Materials and methodsPlant growth a

Materials and methods
Plant growth and tracer loading
Plants were grown under long day conditions (16 h light/
8 h dark) at 21°C. Phloem loading with the watersoluble
8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonate (Molecular
Probes, Eugene, Oregon, USA; 2.5 mM solution in
H2O) was performed through cut petioles as described by
Gisel et al. (1999). 5(6)-Carboxyfluorescein was esterloaded
into the phloem by the application of 5(6)-
carboxyfluorescein diacetate (Molecular Probes, cat. no.
C195) to a leaf as described by Wright and Oparka (1996).
CF diacetate was applied at a final concentration of 60 pg/ml
in distilled water and stored as a 6-mg/ml stock solution in
acetone.
Fluorescence staining of pollen tubes
Pollen tube staining was performed as described by Huck et
al. (2003). The opened siliques were fixed overnight in
Lavdowsky’s FAA (1.5% formaldehyde, 2% acetic acid,
and 30% ethanol) at 4°C and washed in an alcohol series
(70%, 50%, 30%, 10%) for 10 min each. Tissue was
softened with 10% chloral hydrate at 60°C for 10 min and
rinsed twice with sodium phosphate buffer (100 mM, pH 7)
and then in 5 M NaOH at 60°C for 5 min. Pollen tubes
were stained with 0.1% methyl blue. Stained samples were
observed using an epifluorescence microscope (Axioskop,
Zeiss, Göttingen, Germany) with a ColorView III CCD
camera and analySIS Doku 3.2 imaging software (Olympus
Soft Imaging System, Münster, Germany). Anilin fluorescence
was excited at 345–385 nm and emission was
detected using a long-pass filter above 420 nm.
mPS-PI staining
As described by Truernit et al. (2008), siliques were
harvested and slit open on one side before being fixed in a
fixative (50% methanol and 10% acetic acid) at 4°C for at
least 12 h. They were then subjected to an overnight
treatment of 1% SDS and 0.2 N NaOH at room
temperature. Siliques were rinsed in water, incubated in
25% bleach solution (2.5% active Cl−) for 1 to 5 min,
rinsed again, and then transferred to 1% periodic acid at
room temperature for 40 min. The tissue was rinsed again
with water and incubated in Schiff reagent with propidium
iodide (100 mM sodium metabisulphite and 0.15 N HCl;
propidium iodide to a final concentration of 100 μg/mL was
freshly added) for 1 to 2 h or until plants were visibly
stained. The samples were then transferred onto microscope
slides and covered with a chloral hydrate solution
(4 g chloral hydrate, 1 mL glycerol, and 2 mL water).
The slides were kept overnight at room temperature in a
closed environment to prevent drying out. Next, excess
chloral hydrate was removed, several drops of Hoyer’s
solution (30 g gum arabic, 200 g chloral hydrate, 20 g
glycerol, and 50 mL water) were placed over the tissue,
and a cover slip was placed on top. The slides were left
undisturbed for a minimum of 3 days to allow the
