A total of 40 SNPs were randomly se

A total of 40 SNPs were randomly selected from the three group 7 reference genomes forvalidation, representing 18, 9 and 13 SNPs from the A, B and D genomes respectively. These SNPs had a range of redundancy scores. Genomic DNA was isolated from the four wheat cultivars Drysdale, Gladius, Excalibur and RAC875, according to a protocol adapted from [49]. PCR amplification of the 40 loci was performed using primers designed to conserved sequence surrounding the SNPs (Table 2) and 500 mM KCl, pH 8.3) DNA polymerase (Bio-Rad), RNase and DNase free water (Gibco) and 60 ng DNA. Thermocycling conditions for the reaction were 94 °C for 2 min, followed by 35 cycles of: 94 °C for 30 s, annealing
for 1 min at 60 °C and extension for 1 min at 72 °C. Final extension was performed at 72 °C for 10 min. Gel electrophoresis on a 1% (w/v) agarose gel in 1 × TAE buffer [50] containing ethidium bromide resolved products, which were excised and purified using a silica method based on

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำนวน 40 SNPs ถูกสุ่มเลือกจากสามกลุ่ม 7 อ้างอิง genomes forvalidation แทน SNPs 18, 9 และ 13 จาก genomes A, B และ D ตามลำดับ SNPs เหล่านี้มีช่วงคะแนนซ้ำ Genomic DNA ถูกแยกต่างหากจากพันธุ์ข้าวสาลี 4 Drysdale, Gladius เอ็กซ์ และ RAC875 ตามโพรโทคอที่ดัดแปลงจาก [49] ขยาย PCR ของ 40 loci ถูกดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อนำลำดับรอบ SNPs (ตารางที่ 2) และ 500 mM KCl, pH 8.3) ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (ไบ-Rad), RNase และ DNase ฟรีน้ำ (Gibco) และ 60 ng ดีเอ็นเอ เงื่อนไข Thermocycling สำหรับปฏิกิริยา 94 ° C สำหรับ 2 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ของ: 94 ° C สำหรับ 30 s การอบเหนียวใน 1 นาทีที่ 60 ° C และส่วนขยายใน 1 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส ทำการขยายขั้นสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 10 นาทีเจ electrophoresis ในวุ้น agarose 1% (w/v) ใน 1 ×เต้บัฟเฟอร์ [50] ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium แก้ไขผลิตภัณฑ์ ซึ่งถูก excised และบริสุทธิ์โดยใช้วิธีซิลิก้าตาม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งหมด 40 SNPs ถูกสุ่มเลือกจากสามกลุ่มจีโนม 7 อ้างอิง forvalidation คิดเป็น 18, 9 และ 13 SNPs จาก A, B และ D ตามลำดับจีโนม SNPs เหล่านี้มีช่วงของคะแนนความซ้ำซ้อน ดีเอ็นเอที่แยกได้จากสี่สายพันธุ์ข้าวสาลีรส์ Gladius, คาลิเบอร์และ RAC875 ตามโปรโตคอลที่ดัดแปลงมาจาก [49] การขยายของ PCR 40 loci ได้รับการดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อการอนุรักษ์ลำดับโดยรอบ SNPs (ตารางที่ 2) และ 500 มิลลิ KCl ค่า pH 8.3) ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (Bio-Rad) RNase และ DNase น้ำฟรี (Gibco) และ 60 ng ดีเอ็นเอ เทอร์โมเงื่อนไขในการเกิดปฏิกิริยาเป็น 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีตามด้วย 35 รอบ: 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, การอบ
เป็นเวลา 1 นาทีที่ 60 องศาเซลเซียสและการขยายเวลา 1 นาทีที่ 72 ° C ขยายรอบชิงชนะเลิศเป็นที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ข่าวคราวเกี่ยวกับ 1% (w / v) เจล agarose ใน 1 × buffer TAE [50] ที่มีโบรไมด์ ethidium ผลิตภัณฑ์ได้รับการแก้ไขที่ถูกตัดและบริสุทธิ์ใช้วิธีซิลิกาขึ้นอยู่กับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

40 snps สุ่มเลือกจากสามกลุ่มอ้างอิงหา forvalidation แทน 18 , 9 และ 13 snps จาก A , B และ D จีโนมตามลำดับ snps เหล่านี้มีช่วงของคะแนนความซ้ำซ้อน ดีเอ็นเอที่แยกได้จากสี่ข้าวสาลีพันธุ์ดรายส์เดลกาดิอุส , Excalibur , และ rac875 ตามโปรโตคอลที่ดัดแปลงมาจาก [ 49 ]PCR แบบ 40 ของการใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อรักษาลำดับรอบ snps ( ตารางที่ 2 ) และ KCl 500 มม. , pH 8.3 ) ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ( ไบโอ ราด ) , เลสและน้ำตรวจหา ADNase ฟรี ( gibco ) และ 60 ของดีเอ็นเอ ผื่นแดงเงื่อนไขสำหรับปฏิกิริยาเท่ากับ 94 ° C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 35 รอบ : 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที annealing
1 นาทีที่ 60 ° C และส่วนขยายสำหรับ 1 นาทีที่ 72 ° Cสุดท้ายคือการส่งเสริมที่ 72 ° C 10 นาทีเจลบน 1% ( w / v ) เจล 1 ×แทบัฟเฟอร์ [ 50 ] ทิเดียมโบรไมด์ที่มีการแก้ไขผลิตภัณฑ์ที่ถูกตัดและทำให้บริสุทธิ์โดยใช้วิธีสอนที่ใช้ซิลิกา