Quantification of Plasma Concentrat

Quantification of Plasma Concentrations of
Atorvastatin and Ortho-Hydroxy-Atorvastatin
by an LC-IDMS Method
An LC-IDMS method to simultaneously measure
atorvastatin and ortho-hydroxy-atorvastatin in human
plasma was established based on previous reports.11,12
The method, in which [d5]-atorvastatin and [d5]-orthohydroxy-atorvastatin
were used as the IS for atorvastatin
and for ortho-hydroxy-atorvastatin, respectively, was
validated according to our standard operating procedure
and the US FDA guidelines on bioanalytical method
validation.19
Frozen human plasma samples were thawed at ambient
temperature. In a 5.0-mL polypropylene centrifuge
tube, a 200-μL aliquot of plasma, 20 μL of IS working
solution ([d5]-atorvastatin, [d5]-ortho-hydroxy-atorvastatin,
250 ng/mL), and 20 μL of ammonium acetate solution
(1 mol/L) were blended by shaking for 10 seconds. A
1.5-mL volume of an extraction mixture consisting of
tert-butyl methyl ether, dichloromethane, and isopropanol
(6:2:2, v/v/v) was then added. The mixture was
vortexed for 5 minutes and then centrifuged at 16,000g
for 5 minutes at 4°C. The organic layer was transferred
to a clean, dry 2.0-mL polypropylene centrifuge tube
and the sample was evaporated to dryness under a
stream of nitrogen at 85°C. The dry residue was reconstituted
with 100 μL of 50% acetonitrile in water and
a 20-μL aliquot of the sample was injected onto the
analytic column for LC-IDMS analysis. During prestudy
validation, calibration curves for both analytes in human
plasma were obtained using 7 calibration standards
(0.2, 0.5, 1, 5, 10, 25, 50 ng/mL), each of which was
freshly prepared in-house in duplicate and extracted
together with blank plasma samples and quality control
(QC) samples in each analytic run. QC samples at 0.6,
20, and 40 ng/mL, which were prepared in-house on the
day the first study samples were received and stored
frozen (≤–20°C) together with the study sample, were
used to assess the intra- and interday precision, accuracy,
recovery, and stability.
An LC system (Shimadzu Scientific Corp., Kyoto,
Japan) equipped with 2 pumps (model LC20ADvp), an
online vacuum degasser (DGU-20A3), an autosampler
(SIL-HTC), and a controller module was used to perform
the chromatographic separation on a C18 MGIII analytic
column (Capcell Pak, Shiseido, Japan; 100 ×
2.0-mm inner diameter, 5 μm). The column was eluted
at a flow rate of 0.4 mL/min with an isocratic mobile
phase consisting of 0.1% formic acid in acetonitrile and
0.1% formic acid in water (53:47, v/v). The samples
were kept at 10°C in the autosampler with a total run
time of 3 minutes per injection. An MS/MS system
(Qtrap API 3200, Applied Biosystems/MDS Sciex,
Toronto, Canada) equipped with a turbo ion spray
source was operated in positive-ionization mode. Multiple
reaction monitoring analysis was applied to detect
ion transitions at m/z 559.2→440.2, 564.4→445.4,
575.2→440.2, and 580.4→454.4 for atorvastatin, [d5]-
atorvastatin, ortho-hydroxy-atorvastatin, and [d5]-
ortho-hydroxy-atorvastatin, respectively. The ion spray
voltage was set at 5.5 kV and the source temperature
at 550°C. Nitrogen was used as the collision gas. The
MS was operated with unit resolution for both Q1 and
Q3 detection. Analyst version 1.4.1 software (Applied
Biosystems, Foster City, California) was used for instrument
control and data acquisition. The peak area was
measured for calculation of the peak area ratio of the
analytes to their corresponding IS, and the plasma concentrations
were estimated.
