2.1. Production of kefir-like bever

2.1. Production of kefir-like beverages
The vegetable juices (VJ) fermented in this study were obtained
from carrots (Daucus carota L.), fennels (Foeniculum vulgare Mill.),
melons (Cucumis melo L.), onions (Allium cepa L.), tomatoes (Solanum
lycopersicum L.) and strawberries (Fragaria x ananassa Duch.).
Table 1 reports the characteristics of the juices, obtained by means
of a centrifugal extractor (Moulinex JU650G, Milan, Italy). The
commercial water kefir microorganism preparation “kefir d'acqua
fai da te” (BioNova snc, Villanova sull’Arda, Italy), containing
approximately 109 CFU/g of Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc
and Saccharomyces, as declared by the producer, was used to carry
out the fermentation. VJs were subjected to pasteurisation at 75
C
for 5 min and cooled at room temperature before processing.
Kefir-like beverages (KLBs) were produced by back-slopping.
Aliquots of 50 mL of each VJ were inoculated with 0.125 g of the
freeze-dried microbial mixture and incubated at 25
C for 72 h to
develop the active inoculants (Ins). Higher volumes of VJ (1 L) were
then inoculated with the corresponding In (4% v/v) and the
fermentation processes were performed at 25
C for 48 h. Beverage
productions were carried out in triplicate.
2.2. Microbiological analyses
Preparation of decimal dilutions of VJs, Ins and KLBs was in
Ringer's solution (SigmaeAldrich, Milan, Italy). The cell suspensions
were used to estimate the following microbial groups: total
mesophilic count (TMC) on plate count agar (PCA), incubated
aerobically at 30
C for 72 h; Enterobacteriaceae on double-layered
violet red bile glucose agar (VRBGA), incubated aerobically at 37
C
for 24 h; pseudomonads on Pseudomonas agar base (PAB) supplemented
with 10 mg/mL cetrimide fucidin, incubated aerobically at
20
C for 48 h; rod LAB on de Man-Rogosa-Sharpe (MRS) agar,
acidified to pH 5.4 with lactic acid (5 mol/L) and incubated anaerobically
at 30
C for 48 h; coccus LAB on M17 agar, incubated
anaerobically at 30
C for 48 h; yeasts on dichloran rose Bengal
chloramphenicol (DRBC) agar, incubated aerobically at 25
C for
48 h. All media and supplements were purchased from Oxoid
(Milan, Italy). Count plates were carried out in duplicate for each
independent production.
2.3. Characterization of the commercial starter preparation
Characterization of the commercial starter culture for water
kefir production was at species level. Freeze-dried preparation (1 g)
was diluted and analysed for LAB and yeasts, as reported above.
Four colonies of yeasts and Gram-positive (determined by KOH
method) and catalase negative (determined by transferring fresh
colonies from a Petri dish to a glass slide and adding 5%, w/v, H2O2)
bacteria for each morphology observed were isolated from the agar
media inoculated with the highest dilutions of cell suspension.
Purification of the cultures to homogeneity was by successive subculturing
in the same agar media and then propagating in the
corresponding broth media.
DNA from broth cultures was extracted by Instagene Matrix kit
(Bio-Rad, Hercules, CA) and used as template for PCR reactions. LAB
were identified by 16S rRNA gene sequencing as described by
Weisburg, Barns, Pelletier, and Lane (1991). DNA fragments of about
1600 bp were purified by QIA-quick purification kit (Qiagen S.p.a.,
Milan, Italy) and sequenced by PRIMM (Milan, Italy). The sequences
were compared to those available in the GenBank/EMBL/DDBJ
database. All yeasts were grouped by restriction fragment length
polymorphism (RFLP) analysis of the region spanning the internal