mounting solution to set.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Materials and methodsPlant growth and tracer loadingPlants were grown under long day conditions (16 h light/8 h dark) at 21°C. Phloem loading with the watersoluble8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonate (MolecularProbes, Eugene, Oregon, USA; 2.5 mM solution inH2O) was performed through cut petioles as described byGisel et al. (1999). 5(6)-Carboxyfluorescein was esterloadedinto the phloem by the application of 5(6)-carboxyfluorescein diacetate (Molecular Probes, cat. no.C195) to a leaf as described by Wright and Oparka (1996).CF diacetate was applied at a final concentration of 60 pg/mlin distilled water and stored as a 6-mg/ml stock solution inacetone.Fluorescence staining of pollen tubesPollen tube staining was performed as described by Huck etal. (2003). The opened siliques were fixed overnight inLavdowsky’s FAA (1.5% formaldehyde, 2% acetic acid,and 30% ethanol) at 4°C and washed in an alcohol series(70%, 50%, 30%, 10%) for 10 min each. Tissue wassoftened with 10% chloral hydrate at 60°C for 10 min andrinsed twice with sodium phosphate buffer (100 mM, pH 7)and then in 5 M NaOH at 60°C for 5 min. Pollen tubeswere stained with 0.1% methyl blue. Stained samples wereobserved using an epifluorescence microscope (Axioskop,Zeiss, Göttingen, Germany) with a ColorView III CCDcamera and analySIS Doku 3.2 imaging software (OlympusSoft Imaging System, Münster, Germany). Anilin fluorescenceไม่ตื่นเต้นที่ 345 – 385 nm และมลพิษได้ตรวจพบการใช้ตัวกรองยาวผ่านเหนือ 420 nmย้อมสีปี่ mPSตามที่อธิบายไว้โดย Truernit et al. (2008), siliques ได้เก็บเกี่ยว และกรีดเปิดด้านหนึ่งก่อนที่ถาวรในการตรึง (50% เมทานอลและ 10% กรดน้ำส้ม) ที่ 4° C ในที่อย่างน้อย 12 h พวกเขาถูกแล้วต้องเป็นแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์รักษา 1% SDS และ NaOH ระดับ 0.2 N ห้องอุณหภูมิ Siliques ถูก rinsed น้ำ incubated ในเทพมรณะ 25% โซลูชั่น (2.5% Cl− ใช้งาน) สำหรับ 1-5 นาทีrinsed อีกครั้ง และโอนย้ายไป 1% กรดประจำงวดที่แล้วอุณหภูมิห้องสำหรับ 40 นาที เนื้อเยื่อถูก rinsed อีกน้ำ และ incubated ในรีเอเจนต์องท์ชิฟฟ์กับ propidiumไอโอไดด์ (metabisulphite โซเดียม 100 มม.และ 0.15 N HClไอโอไดด์ propidium จะเข้มข้นสุดท้ายของ μg 100 mL ได้เพิ่มสด) สำหรับ 1-2 h หรือจน กว่าต้นไม้มองเห็นได้สี ตัวอย่างมีการถ่ายโอนให้แล้วบนกล้องจุลทรรศน์ภาพนิ่ง และปกคลุม ด้วยโซลูชัน chloral ผับ/เลาจน์(4 g chloral ผับ/เลาจน์ กลีเซอรมล 1 และ 2 mL น้ำ)ภาพนิ่งที่ถูกเก็บไว้ข้ามคืนที่อุณหภูมิห้องในสภาพแวดล้อมที่ปิดเพื่อป้องกันการแห้งออก ถัดไป เกินผับ/เลาจน์ chloral ถูกเอาออก ของ Hoyer หลายหยดโซลูชัน (ภาษาอาหรับหมากฝรั่ง 30 g, 200 g chloral ผับ/เลาจน์ 20 กรัมกลีเซอร และน้ำ 50 มล.) ได้วางเนื้อเยื่อและใบปกที่อยู่ด้านบน ภาพนิ่งด้านซ้ายอีกอย่างน้อย 3 วันเพื่อให้การติดตั้งโซลูชั่นการตั้งค่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการเจริญเติบโตของพืชและโหลดติดตามพืชที่ปลูกภายใต้เงื่อนไขวัน(16 ชั่วโมงแสง / 8 ชั่วโมงเข้ม) ที่ 21 ° C โหลด phloem กับ watersoluble 8 hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonate (Molecular Probes ยูจีนโอเรกอนสหรัฐอเมริกาแก้ปัญหา 2.5 มิลลิในH2O) ได้ดำเนินการผ่านตัดก้านใบตามที่อธิบายGisel et