Under these conditions, the calibration curves were
linear over the concentration range of 0.2 to 50 ng/mL
for both analytes (r > 0.999). No peaks interfering with
quantitation were observed throughout the validation
process. For both analytes, the lower limit of quantitation
was 0.2 ng/mL with S/N >5, the average accuracy
and intraday precision were 104.3% to 109.5% and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นับความเข้มข้นของพลาสมาของAtorvastatin และ Ortho-Hydroxy-Atorvastatinโดยมีวิธี LC IDMSวิธี LC IDMS วัดพร้อมกันatorvastatin และ ortho-hydroxy-atorvastatin ในมนุษย์พลาสม่าก่อตาม reports.11,12 ก่อนหน้านี้วิธีการ ในที่ [d5] -atorvastatin และ [d5] - orthohydroxy - atorvastatinใช้เป็น IS สำหรับ atorvastatinและ ortho-hydroxy-atorvastatin ตามลำดับ ถูกตรวจสอบตามขั้นตอนการปฏิบัติมาตรฐานของเราและแนวทาง FDA ของเรากับวิธี bioanalyticalvalidation.19ตัวอย่างพลาสมาแช่แข็งมนุษย์ถูก thawed ที่แวดล้อมอุณหภูมิ ในเครื่องหมุนเหวี่ยง polypropylene 5.0 mLหลอด ส่วนลงตัว 200-μL ของทีวีพลาสม่า μL 20 ของการทำงานโซลูชั่น ([d5] -atorvastatin, [d5] - ortho - hydroxy-atorvastatin250 ng/mL), และ μL 20 ของแอมโมเนีย acetate(1 โมล/L) ถูกผสม โดยสั่น 10 วินาที A1.5 mL ปริมาณของส่วนผสมสกัดประกอบด้วยด... tert methyl อีเทอร์ dichloromethane และ isopropanolจากนั้นมีเพิ่ม (6:2:2, v/v/v) มีส่วนผสมvortexed ใน 5 นาทีแล้ว centrifuged ที่ 16000 g5 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ชั้นอินทรีย์ถูกโอนย้ายให้ท่อสะอาด แห้ง 2.0 mL polypropylene เครื่องหมุนเหวี่ยงและตัวอย่างหายไปกับความแห้งกร้านภายใต้การกระแสของไนโตรเจนที่ 85 องศาเซลเซียส สารตกค้างแห้งถูก reconstitutedมี μL 100 ของ acetonitrile 50% ในน้ำ และส่วนลงตัว 20 μL ของตัวอย่างที่ฉีดไปคอลัมน์คู่วิเคราะห์ LC IDMS ระหว่าง prestudyvalidation, calibration curves for both analytes in humanplasma were obtained using 7 calibration standards(0.2, 0.5, 1, 5, 10, 25, 50 ng/mL), each of which wasfreshly prepared in-house in duplicate and extractedtogether with blank plasma samples and quality control(QC) samples in each analytic run. QC samples at 0.6,20, and 40 ng/mL, which were prepared in-house on theday the first study samples were received and storedfrozen (≤–20°C) together with the study sample, wereused to assess the intra- and interday precision, accuracy,recovery, and stability.An LC system (Shimadzu Scientific Corp., Kyoto,Japan) equipped with 2 pumps (model LC20ADvp), anonline vacuum degasser (DGU-20A3), an autosampler(SIL-HTC), and a controller module was used to performthe chromatographic separation on a C18 MGIII analyticcolumn (Capcell Pak, Shiseido, Japan; 100 ×2.0-mm inner diameter, 5 μm). The column was elutedat a flow rate of 0.4 mL/min