For aerobic growth, the mineral-sal

For aerobic growth, the mineral-salts medium A of
Davis and Mingioli (7) was used without citrate. For
anaerobic growth, the same medium was supplemented
with 2.4 mg of L-cystine per liter (11). Additions
to the minimal medium are indicated in the
legends to tables and figures. Tryptone, nutrient broth,
casein hydrolysate, and yeast extract were Difco
products.
Growth was measured turbidimetrically at a wavelength
of 570 nm with a Coleman Junior spectrophotometer.
One optical density unit corresponded to
0.93 mg of protein per ml, as determined, after lysis
of the cells, by the method of Lowry et al. (19) with
egg white lysozyme as standard. For determination of
asparaginase II, 15-ml samples were pipetted into ice;
the cells were collected by centrifugation at
14,000 X g, washed twice, and finally suspended in
0.8 ml of 0.1 M NaCl buffered at pH 7.8 with 50 mM
tris(hydroxymethyl)aminomethane-chloride. Cells
were lysed by treatment with ethylenediaminetetraacetic
acid (EDTA) and lysozyme. The suspension
was made 1 mm in EDTA and kept at 0 C for 8 min.
After the addition of magnesium acetate to a concentration
of 1 mm, 1 mg of egg white lysozyme (Worthington
Biochemical Corp.) was added to give a final
volume of 1 ml. The samples were incubated for 15
min at 37 C. Samples (0.01 ml) of these lysates were
assayed for asparaginase II either directly or after
dilution with buffered saline, in a final volume of 0.06
ml, by following the conversion of '4C-asparagine to
aspartic acid with rapid chromatography on ion-exchange
paper (Ecteola, Whatman ET81) (6). The
specific enzymatic activity is given as micromoles of
aspartic acid produced per hour per optical density
unit of the culture. At the low concentration of asparagine
used in this assay (0.1 mM), asparaginase I does
not contribute significantly to the products formed

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับการเจริญเติบโตแอโรบิกเกลือแร่กลางของ
เดวิสและ mingioli (7) ถูกนำมาใช้โดยไม่ต้องซิเตรต เพื่อการเจริญเติบโต
ออกซิเจนขนาดเดียวกันได้รับการเสริมด้วย
2.4 มิลลิกรัมต่อลิตรซีสตีนต่อลิตร (11)
ภาพไปยังสื่อน้อยที่สุดจะแสดงในตำนาน
ตารางและตัวเลข tryptone, น้ำซุปสารอาหารเคซีนไฮโดรไล
, และสารสกัดจากยีสต์มี difco ผลิตภัณฑ์
.
การเจริญเติบโตเป็นวัดที่ความยาวคลื่น turbidimetrically
570 นาโนเมตรด้วยโคลแมนจูเนียร์ Spectrophotometer.
หน่วยความหนาแน่นของแสงหนึ่งสอดคล้องกับ
0.93 มิลลิกรัมของโปรตีนต่อมิลลิลิตรตามที่กำหนดหลังจากการสลายของเซลล์
โดยวิธีการของคอรีเอตอัล (19) ที่มี lysozyme
ไข่สีขาวเป็นมาตรฐาน สำหรับการกำหนด
asparaginase ii ตัวอย่าง 15 มล. ถูก pipetted เป็นน้ำแข็ง;
เซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 xg เป็น
ล้างสองครั้งและระงับในที่สุด
0.8 มล. 0.1 เมตร nacl บัฟเฟอร์ที่ ph 7.8 มม. กับ 50
tris (hydroxymethyl) aminomethane-คลอไรด์
เซลล์ถูก lysed โดยการรักษาด้วยกรด Ethylenediaminetetraacetic
(EDTA) และไลโซไซม์ ระงับ
ทำ 1 มิลลิเมตรใน EDTA และเก็บไว้ที่ 0 ค 8 นาที.
