AbstractAcetylene (HCCH) has a long

Abstract
Acetylene (HCCH) has a long history as a mechanism-based enzyme inhibitor and is considered an active-site probe of the particulate methane monooxygenase (pMMO). Here, we report how HCCH inactivates pMMO in Methylococcus capsulatus (Bath) by using high-resolution mass spectrometry and computational simulation. High-resolution MALDI-TOF MS of intact pMMO complexes has allowed us to confirm that the enzyme oxidizes HCCH to the ketene (C2H2O) intermediate, which then forms an acetylation adduct with the transmembrane PmoC subunit. LC–MS/MS analysis of the peptides derived from in-gel proteolytic digestion of the protein subunit identifies K196 of PmoC as the site of acetylation. No evidence is obtained for chemical modification of the PmoA or PmoB subunit. The inactivation of pMMO by a single adduct in the transmembrane PmoC domain is intriguing given the complexity of the structural fold of this large membrane–protein complex as well as the complicated roles played by the various metal cofactors in the enzyme catalysis. Computational studies suggest that the entry of hydrophobic substrates to, and migration of products from, the catalytic site of pMMO are controlled tightly within the transmembrane domain. Support of these conclusions is provided by parallel experiments with two related alkynes: propyne (CH3CCH) and trifluoropropyne (CF3CCH). Finally, we discuss the implication of these findings to the location of the catalytic site in pMMO.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่ออะเซทิลีน (HCCH) เป็นสารยับยั้งเอนไซม์ตามกลไกที่ได้ และถือว่าการวัดไซต์ที่ใช้งานของ monooxygenase มีเทนฝุ่น (pMMO) ที่นี่ เรารายงานว่า HCCH ยกเลิกเรียก pMMO ใน Methylococcus capsulatus (อาบน้ำ) โดยใช้ความละเอียดสูงรเมทและจำลองการคำนวณ ความละเอียดสูง MALDI TOF MS ของคอมเพล็กซ์ pMMO ยังได้อนุญาตให้เรายืนยันว่า เอนไซม์ทำปฏิกิริยาเกิด HCCH ไป ketene (C2H2O) กลาง ฟอร์มใดแล้วมี acetylation adduct กับย่อย PmoC transmembrane วิเคราะห์ LC – MS/MS ของเปปไทด์ที่ได้จากการย่อยย่อยโปรตีนได้ในเจระบุ K196 PmoC เป็นเว็บไซต์ของ acetylation ไม่มีหลักฐานจะได้รับสำหรับการเปลี่ยนแปลงทางเคมีของย่อย PmoA หรือ PmoB ฤทธิ์ pMMO โดยเดียว adduct ใน PmoC transmembrane ที่โดเมนจะน่าสนใจได้รับความซับซ้อนของพับโครงสร้างคอมเพล็กซ์ขนาดใหญ่เมมเบรน – โปรตีนนี้ตลอดจนหน้าที่ที่ซับซ้อน โดยหลักโลหะต่าง ๆ ในการเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ คำนวณการศึกษาแนะนำว่า รายการแบบพื้นผิว และการย้ายสินค้าจาก การเร่งปฏิกิริยาของ pMMO ถูกควบคุมอย่างใกล้ชิดภายในโดเมน transmembrane สนับสนุนข้อสรุปเหล่านี้ได้มาจากการทดลองขนานกับ alkynes ที่เกี่ยวข้องสอง: propyne (CH3CCH) และ trifluoropropyne (CF3CCH) ในที่สุด เราหารือปริยายผลการวิจัยเหล่านี้ไปยังตำแหน่งของเว็บไซต์ pMMO ด้วยตัวเร่งปฏิกิริยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อ
อะเซทิลีน (HCCH) มีประวัติศาสตร์อันยาวนานเป็นกลไกที่ใช้เอนไซม์ยับยั้งและมีการพิจารณาไต่สวนการใช้งานเว็บไซต์ของ monooxygenase อนุภาคก๊าซมีเทน (pMMO) ที่นี่เรารายงานว่า HCCH inactivates pMMO ใน Methylococcus capsulatus (บาท) โดยใช้มวลสารความละเอียดสูงและการจำลองการคำนวณ ความละเอียดสูง MALDI-TOF MS คอมเพล็กซ์ pMMO เหมือนเดิมมีให้เราสามารถยืนยันได้ว่าเอนไซม์ oxidizes HCCH ไป ketene (C2H2O) กลางซึ่งรูปแบบดึงเข้าหา acetylation กับรน PmoC subunit วิเคราะห์ LC-MS / MS ของเปปไทด์ที่ได้มาจากในเจลโปรตีนย่อยโปรตีน subunit ระบุ K196 ของ PmoC เป็นที่ตั้งของ acetylation ไม่มีหลักฐานที่จะได้รับการปรับเปลี่ยนทางเคมีของ PmoA หรือ PmoB subunit ยับยั้งของ pMMO โดยดึงเข้าหากันในโดเมนรน PmoC เป็นที่รักได้รับความซับซ้อนของการพับที่ซับซ้อนของโครงสร้างของเมมเบรนโปรตีนนี้มีขนาดใหญ่เช่นเดียวกับบทบาทที่ซับซ้อนเล่นโดยปัจจัยโลหะต่างๆในการเร่งปฏิกิริยาเอนไซม์ การศึกษาชี้ให้เห็นว่าการคำนวณการเข้ามาของพื้นผิวที่ไม่ชอบน้ำไปและการย้ายถิ่นของผลิตภัณฑ์จากเว็บไซต์เร่งปฏิกิริยาของ pMMO ที่มีการควบคุมอย่างเข้มงวดภายในโดเมนรน การสนับสนุนของข้อสรุปเหล่านี้ให้บริการโดยการทดลองแบบคู่ขนานกับสอง alkynes ที่เกี่ยวข้อง: propyne (CH3CCH) และ trifluoropropyne (CF3CCH) สุดท้ายเราหารือเกี่ยวกับความหมายของการค้นพบเหล่านี้ไปยังตำแหน่งของตัวเร่งปฏิกิริยาในเว็บไซต์ pMMO

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

摘要Acetylene HCCH）有很长的历史（mechanism-based酶抑制剂作为探针和考虑的是一个active-sitemethane单加氧酶（颗粒）。在这里，我们报告pMMO如何使pMMO HCCH Methylococcus capsulatus沐浴在由（）仿真中使用的质量和computational high-resolution。High-resolution intact pMMO MALDI-TOF MS的复合物。我们先进allowed to confirm that has HCCH酶氧化到中间，这ketene（C2H2O forms）乙酰化。实现你的一个adduct与跨膜亚基。PmoC LC MS / MS分析，从proteolytic素衍生的in-gel在的蛋白亚基作为一个网站的identifies K196（乙酰化。实现PmoC号。evidence是obtained改为化学的亚基。PmoA PmoB）或由一个单一的pMMO inactivation PmoC adduct在跨膜域是有趣的的结构，因为这complexity倍）的膜蛋白复合物，作为一个好的角色（played complicated As通过在各种金属酶的催化cofactors是计算研究的建议。substrates entry of疏水从迁移的，和催化的产品，在现场pMMO tightly跨膜域的术语是支持。这些conclusions是由两平行experiments provided偶联与相关propyne（CH3CCH）和trifluoropropyne：（CF3CCH）。Finally implication，我们讨论到的这些位置的findings在pMMO催化网站。