The method used for the Taqman assa

The method used for the Taqman assay was as follows: A 20× assay mix
was made using forward primer 5′-GCA ATT CCG ATA GTA ATG GTC A-3′,
reverse primer 5′- CTT GTT TGG CCT TTC ACA AA-3′, and probe /56-FAM/AG TAA ACC CAC ACC CTT TGG TAG CCA /36-TAMSp/ containing 18-μM primers and a 4-μM probe. A 20-μL reaction volume was used using 10 μL of 2× Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems) and 1 μL of the 20× assay mix with the remaining volume consisting of input DNA and sterile water. The qPCR reaction profile consisted of one cycle of 10 min at 95 °C followed by 45 cycles of 15 s at 95 °C and 1 min at 60 °C. Reactions were performed in a Stratagene Mx3005P Thermocycler (Agilent Technology). Results were quantified with a standard curve generated from the testing of 10-fold dilutions of a plasmid created to contain the target. Testing of this standard curve indicated that 10 copies of ATCV-1 DNA could be reliably detected in the qPCR reaction. A sample, which contained ≥10 copies of ATCV-1 genomic DNA, was considered to contain ATCV-1 DNA. DNA extracted from related chloroviruses PBCV-1 and CVM-1 (13, 29) and human DNA did not produce products with this assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการที่ใช้สำหรับทดสอบ Taqman ได้ดังนี้: 20 การทดสอบผสมทำโดยใช้รองพื้นไปข้างหน้า 5′-GCA ATT CCG ATA GTA ATG GTC A-3′กลับพื้น 5′ - CTT GTT TGG CCT ทีทีซีจำกัด ACA AA-3′ และโพรบ /36-TAMSp /56-FAM/AG แหลมยายณีบัญชี CAC บัญชี CTT TGG แท็ก CCA / 18 μM ไพรเมอร์และโพรบ 4 μM ใช้ไดรฟ์ข้อมูลปฏิกิริยา 20 μL ใช้ μL 10 ของ 2 การผสมนิพจน์หลักยีน (Biosystems ใช้) และ μL 1 ของทดสอบ 20 ×ผสมกับปริมาณคงเหลือประกอบด้วยดีเอ็นเอสำหรับการป้อนค่าและใส่น้ำ โพปฏิกิริยา qPCR ประกอบด้วยวงจรหนึ่ง 10 นาทีที่ 95 ° C ตามรอบ 45 15 s 95 ° C และ 1 นาทีที่ 60 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาดำเนินใน Thermocycler เป็น Mx3005P Stratagene (Agilent เทคโนโลยี) ผลลัพธ์ได้ quantified โค้งมาตรฐานที่สร้างขึ้นจากการทดสอบของ dilutions 10-fold ของ plasmid ที่สร้างขึ้นเพื่อประกอบด้วยเป้าหมาย ทดสอบเส้นโค้งมาตรฐานนี้ระบุว่า สำเนา 10 ATCV-1 เอ็นได้พบในปฏิกิริยา qPCR ตัวอย่าง ซึ่งประกอบด้วยสำเนา ≥10 ATCV 1 genomic DNA ถูกถือว่ามีดีเอ็นเอ ATCV-1 ดีเอ็นเอแยกจาก chloroviruses ที่เกี่ยวข้อง PBCV 1 และ CVM-1 (13, 29) และดีเอ็นเอมนุษย์ได้ผลิตผลิตภัณฑ์ที่ มีการทดสอบนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการที่ใช้ในการทดสอบ TaqMan เป็นดังนี้: 20 ×ผสมทดสอบ