หลังจากการเพิ่มของแมกนีเซียมอะซิเตทกับความเข้มข้นของ
1 มม. 1 มิลลิกรัมไข่ lysozyme สีขาว (วอร์ชิงตัน
ชีวเคมีคอร์ป.) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้
เล่มสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตร ตัวอย่างที่ถูกบ่มเป็นเวลา 15 นาที
ที่ 37 ค ตัวอย่าง (0.01 มล. ) ของ lysates เหล่านี้ถูก
assayed เพื่อ asparaginase ii โดยตรงหรือหลังจาก
เจือจางด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ในเล่มสุดท้าย 0.06
มิลลิลิตรโดยต่อไปนี้การแปลงของ '4 ค-asparagine ไป
กรด aspartic ด้วยโคอย่างรวดเร็วในการแลกเปลี่ยนไอออน
กระดาษ (ecteola, Whatman et81) (6)
การทำงานของเอนไซม์ที่เฉพาะเจาะจงจะได้รับเป็นของ micromoles
กรด aspartic ผลิตต่อชั่วโมงต่อความหนาแน่นของออปติคอล
หน่วยของวัฒนธรรม ที่มีความเข้มข้นต่ำของ asparagine
ที่ใช้ในการทดลองนี้ (0.1 มิลลิเมตร) asparaginase ฉันไม่
ได้มีส่วนร่วมอย่างมีนัยสำคัญกับผลิตภัณฑ์ที่เกิดขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเจริญเติบโตของแอโรบิก A กลางเกลือแร่ของ
เดวิสและ Mingioli (7) ถูกใช้ โดยซิเต สำหรับ
เติบโตที่ไม่ใช้ออกซิเจน สื่อเดียวกันถูกเสริม
กับมก. 2.4 L cystine ต่อลิตร (11) เพิ่มเติม
ปานกลางน้อยที่สุดระบุไว้ในการ
ตำนานตารางและตัวเลข Tryptone ธาตุอาหารซุป,
ด้วยเคซีน และสารสกัดจากยีสต์ Difco
ผลิตภัณฑ์
เจริญเติบโตที่วัด turbidimetrically ที่ความ
ของ 570 nm ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่างโคล์จูเนียร์
หน่วยความหนาแน่นออปติคัล corresponded การ
0.93 มิลลิกรัมโปรตีนต่อ ml ตาม หลัง lysis
เซลล์ โดยวิธีการของ Lowry et al. (19) กับ
lysozyme ไข่สีขาวเป็นมาตรฐาน สำหรับการกำหนด
asparaginase II ตัวอย่าง 15 ml มี pipetted เป็นน้ำแข็ง;
เซลล์ถูกเก็บรวบรวม โดย centrifugation ที่
14, 000 X g ล้างสองครั้ง และสุดท้าย ระงับใน
0.8 ml ของ 0.1 M NaCl buffered ที่ pH 7.8 กับ 50 mM
ตรี (hydroxymethyl) aminomethane-คลอไรด์ เซลล์
lysed ได้ โดยรักษาด้วย ethylenediaminetetraacetic
lysozyme และกรด (EDTA) การระงับ
ทำ 1 mm EDTA และเก็บไว้ที่ 0 C 8 นาที
หลังจากการเพิ่มแมกนีเซียม acetate จะเข้มข้น
1 มม. 1 มิลลิกรัมของ lysozyme ไข่ขาว (ธธิง
Biochemical Corp.) เพิ่มให้ตัวสุดท้าย
ปริมาตร 1 ml ตัวอย่างถูก incubated 15
นาทีที่ 37 C. ตัวอย่าง (0.01 มล.) ของ lysates เหล่านี้ถูก
assayed สำหรับ asparaginase II อย่างใดอย่างหนึ่งโดยตรง หรือหลัง
เจือจางกับน้ำเกลือถูกบัฟเฟอร์ ในปริมาตรสุดท้ายของ 0.06
ml โดยการแปลง " 4 C-asparagine การ
aspartic กรดกับ chromatography อย่างรวดเร็วในการแลกเปลี่ยนไอออน
กระดาษ (Ecteola, Whatman ET81) (6) ใน
กิจกรรมเอนไซม์ในระบบถูกกำหนดเป็น micromoles ของ
aspartic กรดที่ผลิตต่อชั่วโมงต่อความหนาแน่นออปติคอล
หน่วยของวัฒนธรรม ที่ความเข้มข้นต่ำสุดของ asparagine
ใช้ในการทดสอบนี้ (0.1 mM), ฉันไม่ asparaginase
ไม่สนับสนุนผลิตภัณฑ์ที่เกิดขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับการขยายตัวแอโรบิกที่มีน้ำแร่ - เกลือมีขนาดกลางของ
เดวิสและ mingioli ( 7 )ได้ถูกนำไปใช้โดยไม่ citrate สำหรับการขยายตัว
เต็นแอโรบิคขนาดกลางเดียวกันนี้มีเพิ่มเติม
พร้อมด้วย 2.4 มก.ของ L - cystine ต่อลิตร( 11 ) การเพิ่ม
ซึ่งจะช่วยในการมีขนาดกลางน้อยที่สุดที่จะแสดงในตำนาน
ซึ่งจะช่วยให้ตัวเลขและโต๊ะ น้ำซุป tryptone สารอาหาร
รับประทานเนยช่วยย่อยน้ำตาลแลคโตสและยีสต์สกัดเป็น difco
ผลิตภัณฑ์ .