transcribed spacers (ITS1 and ITS2) and the 5.8S rRNA gene, as reported
by Esteve-Zarzoso, Belloch, Uruburu, and Querol (1999), and
then identified at species level by sequencing the D1/D2 domains of

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1. การผลิตเครื่องดื่ม kefir เหมือนน้ำผัก (VJ) หมักในการศึกษานี้ได้รับมาจากแครอท (Daucus carota L.), fennels (Foeniculum vulgare Mill),แตง (Cucumis melo L.), หัวหอม (Allium cepa L.) มะเขือเทศ (Solanumlycopersicum L.) และสตรอเบอร์รี่ (Fragaria x ananassa Duch)ตารางที่ 1 ลักษณะของน้ำผลไม้ รับ โดยวิธีรายงานการที่หอยโข่งดูด (Moulinex JU650G มิลาน อิตาลี) การการเตรียมน้ำพาณิชย์ kefir จุลินทรีย์ "kefir d'acquaดาไฟติ " (BioNova snc, Villanova sull'Arda อิตาลี), ประกอบด้วยประมาณ 109 อาหรับ/กรัมของแลคโตบาซิลลัส Lactococcus, Leuconostocและ Saccharomyces ตามที่ประกาศ โดยการผลิต ใช้ในการดำเนินการจากการหมัก มดถูกต้องความร้อนที่ 75 C5 นาที และเย็นที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะประมวลผลเครื่องดื่ม kefir เหมือน (KLBs) ถูกผลิต โดย slopping หลังAliquots ของ VJ ละ 50 มล.ถูก inoculated กับ 0.125 กรัมผสมจุลินทรีย์ชนิดแห้ง และได้รับการกกที่ 25 C สำหรับ 72 ชั่วโมงการพัฒนางาน inoculants (อิน) มีปริมาณสูงขึ้นของ VJ (1 L)แล้ว inoculated ด้วยสอดคล้องกันใน (4% v/v) และดำเนินการกระบวนการหมักที่ 25 C สำหรับ 48 เครื่องดื่มการผลิตได้ดำเนินการลข้อ2.2. จุลินทรีย์วิเคราะห์เตรียม dilutions ทศนิยมของมด เติม และ KLBs เป็นในโซลูชั่นของเสียงกริ่ง (SigmaeAldrich มิลาน อิตาลี) สารแขวนลอยเซลล์ใช้ในการประเมินกลุ่มจุลินทรีย์ต่อไป: ทั้งหมดได้รับการกกจำนวน mesophilic (TMC) แผ่นจำนวนอาหาร (PCA),ที่ 30 C สำหรับ 72 h; aerobically Enterobacteriaceae บนสองชั้นได้รับการกกน้ำดีสีแดงม่วงน้ำตาลในอาหาร (VRBGA), aerobically ที่ 37 Cสำหรับ 24 ชม. pseudomonads บน Pseudomonas อาหารพื้นฐาน (PAB) เสริมกับ 10 mg/mL cetrimide fucidin ได้รับการกก aerobically ที่20 C สำหรับ 48 h ราวที่ห้องปฏิบัติการบนอาหารคนเด-Rogosa-Sharpe (นาง)กรดการวัดค่า pH 5.4 มีกรดแลคติก (5 โมล/ลิตร) และได้รับการกก anaerobically30 c เป็นเวลา 48 ชม. ได้รับการกก coccus ที่ห้องปฏิบัติการบนอาหาร M17ที่ 30 C สำหรับ 48 h; anaerobically yeasts บน dichloran โรสเบงกอลอาหาร chloramphenicol (DRBC) ได้รับการกกที่ 25 C สำหรับ aerobicallyชม. 48 สื่อและผลิตภัณฑ์เสริมอาหารทั้งหมดซื้อจาก Oxoid(มิลาน อิตาลี) จำนวนแผ่นที่ดำเนินการในรายการซ้ำสำหรับแต่ละการผลิตอิสระ2.3. จำแนกลักษณะของการเตรียมการเริ่มต้นธุรกิจคุณลักษณะของวัฒนธรรมเชิงพาณิชย์เริ่มต้นน้ำkefir ผลิตได้ที่ระดับชนิด เตรียมกรอบ (1 กรัม)ถูกเจือจาง และวิเคราะห์สำหรับห้องปฏิบัติการและ yeasts ตามรายงานข้างต้นYeasts สี่โค และแบคทีเรียแกรมบวก (กำหนด โดยเกาะวิธี) และ catalase ลบ (กำหนด โดยโอนสดอาณานิคมจากจานเพาะสไลด์แก้วและเพิ่ม 5%, w/v, H2O2)แบคทีเรียสำหรับแต่ละตรวจสอบสัณฐานวิทยาที่แยกได้จากอาหารสื่อ inoculated กับ dilutions สูงระงับเซลล์บริสุทธิ์ของวัฒนธรรมการรอยถูก โดย subculturing ต่อ ๆ มาในสื่อเดียวกันอาหารและเผยแพร่แล้วในการสื่อที่สอดคล้องกันที่น้ำซุปดีเอ็นเอจากน้ำซุปวัฒนธรรมถูกสกัด โดยชุดเมตริกซ์ Instagene(Bio Rad เฮอร์คิวลิส CA) และใช้เป็นแม่แบบสำหรับปฏิกิริยา PCR ห้องปฏิบัติการโดยยีน 16S rRNA ลำดับตามที่อธิบายไว้โดยWeisburg โรงนา Pelletier และเลน (1991) ชิ้นส่วนดีเอ็นเอของเกี่ยวกับ1600 bp ได้บริสุทธิ์ โดยชุดฟอก QIA ด่วน (Qiagen ทุกกระบวนมิลาน อิตาลี) และตามลำดับ โดยอุดมทรัพย์เพล (มิลาน อิตาลี) ลำดับที่ถูกเมื่อเทียบกับใน GenBank/EMBL/DDBJฐานข้อมูล Yeasts ทั้งหมดถูกจัดกลุ่มตามความยาวส่วนจำกัดการวิเคราะห์โพลิมอร์ฟิซึม (RFLP) ภาคขยายภายในทับศัพท์อวกาศ (ITS1 และ ITS2) และ 5.8S ยีน rRNA รายงานโดย Esteve-Zarzoso, Belloch, Uruburu และ Querol (1999), และระบุระดับสายพันธุ์ โดยโดเมน D1/D2 ของการจัดลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 การผลิตเครื่องดื่ม kefir เหมือน
น้ำผลไม้ผัก (VJ) หมักในการศึกษานี้ได้รับ
จากแครอท (Daucus Carota L. ), fennels (Foeniculum vulgare Mill.)
