Monitoring of culture purityMicrosc

Monitoring of culture purity
Microscopy, culturing and molecular analysis were routinely applied. Samples taken from retentostats were plated on solid agar medium (1.5%, w/v) employing the same medium as used in retentostat cultivation, with acetate as a carbon source. Plates were incubated under oxic or anoxic conditions. The FastDNA SPIN Kit for Soil (MP Biomedicals, USA) was used for DNA extraction from 1 mL of the cell culture. The V3 region of the 16S rRNA gene sequence was amplified using bacterial 16S rRNA primers (forward primer F357 with a 40 bp GC clamp attached at the 5'end and reverse primer R518) . Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) was performed with a Bio-Rad DCode (Hercules, CA) detection system. The PCR products were loaded onto 1 mm thick polyacrylamide gels containing a 30–55% linear denaturant gradient. Electrophoresis was performed at a constant voltage of 200 V for 200 min in 1× TAE running buffer at 60C . After electrophoresis,the gels were stained with ethidium bromide buffer and photographed under UV light using a Kodak EDAS 290 camera

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรมไมโครสโค culturing และโมเลกุลเป็นประจำใช้วิเคราะห์ ตัวอย่างที่นำมาจาก retentostats ได้ถูกชุบบนอาหารแข็ง (1.5%, w/v) ใช้สื่อเดียวกันใช้ในการเพาะปลูก retentostat กับอะซิเตทเป็นแหล่งคาร์บอน แผ่นได้รับการกกภายใต้สภาวะ anoxic หรือ oxic ชุดสปิน FastDNA ดิน (MP Biomedicals สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้สำหรับการสกัดดีเอ็นเอจากมล. 1 วัฒนธรรมเซลล์ ภูมิภาค V3 ของ 16S rRNA ยีนลำดับถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์แบคทีเรีย 16S rRNA (ส่งต่อรองพื้น F357 มีแคลมป์ bp GC 40 อยู่ 5' จบ และย้อนกลับทับ R518) Denaturing อิเจไล่ระดับสี (DGGE) มีดำเนินการ ด้วยระบบตรวจจับไบโอ-Rad DCode (เฮอร์คิวลิส CA) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโหลดลงบนเจ polyacrylamide หนา 1 มม.ที่ประกอบด้วยการไล่โทน denaturant 30 – 55% เส้น อิถูกดำเนินการที่มีแรงดันไฟฟ้า 200 V 200 นาทีใน 1 × TAE ใช้บัฟเฟอร์ที่ 60C หลังจากอิ เจลถูกย้อม ด้วยบัฟเฟอร์โบรไมด์ ethidium และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีที่ใช้กล้อง Kodak EDAS 290

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรม
กล้องจุลทรรศน์, การเพาะเลี้ยงและการวิเคราะห์โมเลกุลถูกนำไปใช้เป็นประจำ ตัวอย่างที่เก็บได้จาก retentostats ถูกชุบแข็งวุ้นขนาดกลาง (1.5% w / v) การจ้างกลางเดียวกับที่ใช้ในการเพาะปลูก retentostat ด้วยอะซิเตตเป็นแหล่งคาร์บอน แผ่นถูกบ่มภายใต้เงื่อนไขหรือออกซิกซิก ชุด FastDNA SPIN ดิน (MP Biomedicals, สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ในการสกัดดีเอ็นเอจาก 1 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมเซลล์ ภูมิภาค V3 ของยีน 16S rRNA ถูกขยายโดยใช้แบคทีเรีย 16S rRNA ไพรเมอร์ (F357 ไพรเมอร์ไปข้างหน้าด้วย 40 bp ยึดติดอยู่ที่ GC 5'end และไพรเมอร์ R518 ย้อนกลับ) denaturing ลาด gel electrophoresis (DGGE) คือการดำเนินการกับ Bio-Rad DCode (Hercules, CA) ระบบตรวจจับ ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโหลดลง 1 มมเจลอะคริเลตที่มีความหนา 30-55% denaturant เชิงเส้นลาด electrophoresis ได้ดำเนินการที่แรงดันคงที่ 200 V 200 นาทีใน 1 × TAE ทำงานบัฟเฟอร์ที่ 60C หลังจาก electrophoresis เจลที่ถูกย้อมด้วยสีบัฟเฟอร์ ethidium bromide และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีที่ใช้ Kodak EDAS 290 กล้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบความบริสุทธิ์แห่งวัฒนธรรมการใช้และการวิเคราะห์โมเลกุล , ถูกตรวจทา ตัวอย่างจาก retentostats ถูกชุบแข็งบนอาหารวุ้น ( 1.5 % w / v ) การใช้สื่อเหมือนที่ใช้ในการเพาะปลูก retentostat ด้วยอะซิเตทเป็นแหล่งคาร์บอน . จานถูกบ่มภายใต้เงื่อนไขที่เรียนหรือนอก . ชุดปั่น fastdna ดิน ( MP biomedicals , USA ) ใช้ 1 มิลลิลิตรการสกัดดีเอ็นเอจากเซลล์เพาะเลี้ยง และ V3 ภูมิภาคของยีน 16S rRNA ลำดับเบส 16S rRNA ของแบคทีเรียก็ใช้ไพรเมอร์ ( forward primer f357 กับ 40 BP GC หนีบแนบที่ 5'end และ reverse primer r518 ) ี่ลาด gel electrophoresis ( การทดลอง ) กำหนดด้วยไบโอ ราด dcode ( Hercules , CA ) ระบบการตรวจสอบ ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกโหลดลง 1 มม. หนาโพลีอะคริลาไมด์เจลที่มี 30 – 55% โดยตรงทำให้ผิดธรรมชาติลาด . วิธีดำเนินการโดยแรงดันคงที่ 200 V 200 นาทีใน 1 ×แทวิ่งบัฟเฟอร์ที่ 60C . หลังจากอิเล็กเจลถูกย้อมด้วยสีทิเดียมโบรไมด์บัฟเฟอร์และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีที่ใช้กล้อง Kodak edas 290