TGase activity was assayed by the m

TGase activity was assayed by the method of Yongsawatdigul et al. (2002) with slight modifications. Surimi sample (5 g) was homogenised in 4 volumes of extraction buffer (10 mM NaCl and 10 mM Tris–HCl, pH 7.5). The homogenate was centrifuged at 16,000g (Sorvall, DuPont Co., Newton, CT, USA) at 4 C for 30 min. The supernatant was used as crude extract. The assay mixture consisted of 1.0 mg/ml N,N0-dimethylated casein (DMC), 15 lM monodansylcadaverine (MDC), 3 mM dithiothreitol (DTT), and 50 mM
Tris–HCl (pH 7.5). Fish bone emulsion or CaCl2 solution was added into the mixture and vortexed immediately. Two levels of CaCl2 (0.025 and 0.25 mM) were introduced to compare their effectiveness
with the calcium released from NFB. The mixture was incubated at 25 C for 5 min. One hundred microliters of crude enzyme were added and further incubated at 25 C for 10 min. After incubation, EDTA solution was added to a final concentration of 20 mM to stop the reaction. The fluorescence intensity was measured with excitation and emission wavelengths of 350 and 480 nm, respectively, using a Shimadzu spectrofluorometer (RF-1501; Shimadzu Co., Kyoto, Japan). One unit of TGase
activity was defined as the amount of enzyme that catalysed the incorporation of 1 nmol of MDC into DMC per min. TGase activity
was expressed as unit/ml extract.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม TGase ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี Yongsawatdigul และคณะ (2002) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ตัวอย่างซูริมิ (5 กรัม) ก็เข้ากันใน 4 เล่มของบัฟเฟอร์สกัด (10 มิลลิโซเดียมคลอไรด์และ 10 mM Tris-HCl, pH 7.5) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 16,000g (Sorvall ดูปองท์ Co. , นิวตัน, CT, USA) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสนาน 30 นาที สารละลายที่ใช้เป็นสารสกัดหยาบ ส่วนผสมทดสอบประกอบด้วย 1.0 mg / ml ไม่มี, N0-dimethylated เคซีน (DMC), 15 LM monodansylcadaverine (MDC), 3 มม dithiothreitol (DTT) และ 50 มิลลิเมตร
Tris-HCl (pH 7.5) อิมัลชั่กระดูกปลาหรือสารละลาย CaCl2 ถูกบันทึกลงในส่วนผสมและการ vortex ทันที สองระดับ CaCl2 (0.025 และ 0.25 มิลลิ) ได้รับการแนะนำให้รู้จักกับเปรียบเทียบประสิทธิภาพของพวกเขา
ที่มีแคลเซียมออกจาก NFB ส่วนผสมที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที หนึ่งร้อย microliters ของเอนไซม์ที่เพิ่มขึ้นและบ่มต่อที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที หลังจากการบ่ม, การแก้ปัญหา EDTA ถูกบันทึกอยู่ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 20 มิลลิเมตรเพื่อหยุดปฏิกิริยา ความเข้มแสงที่ได้รับการวัดที่มีการกระตุ้นและการปล่อยความยาวคลื่น 350 นาโนเมตรและ 480 ตามลำดับโดยใช้ spectrofluorometer Shimadzu (RF-1501; Shimadzu Co. , เกียวโต, ญี่ปุ่น) หน่วยหนึ่งใน TGase
กิจกรรมถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งปฏิกิริยาการรวมตัวกันของ 1 นาโนโมลของ MDC เป็น DMC ต่อนาที กิจกรรม TGase
ได้แสดงออกเป็นหน่วย / มลสารสกัดจาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมเอนไซม์ซีรั่มโดยวิธี yongsawatdigul et al . ( 2002 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ซูริตัวอย่าง ( 5 กรัม ) คือ homogenised ใน 4 เล่มของบัฟเฟอร์การสกัด ( NaCl 10 มม. และ 10 มม. นอกจากนี้ –กรดไฮโดรคลอริก pH 7.5 ) โดยแยกเป็นระดับที่ 16000g ( sorvall ดูปองท์ จำกัด , นิวตัน , CT , สหรัฐอเมริกา ) ที่ 4  C เป็นเวลา 30 นาที ที่นำมาใช้เป็นสารสกัด . วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 1.0 mg / ml ,NO dimethylated เคซีน ( DMC ) , 15 monodansylcadaverine LM ( MDC ) 3 มม. บัตรแข็ง ( DTT ) , และ 50 mm
ทริส– HCl ( pH 7.5 ) กระดูกปลาอิมัลชัน หรือสารละลาย CaCl2 เพิ่มลงในส่วนผสม และ vortexed ทันที สองระดับของการผลิต ( 0.025 และ 0.25 มม. ) มีการแนะนำเพื่อเปรียบเทียบประสิทธิผล กับแคลเซียมออกมาจาก nfb
. ผสมส่วนผสมที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที หนึ่งร้อยตัวเลขของเอนไซม์เพิ่มอีก  อุณหภูมิ 25 C 10 นาทีหลังจากบ่ม , EDTA ในสารละลายเพิ่มความเข้มข้นสุดท้ายของ 20 มิลลิเมตร เพื่อหยุดปฏิกิริยา เรืองแสงเข้มวัดด้วยการกระตุ้นและการปล่อยความยาวคลื่น 350 และ 480 nm ตามลำดับ โดยใช้ Shimadzu spectrofluorometer ( rf-1501 ; Shimadzu Co . , เกียวโต , ญี่ปุ่น )หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์
ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ในกระบวนการประสาน 1 ? ของ MDC ใน DMC ต่อนาทีเอนไซม์กิจกรรม
ถูกแสดงออกมาเป็นหน่วย / มิลลิลิตร สารสกัด