แตงโม (Cucumis Melo L. ), หัวหอม (Allium cepa L. ) มะเขือเทศ (Solanum
lycopersicum L. ) และสตรอเบอร์รี่ (Fragaria ananassa x ภรรยา.).
ตารางที่ 1 รายงานลักษณะของน้ำผลไม้ที่รับโดยวิธี
การระบายแรงเหวี่ยง (Moulinex JU650G, มิลาน, อิตาลี)
น้ำเชิงพาณิชย์ kefir เตรียมจุลินทรีย์ "kefir d'Acqua
fai ดาเต้" (BioNova SNC, Villanova sull'Arda, อิตาลี) ที่มี
ประมาณ 109 โคโลนี / กรัมของแลคโตบาซิลลัส, Lactococcus, Leuconostoc
และ Saccharomyces เป็นประกาศโดยผู้ผลิตที่ถูกนำมาใช้ ที่จะดำเนินการ
ออกมาหมัก VJs ถูกยัดเยียดให้พาสเจอร์ไรซ์ที่ 75 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 5 นาทีและระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะประมวลผล.
เครื่องดื่ม Kefir เหมือน (KLBs) ถูกผลิตโดยกลับ slopping.
aliquots 50 มิลลิลิตรของแต่ละ VJ ถูกเชื้อกับ 0.125 กรัมของ
freeze- แห้งผสมจุลินทรีย์และบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมงในการ
พัฒนาจุลินทรีย์ที่ใช้งาน (เพิ่มเติม) ปริมาณที่สูงขึ้นของวีเจ (1 ลิตร) ได้รับ
เชื้อแล้วกับที่สอดคล้องกันใน (4% v / v) และ
กระบวนการหมักได้ดำเนินการอยู่ที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เครื่องดื่ม
โปรดักชั่นได้ดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.2 จุลชีววิทยาการวิเคราะห์
การจัดทำเจือจางทศนิยมของ VJs ประท้วงและ KLBs อยู่ใน
วิธีการแก้ปัญหาริงเกอร์ (SigmaeAldrich, มิลาน, อิตาลี) แขวนลอยเซลล์
ถูกนำมาใช้ในการประมาณการกลุ่มจุลินทรีย์ต่อไปนี้: รวม
นับ mesophilic (TMC) นับจานเลี้ยงเชื้อ (PCA) บ่ม
? aerobically วันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง; Enterobacteriaceae บนสองชั้น
สีม่วงน้ำดีสีแดงน้ำตาลในอาหารเลี้ยงเชื้อ (VRBGA) บ่มออกซิเจนที่ 37 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 24 ชั่วโมง; pseudomonads บน Pseudomonas agar ฐาน (PAB) เสริม
ด้วย 10 mg / ml cetrimide fucidin บ่มออกซิเจนที่
20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง; LAB คันบน Man-Rogosa-ชาร์ป (MRS) วุ้น
กรดค่า pH 5.4 ที่มีกรดแลคติก (5 โมล / ลิตร) และบ่มแบบไม่ใช้อากาศ
วันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง; LAB ค็อกคัสใน M17 วุ้นบ่ม
แบบไม่ใช้อากาศวันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง; ยีสต์ใน Dichloran เพิ่มขึ้นเบงกอล
chloramphenicol (DRBC) วุ้นบ่มออกซิเจนที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็น
เวลา 48 ชั่วโมง สื่อและอาหารเสริมทั้งหมดที่ซื้อมาจาก Oxoid
(มิลาน, อิตาลี) แผ่นนับได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละ
ผลิตที่เป็นอิสระ.