ที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้า 5'-GCA ATT CCG ATA GTA ATG GTC-3 '
กลับไพร 5'- CTT GTT TGG CCT TTC ACA AA-3 'และสอบสวน / 56-FAM / TAA จีแม็กแม็ก CAC CTT TGG TAG CCA / 36-TAMSp / มีไพรเมอร์ 18 ไมครอนและสอบสวน 4 ไมครอน ปริมาณการเกิดปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตรถูกนำมาใช้โดยใช้ 10 ไมโครลิตรของ 2 ×การแสดงออกของยีนโทผสม (Applied Biosystems) และ 1 ไมโครลิตรของผสมทดสอบ× 20 ที่มีปริมาณที่เหลือประกอบด้วยดีเอ็นเอเข้าและน้ำหมัน รายละเอียดปฏิกิริยา qPCR ประกอบด้วยหนึ่งรอบ 10 นาทีที่ 95 ° C ตามด้วย 45 รอบ 15 วินาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและ 1 นาทีที่ 60 ° C ปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน Stratagene Mx3005P thermocycler (Agilent เทคโนโลยี) ผลลัพธ์ที่ได้วัดที่มีกราฟมาตรฐานที่สร้างขึ้นจากการทดสอบเจือจาง 10 เท่าของพลาสมิดที่สร้างขึ้นเพื่อให้มีเป้าหมาย การทดสอบของเส้นโค้งมาตรฐานนี้แสดงให้เห็นว่า 10 สำเนาของดีเอ็นเอ ATCV-1 สามารถตรวจพบได้อย่างน่าเชื่อถือในการเกิดปฏิกิริยา qPCR ตัวอย่างที่มี≥10สำเนาของ ATCV-1 ดีเอ็นเอถูกถือว่ามีดีเอ็นเอ ATCV-1 ดีเอ็นเอที่สกัดจาก chloroviruses เกี่ยวข้อง PBCV-1 และ CVM-1 (13, 29) และดีเอ็นเอของมนุษย์ไม่ได้ผลิตผลิตภัณฑ์ที่มีการทดสอบนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการที่ใช้สำหรับการทดสอบ taqman ดังนี้ 20 × ( ผสม
ทําการใช้ forward primer 5 ’ - GCA ATT ccg ATA GTA ATG GTC A-3 นั้นย้อนกลับ , รองพื้น 5 ’ -
ทั่วโลก gtt tgg CCT ttc ACA aa-3 ดูแลและตรวจสอบ / 56-fam / AG ทาบัญชีเรียกบัญชีซีทีที tgg แท็ก CCA / 36 tamsp / ที่มี 18 - μ M ชนิด 4 - μ M ด้วย20 - μ L ปฏิกิริยาปริมาณใช้โดยใช้ 10 μ L 2 ×ยีนหลักผสม ( Applied Biosystems ) และ 1 μลิตร 20 × ) ผสมกับปริมาณที่เหลือประกอบด้วยดีเอ็นเอเข้าและน้ำหมัน การ qpcr ปฏิกิริยาโปรไฟล์จำนวน 1 รอบ 10 นาทีที่ 95 องศา C ตามด้วย 45 รอบ 15 s 95 องศา C และ 1 นาทีที่ 60 องศาปฏิกิริยาที่แสดงใน stratagene mx3005p เทอร์มอไซเคล ์ ( ด้านเทคโนโลยี ) ผลการวิจัยเชิงปริมาณ ด้วยมาตรฐานเส้นโค้งที่เกิดจากการทดสอบ 10 เท่า ในวิธีการสร้างที่มีเป้าหมาย การทดสอบของกราฟมาตรฐานนี้ระบุว่า 10 ชุด atcv-1 ดีเอ็นเออาจจะได้พบใน qpcr ปฏิกิริยา ตัวอย่างซึ่งประกอบด้วย≥ 10 ฉบับของ atcv-1 genomic DNA ที่ได้รับการพิจารณาให้มี atcv-1 ดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอที่สกัดจาก chloroviruses pbcv-1 และ cvm-1 ( 13 , 29 ) และดีเอ็นเอของมนุษย์ไม่ได้สร้างผลิตภัณฑ์ด้วยวิธีนี้
.