We have previously cloned the aceto

We have previously cloned the acetone-formation pathway gene, encoding acetoacetate decarboxylase (adc), and butyrate-formation pathway gene, encoding phosphotransbutyrylase (ptb), of Clostridium acetobutylicum ATCC 824 via Escherichia coli. Here we report their subcloning in Bacillus subtilis and transfer to strain ATCC 824 via electrotransformation, where the corresponding enzyme activities were expressed at elevated levels, using pFNK1, a new B. subtilis/C. acetobutylicum shuttle vector. Plasmid pFNK1 was used because shuttle vectors that function in E. coil were unable to electrotransform ATCC 824 unless they became deleted in the E. coli-plasmid regions. The difficulties with shuttle vectors that function in E. coli are probably due to the presence of a restriction endonuclease in ATCC 824. This endonuclease recognizes the sequence 5'-GCNGC-3', which is prevalent in E. coli plasmids but occurs infrequently in pFNK1 and C. acetobutylicum genes. Cloning of genes in C. acetobutylicum is critical for redirecting the cellular metabolism (metabolic engineering) as well as for genetic studies of this industrial organism.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราได้ก่อนหน้านี้ cloned ยีนทางเดินก่ออะซิโตน เข้ารหัส acetoacetate decarboxylase (adc), และ butyrate ก่อทางเดิน ยีน phosphotransbutyrylase (ptb), การเข้ารหัสของเชื้อ Clostridium acetobutylicum ATCC 824 ผ่าน Escherichia coli ที่นี่เรารายงาน subcloning subtilis คัดและโอนย้ายไปยังสายพันธุ์ ATCC 824 ผ่าน electrotransformation กิจกรรมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องที่ถูกแสดงในระดับสูง การใช้ pFNK1 เวกเตอร์รถ acetobutylicum subtilis/C. เกิดใหม่ Plasmid pFNK1 ถูกใช้เนื่องจากเวกเตอร์รถที่ทำงานในขด E. ไม่สามารถ electrotransform ATCC 824 เว้นแต่พวกเขากลายเป็นลบในภูมิภาค E. coli plasmid ความยากลำบากกับเวกเตอร์รถที่ทำงานในอี coli อาจจะเนื่องจากของ endonuclease จำกัดใน ATCC 824 Endonuclease นี้รู้จักการลำดับ 5'-GCNGC-3 ", ซึ่งเป็นที่แพร่หลายใน E. coli plasmids แต่เกิดขึ้นนาน ๆ ครั้งใน pFNK1 และ C. acetobutylicum ยีน ของยีนใน c acetobutylicum เป็นสิ่งสำคัญ สำหรับการเผาผลาญเซลลูลาร์ (เผาผลาญวิศวกรรม) เปลี่ยนทิศทาง และศึกษาพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิตอุตสาหกรรมนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้ก่อนหน้านี้โคลนยีนอะซิโตนเส้นทางการก่อเข้ารหัส acetoacetate decarboxylase (ADC) และ butyrate การก่อยีนเดินเข้ารหัส phosphotransbutyrylase (PTB) ของ Clostridium acetobutylicum ATCC 824 ผ่าน Escherichia coli ที่นี่เรารายงาน subcloning ของพวกเขาในเชื้อ Bacillus subtilis และโอนสายพันธุ์ ATCC 824 ผ่าน electrotransformation ที่กิจกรรมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องได้รับการแสดงในระดับที่สูงขึ้นโดยใช้ pFNK1 ใหม่ B. subtilis / C เวกเตอร์รถรับส่ง acetobutylicum พลาสมิด pFNK1 ถูกนำมาใช้เพราะรถรับส่งเวกเตอร์ฟังก์ชั่นในอีขดลวดที่ไม่สามารถ electrotransform ATCC 824 จนกว่าพวกเขาจะกลายเป็นลบในภูมิภาค E. coli-พลาสมิด ความยากลำบากกับเวกเตอร์รถรับส่งที่ทำงานใน E. coli อาจจะเนื่องมาจากการปรากฏตัวของ endonuclease ที่ จำกัด ใน ATCC 824 endonuclease นี้ตระหนักถึงลำดับ 5'-GCNGC-3 'ซึ่งเป็นที่แพร่หลายใน E. coli พลาสมิด แต่เกิดขึ้นไม่บ่อยนักใน pFNK1 และ C ยีน acetobutylicum การโคลนยีนใน acetobutylicum ซีเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการเปลี่ยนเส้นทางการเผาผลาญเซลลูลาร์ (วิศวกรรมการเผาผลาญ) เช่นเดียวกับการศึกษาทางพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิตในอุตสาหกรรมนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขณะนี้มีโคลนก่อนหน้านี้อะซิโตนสร้างทางเดินของยีนอะซิโตอะซิเตทดีคาร์บอกซิเลส ( ADC ) , การเข้ารหัสและการสร้างทางเดิน phosphotransbutyrylase บิวยีนเข้ารหัส ( PTB ) ของ Clostridium acetobutylicum ATCC 824 ผ่าน Escherichia coli ที่นี่เรารายงานของยีนใน Bacillus subtilis สายพันธุ์ ATCC 824 และถ่ายโอนไปยัง electrotransformation ผ่าน ,กิจกรรมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องมีการแสดงออกในระดับสูง , การใช้ pfnk1 ใหม่ , B . subtilis / c เวกเตอร์รับส่ง acetobutylicum . พลาสมิด pfnk1 เวกเตอร์ ฟังก์ชันที่ใช้รับส่ง เพราะใน ม้วนไม่ได้ electrotransform ATCC 824 จนกว่าพวกเขาจะกลายเป็นลบใน E . coli สายพันธุ์ภูมิภาค ปัญหากับรถเวกเตอร์ฟังก์ชันใน( อาจจะเนื่องจากมีการตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะใน ATCC 824 . นี้เอนโดนิวคลีเอสจำลำดับ 5 ' - gcngc-3 ' ซึ่งเป็นที่แพร่หลายใน E . coli ) แต่เกิดขึ้นไม่บ่อยใน pfnk1 . acetobutylicum ยีน การโคลนยีนในค .acetobutylicum สำคัญเส้นทางการเผาผลาญของเซลล์ ( วิศวกรรมการเผาผลาญอาหาร ) รวมทั้งการศึกษาทางพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิต อุตสาหกรรมนี้