with an isocratic mobilephase consisting of 0.1% formic acid in acetonitrile and0.1% formic acid in water (53:47, v/v). The sampleswere kept at 10°C in the autosampler with a total runtime of 3 minutes per injection. An MS/MS system(Qtrap API 3200, Applied Biosystems/MDS Sciex,Toronto, Canada) equipped with a turbo ion spraysource was operated in positive-ionization mode. Multiplereaction monitoring analysis was applied to detection transitions at m/z 559.2→440.2, 564.4→445.4,575.2→440.2, and 580.4→454.4 for atorvastatin, [d5]-atorvastatin, ortho-hydroxy-atorvastatin, and [d5]-ortho-hydroxy-atorvastatin, respectively. The ion sprayvoltage was set at 5.5 kV and the source temperatureat 550°C. Nitrogen was used as the collision gas. TheMS was operated with unit resolution for both Q1 andQ3 detection. Analyst version 1.4.1 software (AppliedBiosystems, Foster City, California) was used for instrumentcontrol and data acquisition. The peak area wasmeasured for calculation of the peak area ratio of theanalytes to their corresponding IS, and the plasma concentrationswere estimated.Under these conditions, the calibration curves werelinear over the concentration range of 0.2 to 50 ng/mLfor both analytes (r > 0.999). No peaks interfering withquantitation were observed throughout the validationprocess. For both analytes, the lower limit of quantitationwas 0.2 ng/mL with S/N >5, the average accuracyand intraday precision were 104.3% to 109.5% and<7.3%, respectively. The intra- and interday accuracyfor QC samples was 97.7% to 116.5% and 98.6% to 109.2%, respectively, and the corresponding intra- andinterday precision was <10.6% and <8.4%. The meanextraction recoveries were 68.1% to 80.5%, 76.15%,73.4% to 79.5%, and 78.9% for atorvastatin,[d5]-atorvastatin, ortho-hydroxy-atorvastatin, and[d5]-ortho-hydroxy-atorvastatin, respectively. Theseanalytes and their IS were stable in an autosampler at10°C for ≥14 hours, at room temperature for ≥7 hours,and after 3 freeze–thaw cycles, with relative SD <8.8%,<8.2%, and <9.9%, respectively. These results indicatethat the established LC-IDMS method was sensitive,accurate, and rapid, with a total run time of 3 minutes.Analysts blinded to the dosing randomization planperformed the study sample analysis with the validatedLC-IDMS method. All samples from each individualsubject were analyzed in a single run.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณความเข้มข้นของพลาสม่า
Atorvastatin และ Ortho-Hydroxy-Atorvastatin
โดย LC-IDMS
วิธีวิธีLC-IDMS ไปพร้อม ๆ กันวัด
atorvastatin และออร์โธไฮดรอกซี-atorvastatin
ในมนุษย์พลาสม่าที่ก่อตั้งขึ้นบนพื้นฐานของก่อนหน้าreports.11,12