2.3 ลักษณะของการค้าการเตรียมการเริ่มต้น
การศึกษาลักษณะของวัฒนธรรมเริ่มต้นในเชิงพาณิชย์สำหรับน้ำ
ผลิต kefir อยู่ในระดับสปีชีส์ แห้งเตรียม (1 กรัม)
ถูกเจือจางและวิเคราะห์สำหรับห้องปฏิบัติการและยีสต์ที่รายงานข้างต้น.
สี่อาณานิคมของยีสต์และแบคทีเรียแกรมบวก (กำหนดโดย KOH
วิธี) และ catalase ลบ (กำหนดโดยการโอนสด
อาณานิคมจากจานเลี้ยงเชื้อไปยัง กระจกสไลด์และการเพิ่ม 5% w / v, H2O2)
แบคทีเรียสำหรับแต่ละสัณฐานสังเกตที่แยกได้จากวุ้น
สื่อเชื้อด้วยเจือจางสูงสุดของเซลล์แขวนลอย.
บริสุทธิ์ของวัฒนธรรมที่จะเป็นเนื้อเดียวกันโดยถ่ายเชื้อต่อเนื่อง
ในสื่อวุ้นเดียวกันแล้ว แพร่กระจายใน
สื่อน้ำซุปที่สอดคล้องกัน.
ดีเอ็นเอจากวัฒนธรรมที่น้ำซุปที่ถูกสกัดโดย Instagene Matrix Kit
(Bio-Rad, Hercules, CA) และใช้เป็นแม่แบบสำหรับปฏิกิริยา PCR LAB
โดยระบุ 16S ​​rRNA ยีนลำดับตามที่อธิบาย
Weisburg อาทิ Pelletier และเลน (1991) ดีเอ็นเอประมาณ
1,600 bp ถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วยชุดฟอก QIA อย่างรวดเร็ว (Qiagen แอนด์สปา,
มิลาน, อิตาลี) และลำดับขั้นตอนโดย PRIMM (มิลาน, อิตาลี) ลำดับ
ที่ถูกเมื่อเทียบกับผู้ที่มีอยู่ใน GenBank / EMBL / DDBJ
ฐานข้อมูล ยีสต์ทั้งหมดถูกจัดกลุ่มตามข้อ จำกัด ความยาวชิ้นส่วน
polymorphism (RFLP) การวิเคราะห์ของภูมิภาคทอดภายใน
spacers ถ่ายทอด (ITS1 และ ITS2) และ 5.8S rRNA ยีนตามที่รายงาน
โดย Esteve-Zarzoso, Belloch, Uruburu และ Querol (1999) และ
ระบุแล้วในระดับสายพันธุ์โดยการจัดลำดับโดเมน D1 / D2 ของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . การผลิตจุลินทรีย์ เช่น เครื่องดื่มผักผลไม้ ( VJ ) หมักในการวิจัยนี้จากแครอท ( daucus carota L . ) fennels ( foeniculum vulgare Mill . )แตง ( แตงไทย L . ) หัวหอม ( หอมหัวใหญ่ L . ) , มะเขือเทศ ( โซลานัมlycopersicum L . ) และสตรอเบอร์รี่ ( fragaria x ananassa ดุ๊ช . )ตารางที่ 1 รายงานลักษณะของผลไม้ ได้รับ โดยหมายถึงของ Extractor แรงเหวี่ยง ( โมลิเน็กซ์ ju650g , มิลาน , อิตาลี ) ที่พาณิชย์เตรียม " น้ำ kefir บัวหิมะ d"acqua จุลินทรีย์ฝ้ายดาเต้ " ( bionova SNC วิลลา , sull"arda , อิตาลี ) ซึ่งประกอบด้วยประมาณ 109 CFU / g ของแลคโตบาซิลลัสแลคโตค คัสลิวโคน ตอค , ,และ Saccharomyces , เป็นประกาศโดยผู้ผลิต ใช้พกจากการหมัก vjs ถูกปา ตอไรเซชั่นที่อุณหภูมิ 75 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและเย็นที่อุณหภูมิห้องก่อนการประมวลผลชอบเครื่องดื่มคีเฟอร์ ( klbs ) ถูกผลิตโดยกลับ slopping .