห้งของกักเซลล์ถูกกำหนดโดยละลายลูกปัดในสารละลายโซเดียมซิเตรทหมัน(10 กรัม1? 1) กับอ่อนโยนสั่นที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที. ระงับเซลล์ส่งผลให้ได้รับการหมุนเหวี่ยง, ล้างและอบที่ 105 องศาเซลเซียส เพื่อคงน้ำหนัก
การแปล กรุณารอสักครู่..

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัตถุดิบ ( Substrate )
วิธีการสกัดน้ำผลไม้ , การรักษา
และองค์ประกอบทางเคมีได้ถูกอธิบายไว้โดย
of ( 2542 ) .
2.2 . คาราจีแนน
แนนใช้เซลล์ตรึงได้จาก ( kobenkavns rektinfabrik
, เดนมาร์ก ) มันเป็น genugel ประเภท x-0828
พัฒนาขึ้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับขั้นตอนการตรึง
.
2.3จุลินทรีย์และสภาวะวัฒนธรรม
และการบำรุงรักษาและสภาพวัฒนธรรมของ cere6isiae ATCC 24553 , อธิบาย
โดย of ( 1999 ) เซลล์เก็บ
ในช่วงการเจริญเติบโตที่ชี้แจงขั้นตอนและ
2.4 เข้มข้น . . น้ำผลไม้ขนาดกลาง
อาหารสกัดจากน้ำทิ้งโรงงานที่มีอยู่
. L 82.3 กรัม 1 ของ total sugars ,
เสริม ( G L 1 ) 4 . 2.5 ;
MgSO4 ใด้วย 7h2o 0.5 ;ทวีน 80 , 0.5 ; กรดโอลิอิก
1 ; CaCl2 , 0.05 และข้าวโพดสุราสูงชัน ( CSL ) , 5 .
antifoam 0.1 กรัม ( fg-10 , Dow Corning Corp
USA ) ถูกเพิ่มเข้ามา ระดับ pH 4.5 ปรับ
.
2.5 การตรึงเซลล์เข้มข้นถูก
ก่อนหน้านี้ฆ่าเชื้อ 4% ( w : V ) โซลูชั่นของน้ําตาล
35 องศา ที่ถูกระงับแล้วอัดเป็น
ขนาดเล็กลดลงโดยใช้เข็มฉีดยาเป็นคนแก้ไข . ( 20 กรัมต่อลิตร 1 )
CaCl2 ( 0.2 กรัม 1 ) ที่ 4 ° C ที่กลมลูกปัด
0.7 และ 0.8 มิลลิเมตรถูกสร้างขึ้น หลังจาก 30 นาที
ลูกปัดหาย , ล้างด้วย ( 1 1
9 กรัม ) เกลือ แช่ใน 0.075 m Al ( 3 )
3 โซลูชั่นเป็นเวลา 5 นาที และล้างอีกครั้งก่อนที่จะใช้
2.6 แน่นนอนเครื่องปฏิกรณ์ปฏิกรณ์เรียวคอลัมน์แก้ว borosilicate แก้ว
ประกอบด้วย Jacketed น้ำเรียวคอลัมน์ ( สูงสุด 5 ซม. บัตร ;ล่าง , 3
CM ไอดี และความสูง 30 เซนติเมตร ) พร้อมกับ
สเตนเลสลวดตาข่ายที่ด้านล่างของถังและสี่สุ่มพอร์ตกระจาย
ตามมัน สร้อยข้อมือ aseptically โอน
เพื่อฆ่าเชื้อเครื่องปฏิกรณ์ ลูกปัดปริมาณ
ประมาณ 65% ของการทำงานเครื่องปฏิกรณ์ปริมาณ
385 มล. ความเข้มข้นเซลล์เริ่มต้น
48 กรัม น้ำหนักแห้ง ปริมาณของลูกปัด ซึ่งเท่ากับ
ประมาณ 312 กรัมของปริมาณเครื่องปฏิกรณ์ทำงาน .
2.7 . เงื่อนไข
เครื่องปฏิกรณ์อุณหภูมิไว้ที่ 309
0.2 องศา ตัวแปรความเร็ว peristaltic ปั๊ม ( วัตสัน )
มาร์โลว์ , รูปแบบ mhre 22 ) ใช้
เลี้ยงเครื่องปฏิกรณ์ แก๊สไนโตรเจนถูกขับจาก
ด้านล่างของเตาปฏิกรณ์ที่อัตราการไหล 1 l
h 1 เพื่อความสะดวกในการกำจัดคาร์บอนไดออกไซด์ เพื่อปรับปรุง
เอทานอลที่ผลิต pH มีค่า
ในเครื่องปฏิกรณ์เจือจางในอัตราตั้งแต่ 0.2 ถึง 2.5 H
1 จำนวน แล้ววิ่งไปที่
อัตราเจือจาง 1 H 1 87 วันเพื่อตรวจสอบ
เสถียรภาพ ) ต่อไปนี้หมัก
ความเข้มข้นของเอทานอลและน้ำตาลในกระแสวัดออก
.
2.8 . วิธีการวิเคราะห์
ความเข้มข้นของเซลล์ , เอทานอลและน้ำตาลในกระแสวิเคราะห์ออก
ตามที่อธิบายไว้โดย of et al . ( 1985 )น้ำหนักถูกกำหนด โดยการละลายเซลล์ตรึง
เม็ดปลอดเชื้อ โซเดียมซิเตรต โซลูชั่น ( 10 g
1 1 ) อ่อนโยน สั่นที่ 35 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที ส่งผลให้เซลล์แขวนลอยอยู่ที่ระดับ
, ล้างและอบแห้งที่ 105 ° C , น้ำหนักคงที่
การแปล กรุณารอสักครู่..