วิธีการใน ซึ่ง [d5] -atorvastatin และ [d5] -orthohydroxy-atorvastatin
ถูกนำมาใช้เป็นสำหรับการ atorvastatin
และออร์โธไฮดรอกซี-atorvastatin
ตามลำดับได้รับการตรวจสอบตามขั้นตอนการดำเนินงานของเราได้มาตรฐานและแนวทางการองค์การอาหารและยาสหรัฐในวิธี Bioanalytical validation.19 แช่แข็งตัวอย่างพลาสมาของมนุษย์ถูกละลายที่แวดล้อมอุณหภูมิ ใน 5.0 มิลลิลิตรแปะโพรพิลีนหลอดเป็นaliquot 200 ไมโครลิตรของพลาสม่า 20 ไมโครลิตรของการทำงานคือการแก้ปัญหา([d5] -atorvastatin [d5] -ortho ไฮดรอกซี-atorvastatin, 250 นาโนกรัม / มิลลิลิตร) และ 20 ไมโครลิตรของ วิธีการแก้ปัญหาแอมโมเนียมอะซิเตท(1 โมล / ลิตร) ถูกผสมด้วยการเขย่าเป็นเวลา 10 วินาที 1.5 มิลลิลิตรปริมาณของส่วนผสมที่สกัดประกอบด้วยอีเทอร์เมธิลเทอร์บิวทิล, ไดคลอโรมีเทนและ isopropanol (6: 2: 2, v / v / v) ถูกเพิ่มเข้ามาแล้ว ส่วนผสมที่ถูกการ vortex เวลา 5 นาทีและปั่นแล้ว 16,000g 5 นาทีที่ 4 ° C ชั้นอินทรีย์ถูกย้ายไปยังสะอาดโพรพิลีน 2.0 มิลลิลิตรแห้งหลอด centrifuge และตัวอย่างได้รับการระเหยแห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจนที่ 85 ° C ที่เหลือแห้งสร้าง100 ไมโครลิตรของ acetonitrile 50% ในน้ำและaliquot 20 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างถูกฉีดลงบนคอลัมน์วิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์LC-IDMS ในช่วง prestudy การตรวจสอบเส้นโค้งการสอบเทียบวิเคราะห์ทั้งในมนุษย์พลาสม่าที่ได้รับใช้ 7 เทียบมาตรฐาน (0.2, 0.5, 1, 5, 10, 25, 50 นาโนกรัม / มิลลิลิตร) ซึ่งแต่ละถูกปรุงสดใหม่ในบ้านในที่ซ้ำกันและสกัดพร้อมกับตัวอย่างพลาสมาว่างเปล่าและการควบคุมคุณภาพ(QC) ตัวอย่างในแต่ละวิ่งวิเคราะห์ ตัวอย่าง QC ที่ 0.6, 20 และ 40 นาโนกรัม / มิลลิลิตรซึ่งถูกจัดทำขึ้นในบ้านในวันตัวอย่างการศึกษาครั้งแรกที่ได้รับและจัดเก็บแช่แข็ง(≤-20 ° C) ร่วมกับกลุ่มตัวอย่างที่ถูกใช้ในการประเมินภายใน- และความแม่นยำ interday ความถูกต้องการกู้คืนและความมั่นคง. ระบบ LC (Shimadzu วิทยาศาสตร์คอร์ป, เกียวโตญี่ปุ่น) พร้อมกับ 2 ปั๊ม (รุ่น LC20ADvp) ซึ่งเป็นสูญญากาศออนไลน์degasser (DGU-20A3) ซึ่งเป็นเครื่องฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ(SIL-HTC ) และโมดูลควบคุมถูกใช้ในการดำเนินการแยกสารในการวิเคราะห์C18 MGIII คอลัมน์ (Capcell ปากชิเซโด้ประเทศญี่ปุ่น 100 × 2.0 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 5 ไมครอน) คอลัมน์ที่ถูกชะในอัตราการไหล 0.4 มิลลิลิตร / นาทีพร้อมกับโทรศัพท์มือถือ isocratic เฟสประกอบด้วย 0.1% กรดใน acetonitrile และ0.1% กรดในน้ำ (53:47, v / v) กลุ่มตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ 10 องศาเซลเซียสในการฉีดตัวอย่างอัตโนมัติที่มีการทำงานรวมเวลา3 นาทีต่อการฉีด ของ MS / MS ระบบ(API Qtrap 3200, Applied Biosystems / MDS Sciex, โตรอนโต, แคนาดา) พร้อมกับสเปรย์เทอร์โบไอออนแหล่งที่มาดำเนินการในโหมดบวกไอออนไนซ์ หลายปฏิกิริยาการตรวจสอบการวิเคราะห์ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบการเปลี่ยนไอออนที่ม. / z 559.2 → 440.2, 564.4 → 445.4, 575.2 → 440.2 และ 580.4 → 454.4 สำหรับ atorvastatin [d5] - atorvastatin, ออร์โธไฮดรอกซี-atorvastatin และ [d5] - ออร์โธไฮดรอกซี-atorvastatin ตามลำดับ สเปรย์ไอออนแรงดันไฟฟ้าที่ตั้งอยู่ที่ 5.