การขยายตัวเป็นวัด turbidimetrically ที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร
ของเพียงแห่งเดียวคือ Gary Coleman Junior Suite พร้อมด้วยที่ใช้ใน.
หนึ่งออปติคอลไดรฟ์แบบความหนาแน่นชุดสอดคล้องกับ
0.93 มก.ของโปรตีนต่อมล.,ตามที่กำหนด,หลังจาก lysis
ของเซลล์โดยที่วิธีการของ Lowry ' s et al . ( 19 )ด้วย lysozyme
ไข่สีขาวเป็นมาตรฐาน สำหรับความมุ่งมั่นของ II
asparaginase 15 - มล.ตัวอย่างเป็น pipetted ในน้ำแข็ง
เซลล์ที่ได้จากการเก็บข้อมูลโดยผลิตที่
14,000 X กรัม,ล้างสองครั้งและถูกพักใน
0.8 มล. 0.1 ม. NaCl บัฟเฟอร์ที่ pH 7.8 พร้อมด้วย 50 มม.
บริษัททริสเรทติ้งจำกัด( hydroxymethyl ) aminomethane - คลอไรด์. เซลล์
มี lysed โดยการบำบัดด้วย ethylenediaminetetraacetic
กรด( edta ) lysozyme และ ระบบกันสะเทือนที่
ซึ่งจะช่วยทำให้เป็น 1 มม.ที่อยู่ใน edta และได้รับการดูแลรักษาให้อยู่ที่ 0 C 8 นาที
หลังจากการเช่นอะคีเทตเครื่องโลหะแมกนีเซียม
ซึ่งจะช่วยในการรวมกลุ่มของ 1 มม. 1 มก.ของไข่สีขาว lysozyme (ทางชีวเคมี Corp . Worthington
)ได้ถูกเพิ่มลงในการช่วยให้ระดับเสียงสุดท้าย
1 มล. ตัวอย่างที่เป็น incubated สำหรับนาที 15
ที่ 37 C .ตัวอย่าง( 0.01 มล.)ของ lysates เหล่านี้เป็น
เพียรพยายามสำหรับ asparaginase II ไม่ว่าโดยตรงหรือหลังจาก
ซึ่งจะช่วยเจือจางกับบัฟเฟอร์น้ำเกลือในระดับเสียงครั้งสุดท้ายของมล. 0.06
โดยต่อไปนี้การแปลง' 4 c - เมื่อได้รับความร้อนเพื่อกรด
aspartic ด้วย chromatography อย่างรวดเร็วบนไอออน - แลกเปลี่ยน
กระดาษ( ecteola whatman et 81 )( 6 ) กิจกรรม enzymatic
เฉพาะที่มีให้ micromoles ของ
กรด aspartic ผลิตต่อชั่วโมงต่อชุดความหนาแน่น
ออปติคอลไดรฟ์ของวัฒนธรรม ที่ต่ำเมื่อได้รับความร้อน
ซึ่งจะช่วยให้การใช้ในพยายาม( 0.1 มม.)ในส่วนนี้ผม asparaginase
ตามมาตรฐานหรือไม่ไม่มีส่วนช่วยอย่างมากในสินค้าที่ปั้น