The PCR reactions primed by the new

The PCR reactions primed by the newly designed primer were performed with an initial denaturation step of 5min at 95 °C; following by 35 cycles of; denaturation at 95 °C for 30 s, annealing at 57 °C for 30 s and extension at 72 °C for 1 min; and completed with a final extension at 72 °C for 5 min. The PCR products were electrophoresed on 1.5% agarose gel and stained with ethidium bromide. Then they were eluted from the gel and purified. The purified PCR products were subsequently cloned into pGEM-T Easy vector (Promega) using the ligation reaction containing 0.5 μl pGEM-T Easy vector, 5 μl insert gene (PCR product purified), 2.5 μl 1X ligation buffer and 1 μl T4 ligase incubated at 4 °C overnight.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยา PCR งเยีย โดยไพรเมอร์ที่ออกแบบใหม่ดำเนินการกับขั้นตอนการแปรสภาพที่เริ่มต้นของ 5 นาทีที่ 95 ° C ต่อไปนี้ โดยรอบ 35 ของ แปรสภาพที่ 95 ° C 30 s หลอมที่ 57 ° C สำหรับ 30 s และนามสกุลที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที และเสร็จสมบูรณ์ ด้วยส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาทีสุดท้าย ผลิตภัณฑ์ PCR electrophoresed บนเจล 1.5% agarose และย้อม ด้วยโบรไมด์ ethidium จากนั้น พวกเขาถูก eluted จากเจ และบริสุทธิ์ ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ถูกมาโคลนลงใน pGEM T ง่ายเวกเตอร์ (Promega) โดยใช้ปฏิกิริยา ligation ที่ประกอบด้วย 0.5 μl pGEM T ง่ายเวกเตอร์ 5 μl แทรกยีน (ผลิตภัณฑ์ PCR ที่บริสุทธิ์), 2.5 μl 1 X ligation บัฟเฟอร์ และ 1 μl T4 ligase รับการกกที่ 4 ° C ค้างคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยา PCR primed โดยไพรเมอร์ที่ออกแบบใหม่ได้รับการดำเนินการกับขั้นตอนแรกของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ 5 นาทีที่ 95 ° C; ต่อไปนี้ 35 รอบ; denaturation ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, การอบที่ 57 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีและการขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที; เสร็จสมบูรณ์และมีนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มี electrophoresed บน agarose gel ที่ 1.5% และย้อมด้วย ethidium bromide แล้วพวกเขาก็ถูกชะจากเจลและบริสุทธิ์ ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ถูกโคลนไปใน pGEM-T ใช้ง่ายเวกเตอร์ (Promega) โดยใช้ปฏิกิริยา ligation ที่มี 0.5 ไมโครลิตรเวกเตอร์ pGEM-T ง่าย 5 ไมโครลิตรแทรกยีน (ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์) 2.5 ไมโครลิตร 1X บัฟเฟอร์ ligation และ 1 ไมโครลิตร T4 ลิกาเซบ่ม ที่ 4 ° C ในชั่วข้ามคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจปฏิกิริยา primed โดยออกแบบใหม่ได้ด้วยขั้นตอนรองพื้น ( เริ่มต้นที่ 5 นาทีที่ 95 องศา C ; ตามด้วย 35 รอบ ; ( 95 องศา C เป็นเวลา 30 วินาที annealing ที่ 57 องศา C เป็นเวลา 30 วินาทีและส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที และจบด้วยการสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูก electrophoresed บนเจล , 1.5% และเปื้อนทิเดียมโบรไมด์ . แล้วมีตัวอย่างจากเจลและบริสุทธิ์ นำผลิตภัณฑ์ PCR PCR ร่วมกับเป็นเวกเตอร์ที่ง่าย pgem-t ( promega ) โดยใช้ปฏิกิริยาที่มีμ Ligation 0.5 L pgem-t ง่ายเวกเตอร์ 5 μผมแทรกยีนดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ ) , 2.5 μชั้น 1x Ligation Buffer T4 L 1 μไลเกส บ่มที่ 4 ° C ในชั่วข้ามคืน