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิของแหล่งที่มาที่550 องศาเซลเซียส ไนโตรเจนที่ใช้เป็นก๊าซการปะทะกัน MS ดำเนินการที่มีความละเอียดหน่วยทั้งไตรมาสที่ 1 และการตรวจสอบการไตรมาสที่3 นักวิเคราะห์รุ่น 1.4.1 ซอฟแวร์ (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ที่ใช้สำหรับเครื่องมือการควบคุมและการเก็บข้อมูล บริเวณยอดเขาที่ได้รับการวัดการคำนวณอัตราส่วนพื้นที่จุดสูงสุดของสารที่จะสอดคล้องกันของพวกเขาคือและความเข้มข้นของพลาสม่าได้ประมาณ. ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้เส้นโค้งการสอบเทียบเป็นเชิงเส้นในช่วงความเข้มข้นของ 0.2-50 นาโนกรัม / มิลลิลิตรสำหรับวิเคราะห์ทั้งสอง(R> 0.999) ยอดเขาที่ไม่รบกวนการทำงานของปริมาณถูกตั้งข้อสังเกตตลอดทั้งการตรวจสอบกระบวนการ สำหรับการวิเคราะห์ทั้งสองขีด จำกัด ล่างของปริมาณ0.2 ng / มิลลิลิตร S / N> 5, ความถูกต้องเฉลี่ยและความแม่นยำระหว่างวันเป็น104.3% จาก 109.5% และ<7.3% ตามลำดับ ความถูกต้องและ intra- interday สำหรับตัวอย่าง QC เป็น 97.7% มาอยู่ที่ 116.5% และ 98.6% มาอยู่ที่109.2% ตามลำดับและ intra- และสอดคล้องแม่นยำinterday เป็น <10.6% และ <8.4% หมายถึงการกลับคืนสกัดเป็น 68.1% เป็น 80.5%, 76.15%, 73.4% เป็น 79.5% และ 78.9% สำหรับ atorvastatin, [d5] -atorvastatin, ออร์โธไฮดรอกซี-atorvastatin และ[d5] -ortho ไฮดรอกซี-atorvastatin ตามลำดับ . เหล่านี้วิเคราะห์และเป็นของพวกเขาที่มีเสถียรภาพในการฉีดตัวอย่างอัตโนมัติที่10 ° C เป็นเวลา≥14ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง≥7ชั่วโมงและหลัง3 รอบแช่แข็งละลายกับญาติ SD <8.8% <8.2% และ <9.9% ตามลำดับ ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าการจัดตั้ง LC-IDMS วิธีการไว, ถูกต้องและรวดเร็วด้วยเวลาทำงานรวม 3 นาที. นักวิเคราะห์ตาบอดในการวางแผนการสุ่มยาดำเนินการวิเคราะห์ตัวอย่างการศึกษาที่มีการตรวจสอบวิธีLC-IDMS ตัวอย่างทั้งหมดจากแต่ละเรื่องที่ถูกนำมาวิเคราะห์ในการทำงานครั้งเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณความเข้มข้นของพลาสมาและไฮดรอกซีอะโทวาสแตติน

Atorvastatin ortho โดยวิธีหนึ่งวิธี lc-idms lc-idms

และไฮดรอกซี Atorvastatin พร้อมกันวัดโธ Atorvastatin ในพลาสมา
ก่อตั้งขึ้นตามรายงานก่อนหน้านี้ 11,12
วิธีที่ [ D5 ] - [ D5 ] - orthohydroxy Atorvastatin กับ Atorvastatin
ถูกใช้เป็น อะโทวาสแตติน
สำหรับและตรงไฮดรอกซีอะโทวาสแตตินตามลำดับคือ


ตรวจสอบตามขั้นตอนมาตรฐานของเราและ US FDA แนวทางวิธีการตรวจสอบ bioanalytical

19 ตัวอย่างพลาสมาถูกแช่แข็งละลายในอุณหภูมิปกติ

ใน 5.0-ml โพรพิลีนเหวี่ยง
หลอด 200 μ L ส่วนลงตัวของพลาสม่า , 20 μ l ทำงาน
โซลูชั่น ( [ D5 ] - สเตฟานี แม็กแมเฮิน , [ D5 ] - โธ ไฮดรอกซี Atorvastatin
