2.1. Isolation of endophytic fungiH

2.1. Isolation of endophytic fungi
Healthy plants of oilseed rape (B. napus) were collected in two
growing seasons (Nov. 2008 to May 2009 and Nov. 2009 to May
2010) grown in fields in Wuhan city, Hubei Province of central
China (30280N, 114210E). At each of the four growth stages (seedling, bolting, flowering and podding) in each season, five healthy
plants were carefully up-rooted using a spade, individually placed
in plastic bags and immediately taken to laboratory. The plants
were washed in tap water to remove soil particles on the roots
and the basal stems. Young leaves, the main stems and the taproots
were detached from each plant for fungal isolation.
The sampled leaves were cut into 3-cm squares, three leaves per
plant at each growth stage. The main stems and the taproots were
cut into 3-cm-long segments. The leaf pieces and the segments of
stems and roots were surface sterilized following the procedures
described by Hallmann et al. (2006), briefly in 70% ethanol (v/v)
for 1 min, then in 5% sodium hypochlorite (v/v) for 5 min, again
in a 70% ethanol for 30 s, and finally rinsed in sterile water 3 times
(3 min each). The surface-disinfected plant tissues were blotted
dry on sterilized filter paper. The ends of each stem and root segment were cut off using a sterile razor blade and the remaining
part of each segment was transversely cut to 2-mm-thick slices,
which were individually placed in Petri dishes (9 cm in diameter)
containing acidified potato dextrose agar (PDA), five slices per dish
and two dishes per plant. For the leaf samples, the margins of each
leaf piece were cut off and the central part was cut into 0.5-cm
squares, and placed on acidified PDA in Petri dishes, five pieces
per dish and two dishes for each leaf sample. The dishes with plant
tissues were incubated at 20 C and examined daily for fungal
growth for up to 4 weeks. The fungal colonies were individually
transferred to new PDA dishes, one colony per dish, and incubated
at 20 C. The resulting fungal cultures were purified by singlespore- or single-hypha-tip isolation. Finally, the pure cultures were
stored in 20% glycerol (v/v) at 80 C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 การแยกเชื้อรา endophyticพืชสุขภาพของ oilseed rape (เกิด napus) ถูกเก็บรวบรวมในสองเติบโตซีซั่น (2008 พฤศจิกายนอาจ 2009 และ 2009 พฤศจิกายนถึงพฤษภาคมเขตปลูกใน 2010) ในเมืองหวู่ฮั่น มณฑลหูเป่ย์จังหวัดกลางจีน (30 280N, 114 210E) ขั้น 4 การเจริญเติบโต (แหล่ง bolting เวอร์ริ่ง และ podding) แต่ละฤดูกาล ห้าสุขภาพพืชได้อย่างรอบคอบขึ้นรากใช้ไพ่โพดำ แยกกันอยู่ในถุงพลาสติก และทันทีนำไปปฏิบัติ พืชถูกล้างในน้ำประปาเพื่อเอาอนุภาคดินรากฐานและลำต้นโรค หนุ่มใบ ลำต้นหลัก และสหภาพการได้จากแต่ละโรงงานสำหรับแยกเชื้อราตัวอย่างใบถูกตัดเป็นสี่เหลี่ยม 3 ซม. สามใบต่อพืชในแต่ละระยะการเจริญเติบโต มีลำต้นหลักและการสหภาพตัดเป็นเซ็กเมนต์ยาว 3 ซม. ชิ้นส่วนใบและส่วนของลำต้นและรากอยู่ผิว sterilized ตอนอธิบายสั้น ๆ โดย Hallmann et al. (2006), ในเอทานอล 70% (v/v)ใน 1 นาที ใน 5% โซเดียมไฮโป (v/v) ใน 5 นาที อีกแล้วในเอทานอล 70% 30 s และสุดท้าย rinsed ในกระบอกน้ำ 3 ครั้ง(3 นาทีละ) เนื้อเยื่อพืชฆ่าเชื้อโรคสำหรับพื้นผิวที่ blottedกระดาษกรอง sterilized แห้ง ปลายของแต่ละกลุ่มก้านและรากถูกตัดโดยใช้ใบมีดโกนใส่และเหลือส่วนของแต่ละกลุ่มถูกตัดให้ชิ้นหนา 2 มม. transverselyซึ่งแต่ละรายการไว้ในจาน Petri (เส้นผ่านศูนย์กลาง 9 เซนติเมตร)ประกอบด้วยมันฝรั่ง acidified ขึ้น agar (PDA), ห้าชิ้นต่อจานและอาหารสองต่อพืช ตัวอย่างใบ ระยะขอบของแต่ละชิ้นส่วนใบถูกตัดออก และส่วนที่ตัดไป 0.5 ซม.