Isolation and analysis of lymphocyt

Isolation and analysis of lymphocytes. (i) Isolation of mononuclear cells from
the spleen and CNS. Spleens were harvested from mice either at 5 or 7 days
postinfection. Spleen cell suspensions were prepared by gently homogenizing
spleens in a nylon bag (mesh opening, 64 m) with a syringe plunger in RPMI
1640 medium supplemented with 1% fetal calf serum. Then, red blood cells were
lysed with 0.83% NH4Cl. Mononuclear cells were prepared from the CNS as
previously described by Phillips et al. (25) on day 7 after i.c. inoculation. Three
to five brains were pooled per sample. In brief, animals were sacrificed and
perfused with 10 ml of PBS, and a single-cell suspension from the brain was
obtained by passing cells through a nylon mesh bag (mesh opening, 64 m).
Percoll (Pharmacia) was added to a final concentration of 30%, and the lysate
was centrifuged at 1,300  g for 30 min at 4°C. The cell pellet was resuspended,
passed through a cell strainer (pore diameter, 70 m; Becton Dickinson), and
washed. The cells were then layered over 2 ml of Lympholyte-M (Cedarlane
Laboratories) and centrifuged at 1,300  g for 20 min at room temperature. Cells
were removed from the interface, washed once, and counted.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกและการวิเคราะห์ของเซลล์เม็ดเลือดขาว (i)
การแยกตัวของเซลล์โมโนนิวเคลียร์จากม้ามและระบบประสาทส่วนกลาง ม้ามเก็บเกี่ยวจากหนูทั้งที่ 5 หรือ 7 วัน
postinfection สารแขวนลอยเซลล์ม้ามถูกจัดทำขึ้นโดยค่อยๆ homogenizing
ม้ามในถุงไนลอน (ตาข่ายเปิด 64 เมตร) ที่มีลูกสูบเข็มฉีดยาใน RPMI
1640 กลางเสริมด้วยซีรั่ม 1% จากลูกวัว จากนั้นเซลล์เม็ดเลือดแดงถูก
lysed กับ 0.83% NH4Cl
เซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่เตรียมจากระบบประสาทส่วนกลางเป็นที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยฟิลลิปเอตอัล (25) ในวันที่ 7 หลังจากการฉีดวัคซีนไอซี
สามถึงห้าสมองถูกรวบรวมต่อตัวอย่าง ในช่วงสั้น ๆ สัตว์ที่ถูกเสียสละและ
perfused 10
มิลลิลิตรพีบีเอสและการระงับเซลล์เดียวจากสมองได้รับโดยผ่านเซลล์ผ่านถุงตาข่ายไนลอน(ตาข่ายเปิด 64 ม.)
Percoll (Pharmacia) ถูกเพิ่มให้กับ ความเข้มข้นสุดท้ายของ 30% และ lysate
ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1,300? กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ตะกอนเซลล์ที่ถูก resuspended,
ผ่านกรองเซลล์ (เส้นผ่าศูนย์กลางรูขุมขน, 70 เมตร; Becton ดิกคินสัน)
และล้าง เซลล์ที่ถูกแล้วชั้น 2 มิลลิลิตร Lympholyte-M (Cedarlane
ห้องปฏิบัติการ) และหมุนเหวี่ยงที่ 1,300? กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
เซลล์ที่ถูกถอดออกจากอินเตอร์เฟซที่ล้างครั้งเดียวและนับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เขาเป็นนกสวยงามเขาเป็นนกสวยงามเขาเป็นนกสวยงามเขาเป็นนกสวยงาม