เฉยๆของ 50 มิลลิลิตร ใส่แต่ละวีเจเป็น 0.125 กรัมของแห้งผสมจุลินทรีย์และบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมง เพื่อการพัฒนาหัวเชื้อปราดเปรียว ( INS ) ปริมาณที่สูงขึ้นของวีเจ ( 1 ลิตร ) คือแล้วใส่ที่สอดคล้องกันใน 4 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) และกระบวนการหมักที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสได้เป็นเวลา 48 ชั่วโมง เครื่องดื่มการผลิต พบว่าทั้งสามใบ2.2 . การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาการเตรียมเอกสารและวิธีการ vjs ทศนิยม , klbs อยู่เสียงของโซลูชั่น ( sigmaealdrich , มิลาน , อิตาลี ) เซลล์แขวนลอยถูกนำมาใช้เพื่อประเมินตามจุลินทรีย์กลุ่ม : รวมมีการนับ ( TMC ) บนอาหารวุ้นนับจาน ( PCA ) บ่มaerobically ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมง ; ผิดเพี้ยนบนสองชั้นวุ้นตาลม่วงน้ำดี สีแดง ( vrbga ) aerobically บ่มที่ 37 องศาเซลเซียส24 H ; pseudomonads บนฐานของวุ้น ( PAB ) อาหารกับ 10 mg / ml ซิตริไมด์ฟิวซิดิน aerobically บ่มที่20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ; คันห้องแล็บ เดอ ชาย rogosa ชาร์ป ( นาง ) วุ้นปรับ pH 5.4 กับกรดแลคติก ( 5 mol / L ) และบ่มพที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ; ค็อกคัสแล็บบน m17 เชื้อวุ้นพที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ; ยีสต์ในไดคลอแรนโรสเบงกอลคลอแรมเฟนิคอล ( drbc ) วุ้น บ่ม aerobically ที่ 25 C สำหรับ48 ชั่วโมง สื่อทุกประเภท และ อาหารเสริม ซื้อมาจาก oxoid( มิลาน , อิตาลี ) นับจานทดลองซ้ำในแต่ละการผลิตที่เป็นอิสระ2.3 ลักษณะของการเริ่มต้นทางการค้าการเริ่มต้นทางการค้า วัฒนธรรม น้ำคีเฟอร์ผลิตเป็นชนิดระดับ ตรึงแห้งเตรียม ( 1 กรัม )เจือจางและวิเคราะห์สำหรับห้องปฏิบัติการและยีสต์ , รายงานข้างต้นสี่โคโลนีของยีสต์และเชื้อแกรมบวก ( กำหนดโดยเกาะวิธีการลบ ( ) และสามารถกำหนดโดยการถ่ายทอดสดอาณานิคมจากจานเพาะเชื้อเพื่อสไลด์แก้วและเพิ่ม 5 % W / V , H2O2 )แบคทีเรียสำหรับแต่ละรูปร่าง สังเกตแยกจากวุ้นสื่อที่ปลูกด้วยวิธีการสูงสุดของเซลล์แขวนลอย .ความบริสุทธิ์แห่งวัฒนธรรม วิธีการคือการต่อเนื่องในสื่อเดียวกันวุ้นแล้วเผยแพร่ในสื่อ broth ที่สอดคล้องกันดีเอ็นเอจากน้ำซุปที่สกัดจากเมทริกซ์ instagene ชุดวัฒนธรรม( ไบแรด , Hercules , CA ) และใช้เป็นแม่แบบสำหรับปฏิกิริยา PCR แล็บกลุ่มเบส 16S rRNA ยีน ลำดับตามที่อธิบายไว้โดยweisburg โรงนาเพลเลอเทียร์ และ เลน ( 1991 ) ดีเอ็นเอของเกี่ยวกับ1600 BP ได้ทำให้บริสุทธิ์ด้วยชุดฟอกมั่น ( ฮาเร็ง , รวดเร็วมิลาน , อิตาลี ) และลำดับเบสโดยพรีมม์ ( มิลาน , อิตาลี ) ลำดับเปรียบเทียบกับที่มีอยู่ในขนาด / สัตว / ddbjฐานข้อมูล ทั้งหมด ( 4 ) โดยข้อ จำกัด ขนาดความยาวของยีสต์polymorphism ( RFLP ) การวิเคราะห์พื้นที่ครอบคลุมภายในการทับศัพท์ ( its1 spacers และ its2 ) และ 5.8s rRNA ยีน พบว่าโดย esteve zarzoso belloch uruburu , , , และ querol ( 1999 )แล้วระบุในสายพันธุ์ระดับ D1 / D2 โดยโดเมนของลำดับ