Variation of magnesium concentratio

Variation of magnesium concentration


Figure 2: Impact of Mg(OAc)2 addition during cell-free expression of Luciferase. The regular feeding every 20 min with 100mM MgOAc2 shows an increase of expression to half of that of the commercial kit.
At first, we investigated the influence of magnesium acetate (Mg(OAc)2) on our reaction. Kim et al.1) describe an enhancement of cell-free expression by regular addition of small amounts of Mg. We performed expression experiments where reactions were fed with Mg(OAc)2 while others were not. The repeated addition of 100 nmol of magnesium every 20 minutes during the reaction was found to increase expression levels and was therefore implemented for future experiments. Feeding was performed by pipetting 0.5 μl of a 10 μM magnesium acetate solution into the reaction tube without letting it cool down. Positive effects towards expression were immediately visible in a subsequently conducted luciferase assay (see figure 2). However, the actual impact of feeding varied a lot in the experiments, even among reactions with the same components.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของแมกนีเซียมรูปที่ 2: ผลกระทบของมก. () 2 งป Luciferase นิพจน์ที่ใช้เซลล์ฟรี ปกติให้อาหารทุก 20 นาที มีระยะ MgOAc2 แสดงการเพิ่มนิพจน์ให้ครึ่งหนึ่งของชุดเชิงพาณิชย์ครั้งแรก เราตรวจสอบอิทธิพลของแมกนีเซียมซิเตท (Mg(OAc)2) ในปฏิกิริยาของเรา คิม et al.1) อธิบายเพิ่มประสิทธิภาพของเซลล์ฟรีนิพจน์ โดยปกตินอกจากนี้ของ Mg จำนวนเล็กน้อย เราดำเนินการทดลองนิพจน์ที่ปฏิกิริยาถูกเลี้ยง ด้วย Mg () 2 ขณะที่คนอื่นไม่ได้ การซ้ำเติม 100 นาโนโมลของแมกนีเซียมทุก 20 นาทีในระหว่างปฏิกิริยาพบว่าเพิ่มระดับนิพจน์ และถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองในอนาคตดังนั้น ให้อาหารทำ โดยปิเปต 0.5 μl ของโซลูชัน acetate แมกนีเซียม 10 μ m ลงในหลอดปฏิกิริยาโดยไม่ปล่อยให้มันเย็นลง ผลในเชิงบวกต่อนิพจน์ถูกมองเห็นได้ในการทดสอบ luciferase ดำเนินการต่อมาทันที (ดูรูปที่ 2) อย่างไรก็ตาม ผลกระทบจริงของกินหลากหลายมากในการทดลอง แม้แต่ในปฏิกิริยามีส่วนประกอบเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รูปแบบของความเข้มข้นของแมกนีเซียม


รูปที่ 2: ผลกระทบของการ mg (OAC) 2 นอกจากนี้ในระหว่างการแสดงออกโดยปราศจากเซลล์ luciferase การให้อาหารเป็นประจำทุก 20 นาที 100mm MgOAc2 แสดงให้เห็นถึงการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกถึงครึ่งหนึ่งของที่ชุดเชิงพาณิชย์.
ตอนแรกเราตรวจสอบอิทธิพลของอะซิเตทแมกนีเซียม (Mg (OAC) 2) กับปฏิกิริยาของเรา คิม et al.1) อธิบายการเพิ่มประสิทธิภาพในการแสดงออกปราศจากเซลล์โดยการเพิ่มปกติของขนาดเล็กจำนวน Mg เราได้ทำการทดลองการแสดงออกที่เกิดปฏิกิริยาได้รับการเลี้ยงดูด้วย mg (OAC) 2 ในขณะที่คนอื่นไม่ได้ นอกจากนี้ซ้ำแล้วซ้ำอีก 100 nmol ของแมกนีเซียมทุก 20 นาทีในช่วงปฏิกิริยาที่พบในการเพิ่มระดับการแสดงออกและการถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองจึงอนาคต การให้อาหารได้ดำเนินการโดยปิเปต 0.5 ไมโครลิตรของ 10 ไมครอนแก้ปัญหาแมกนีเซียมอะซิเตทลงในหลอดปฏิกิริยาไม่ต้องให้มันเย็นลง ผลในเชิงบวกต่อการแสดงออกมาให้เห็นทันทีในการทดสอบ luciferase ดำเนินการต่อมา (ดูรูปที่ 2) อย่างไรก็ตามผลกระทบที่เกิดขึ้นจริงของการให้อาหารที่แตกต่างกันมากในการทดลองแม้แต่ในหมู่ปฏิกิริยากับองค์ประกอบเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของแมกนีเซียมรูปที่ 2 : ผลกระทบของมก. ( OAc ) นอกจากนี้ในระหว่างการสังเคราะห์การแสดงออกของเอนไซม์ลูซิเฟอเรส . ปกติให้อาหารทุก 20 นาทีกับ 100mm mgoac2 แสดงเพิ่มการแสดงออกถึงครึ่งหนึ่งของที่ของอุปกรณ์เชิงพาณิชย์ตอนแรก เราจึงศึกษาอิทธิพลของแมกนีเซียมแอซีเทต ( มก. ( OAc ) 2 ) ในปฏิกิริยาของเรา Kim et al . 1 ) อธิบายการเพิ่มการแสดงออกของการสังเคราะห์โดยนอกเหนือจากปกติของจำนวนเงินขนาดเล็กของมก. เราการทดลองปฏิกิริยาการแสดงออกที่ได้รับมิลลิกรัม ( OAc ) 2 ในขณะที่คนอื่นไม่ได้ ซ้ำเพิ่ม 100 ? ของแมกนีเซียมทุกๆ 20 นาทีในระหว่างปฏิกิริยา พบว่าช่วยเพิ่มระดับการแสดงออกและดังนั้นจึงใช้ในการทดลองต่อไป ให้อาหารโดยใช้μ pipetting 0.5 ลิตร 10 μ M แมกนีเซียมแอซีเทตการแก้ปัญหาในปฏิกิริยาท่อโดยไม่ต้องปล่อยให้มันเย็นลง ผลในเชิงบวกที่มีต่อการแสดงออกคือมองเห็นได้ทันทีในการต่อมา ลูซิเฟอเรส ( ( ดูรูปที่ 2 ) อย่างไรก็ตาม ผลกระทบที่เกิดขึ้นจริงของอาหารที่แตกต่างกันมากในการทดลอง แม้อยู่ท่ามกลางปฏิกิริยาที่มีส่วนประกอบเดียวกัน