,250 นาโนกรัม / มิลลิลิตร ) และ 20 μ l แอมโมเนียมอะซิเตท โซลูชั่น
( / L 1 mol ) ผสมโดยการเขย่า 10 วินาที a
1.5-ml ปริมาณสกัดส่วนผสมประกอบด้วย
tert บิวทิลเมทิลอีเทอร์ ไดคลอโรมีเทน และไอโซโพรพานอล
( 6:2:2 , V / V / V ) ได้เพิ่ม ส่วนผสมจะถูก
vortexed 5 นาทีแล้ว ระดับที่ 16000g
5 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศา ชั้นอินทรีย์โอน
ให้สะอาด , บริการ 20-ml Polypropylene centrifuge หลอด
และตัวอย่างก็ระเหยแห้งภายใต้
กระแสของไนโตรเจนที่อุณหภูมิ 85 องศา C แห้ง กากสามารถ
100 μลิตรไน 50% ในน้ำ
20 - μ L ส่วนลงตัวของตัวอย่างที่ถูกฉีดลงบน
คอลัมน์วิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์ lc-idms . ในช่วง prestudy
ตรวจสอบเส้นโค้งสอบเทียบทั้งสารในมนุษย์
พลาสม่าได้ใช้ 7 การสอบเทียบมาตรฐาน
( 0.2 , 0.5 , 1 , 5 , 10 , 25 , 50 นาโนกรัม / มิลลิลิตร ) ซึ่งแต่ละคือ
เตรียมสดในบ้านซ้ำและสกัด
พร้อมกับตัวอย่างพลาสมาที่ว่างเปล่าและ
การควบคุมคุณภาพ ( QC ) กลุ่มตัวอย่างในแต่ละแบบวิ่ง QC ตัวอย่างที่ 0.6
20 และ 40 ng / ml ซึ่งถูกเตรียมไว้ในบ้าน ในวัน
ตัวอย่างการศึกษาครั้งแรกที่ได้รับและเก็บไว้
แช่แข็ง ( ≤– 20 ° C ) พร้อมกับศึกษาอยู่
ที่ใช้ประเมินภายในและ interday ความเที่ยงตรง ความถูกต้อง

มีการฟื้นตัว และเสถียรภาพ ระบบ LC ( Shimadzu วิทยาศาสตร์คอร์ป , เกียวโต ,
ญี่ปุ่น ) พร้อมกับ 2 ปั๊ม ( รุ่น lc20advp ) ,
degasser สูญญากาศออนไลน์ ( dgu-20a3 ) , autosampler
( sil-htc ) , และตัวควบคุมโมดูลที่ใช้แสดงแยกโครมบน c18

mgiii เชิงวิเคราะห์คอลัมน์ ( capcell ปาก , Shiseido , ประเทศญี่ปุ่น ; 100 ×
2.0-mm ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 5 μ M ) คอลัมน์คือตัวอย่าง
ที่อัตราการ ไหลของ 0.4 มิลลิลิตรต่อนาที มีเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
Isocratic และ 0.1% กรดในไน
0.1% กรดในน้ำ ( 53:47 , V / V ) ตัวอย่างที่ 10 ° C
ไว้ใน autosampler ด้วยเวลาวิ่ง
รวม 3 นาทีต่อการฉีด ระบบ MS / MS
( qtrap , API ,APPLIED BIOSYSTEMS / MDS sciex
, โตรอนโต , แคนาดา ) พร้อมเทอร์โบไอออนสเปรย์
ที่มาดำเนินการในโหมดอิออนบวก การประยุกต์การวิเคราะห์ปฏิกิริยาหลาย

เพื่อตรวจจับไอออนเปลี่ยน M / Z 559.2 → keyboard - key - name 440.2 564.4 → keyboard - key - name 445.4
, , 575.2 → keyboard - key - name 440.2 และ 580.4 → keyboard - key - name 454.4 สำหรับ Atorvastatin , [ D5 ] -
Atorvastatin ortho ไฮดรอกซี , สเตฟานี แม็กแมเฮิน , และ [ D5 ] -
ortho ไฮดรอกซีอะโทวาสแตติน ตามลำดับไอออนสเปรย์
แรงดันไว้ที่ 5.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิที่ 550 องศา C .
แหล่งไนโตรเจนที่ถูกใช้เป็นระบบแก๊ส
นางสาว ดำเนินการโดยหน่วยความละเอียดทั้ง Q1 และ Q3
ตรวจจับ . นักวิเคราะห์รุ่นโปรแกรมซอฟต์แวร์ประยุกต์ (
Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ แคลิฟอร์เนีย ) ใช้สำหรับควบคุมอุปกรณ์
และแสวงหาข้อมูล พื้นที่สูงสุด
วัดคำนวณพื้นที่สูงสุดที่อัตราส่วนของ