al, (1999) 5 (6) -Carboxyfluorescein ถูก esterloaded เข้าไปในใยเปลือกไม้โดยการประยุกต์ใช้ 5 (6) - carboxyfluorescein diacetate (.. พร็อบโมเลกุลแมวไม่มีC195) ไปยังใบตามที่อธิบายไว้โดยไรท์และ Oparka (1996). CF diacetate ที่ถูกนำมาใช้ ความเข้มข้นสุดท้ายของ 60 pg / ml ในน้ำกลั่นและเก็บไว้เป็น 6 มก. / มล. แก้ปัญหาสต็อกในอะซีโตน. การย้อมสีเรืองแสงของหลอดเกสรย้อมสีหลอดเกสรที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบาย Huck et al, (2003) เปิด siliques ได้รับการแก้ไขค้างคืนในLavdowsky ของจอห์นฟา (ไฮด์ 1.5%, 2% กรดอะซิติกและเอทานอล30%) ที่ 4 องศาเซลเซียสและล้างในชุดเครื่องดื่มแอลกอฮอล์(70%, 50%, 30%, 10%) เป็นเวลา 10 นาที แต่ละ เนื้อเยื่อได้รับการปรับตัวลดลงด้วยยาสลบคลอราลไฮเดรต 10% ที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและล้างครั้งที่สองที่มีโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์(100 มิลลิพีเอช 7) และจากนั้นใน 5 M NaOH ที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที หลอดเกสรถูกย้อมด้วยสี 0.1% สีฟ้าเมธิล ตัวอย่างสีที่ถูกตั้งข้อสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ epifluorescence (Axioskop, Zeiss, Göttingen, เยอรมนี) กับ Colorview CCD III กล้องและการวิเคราะห์ Doku 3.2 ซอฟต์แวร์ภาพ (โอลิมปัซอฟท์ระบบการถ่ายภาพ, Münster, เยอรมนี) เรืองแสง Anilin รู้สึกตื่นเต้นที่ 345-385 นาโนเมตรและการปล่อยถูกตรวจพบโดยใช้ตัวกรองยาวผ่านเหนือ420 นาโนเมตร. การย้อมสี MPS-PI ตามที่อธิบาย Truernit et al, (2008), siliques ถูกเก็บเกี่ยวและช่องเปิดด้านหนึ่งก่อนที่จะถูกแก้ไขในตรึง(เมทานอล 50% และ 10% กรดอะซิติก) ที่ 4 ° C เป็นเวลาอย่างน้อย12 ชั่วโมง พวกเขาถูกยัดเยียดจากนั้นไปค้างคืนรักษา SDS 1% และ 0.2 ไม่มี NaOH ณ ห้องอุณหภูมิ Siliques ถูกล้างในน้ำบ่มใน25% น้ำยาฟอกขาว (2.5% ที่ใช้งาน Cl-) สำหรับ 1-5 นาทีล้างอีกครั้งและจากนั้นก็ย้ายไปเป็นระยะกรด1% ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา40 นาที เนื้อเยื่อถูกล้างอีกครั้งด้วยน้ำและบ่มในน้ำยาชิฟฟ์กับ propidium ไอโอไดด์ (100 มิลลิ metabisulphite โซเดียมและ 0.15 N HCl; ไอโอไดด์ propidium จะมีความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรเพิ่มสด) สำหรับ 1 ถึง 2 ชั่วโมงหรือจนกว่าจะมีพืชอย่างเห็นได้ชัดสี กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการโอนแล้วลงบนกล้องจุลทรรศน์สไลด์และปกคลุมด้วยโซลูชั่นไฮเดรตยาสลบคลอรา(4 กรัมไฮเดรตยาสลบคลอรา, กลีเซอรีน 1 มิลลิลิตรและน้ำ 2 มิลลิลิตร). สไลด์ถูกเก็บไว้ค้างคืนที่อุณหภูมิห้องในสภาพแวดล้อมที่ปิดเพื่อป้องกันไม่ให้แห้ง ถัดไปเกินกว่าไฮเดรตยาสลบคลอราถูกลบออกหลายหยด Hoyer ของการแก้ปัญหา(30 กรัมเหงือกภาษาอาหรับ, 200 กรัมยาสลบคลอราลไฮเดรต 20 กรัมกลีเซอรอลและน้ำ50 มิลลิลิตร) ถูกวางไว้มากกว่าเนื้อเยื่อและใบปกที่วางอยู่ด้านบน สไลด์ถูกทิ้งไม่ถูกรบกวนเป็นเวลาอย่างน้อย 3 วันเพื่อให้การแก้ปัญหาการติดตั้งการตั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ

ติดตามการเจริญเติบโตและการปลูกภายใต้สภาพวันยาว ( 16 ชม. แสง /
8 H มืด ) ที่ 21 องศา ถึงไหนถึงกันโหลดกับ 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonate watersoluble
(
) ( , ยูจีน , ออริกอน , สหรัฐอเมริกา ; 2.5 mm สารละลาย
H2O ) ทำการผ่านตัดก้านใบตามที่อธิบายไว้โดย
จีเซล et al . ( 1999 ) 5 ( 6 ) - carboxyfluorescein คือ esterloaded