สี่เหลี่ยม และ PDA acidified วางบนใน Petri อาหาร ห้าชิ้นต่อจานและจานที่สองสำหรับแต่ละตัวอย่างใบไม้ อาหารกับพืชเนื้อเยื่อ incubated ที่ 20 C และตรวจสอบทุกวันสำหรับเชื้อราเจริญเติบโตถึง 4 สัปดาห์ มีอาณานิคมเชื้อราแต่ละโอนย้ายไปที่ ใหม่ PDA อาหาร ฝูงหนึ่งต่อจาน และ incubatedที่ 20 เซลเซียส วัฒนธรรมเชื้อราเกิดได้บริสุทธิ์ โดยแยก singlespore - หรือเดี่ยว-hypha-คำแนะนำ วัฒนธรรมบริสุทธิ์ถูกที่สุดเก็บอยู่ใน 20% กลีเซอร (v/v) ที่ค. 80

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 การแยกเชื้อราเอนโดไฟท์พืชเพื่อสุขภาพของการข่มขืน oilseed (B. napus) ถูกเก็บไว้ในสองฤดูกาลที่กำลังเติบโต(พฤศจิกายน 2008 ถึงเดือนพฤษภาคม 2009 และพฤศจิกายน 2009 ถึงเดือนพฤษภาคม2010) ที่ปลูกในทุ่งในเมืองหวู่ฮั่นมณฑลหูเป่ยภาคกลางของประเทศจีน(30? 280N 114? 210E) ในแต่ละขั้นตอนของการเจริญเติบโตของสี่ (ต้นกล้า, bolting ดอกและ podding) ในแต่ละฤดูกาลที่ดีต่อสุขภาพห้าพืชอย่างระมัดระวังขึ้นที่หยั่งรากใช้จอบที่วางไว้เป็นรายบุคคลในถุงพลาสติกและนำไปยังห้องปฏิบัติการทันที พืชที่ถูกล้างในน้ำประปาที่จะเอาอนุภาคของดินในรากและลำต้นฐาน ใบอ่อน, ลำต้นหลักและ taproots ถูกถอดออกจากแต่ละโรงงานการแยกเชื้อรา. ใบตัวอย่างถูกตัดเป็นสี่เหลี่ยม 3 ซมสามใบต่อพืชในแต่ละขั้นตอนการเจริญเติบโต ลำต้นหลักและ taproots ถูกตัดออกเป็นกลุ่ม3 ซม. ยาว ชิ้นส่วนใบและส่วนของลำต้นและรากถูกพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อต่อไปนี้ขั้นตอนการอธิบายโดยHallmann et al, (2006), เวลาสั้น ๆ ในเอทานอล 70% (v / v) เป็นเวลา 1 นาทีจากนั้นใน 5% โซเดียมไฮโปคลอไรต์ (v / v) เป็นเวลา 5 นาทีอีกครั้งในเอทานอล70% เป็นเวลา 30 วินาทีและล้างในที่สุดน้ำหมัน 3 ครั้ง(3 นาทีในแต่ละครั้ง) พื้นผิวฆ่าเชื้อเนื้อเยื่อพืชถูกเปื้อนแห้งบนกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อ ปลายของแต่ละลำต้นและส่วนรากถูกตัดออกโดยใช้ใบมีดโกนผ่านการฆ่าเชื้อและที่เหลืออีกส่วนหนึ่งของแต่ละส่วนถูกตัดตามขวางเพื่อชิ้น 2 มมหนาซึ่งถูกวางไว้เป็นรายบุคคลในจานเลี้ยงเชื้อ(9 ซม. ในเส้นผ่าศูนย์กลาง) ที่มีมันฝรั่งกรด วุ้นเดกซ์โทรส (PDA) ห้าชิ้นต่อจานและสองจานต่อต้น สำหรับตัวอย่างใบขอบของแต่ละชิ้นส่วนใบที่ถูกตัดออกและภาคกลางที่ถูกตัดเป็น 0.5 ซมสี่เหลี่ยมและวางไว้บนPDA กรดในอาหารเลี้ยงเชื้อ, ห้าชิ้นต่อจานสองจานและตัวอย่างแต่ละใบ อาหารที่มีพืชที่เนื้อเยื่อถูกบ่มที่ 20 องศาเซลเซียสและตรวจสอบรายวันสำหรับเชื้อราเจริญเติบโตได้ถึง4 สัปดาห์ อาณานิคมของเชื้อราเป็นรายบุคคลที่ถูกถ่ายโอนไปยังอาหาร PDA ใหม่หนึ่งอาณานิคมต่อจานและบ่มที่20 องศาเซลเซียส ส่งผลให้วัฒนธรรมถูกเชื้อราบริสุทธิ์โดย singlespore- หรือแยกเดี่ยว hypha ปลาย ในที่สุดเชื้อบริสุทธิ์ที่ถูกเก็บไว้ในกลีเซอรีน 20% (v / v) ที่? 80? C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . การแยกราเอนโดไฟต์
สุขภาพพืช oilseed rape ( ของบี napus ) ถูกเก็บในฤดูปลูกที่ 2
( พ.ย. 2551 ถึงพฤศจิกายน 2552 ถึง พฤษภาคม 2552 และ
2010 ) ที่ปลูกในทุ่งนาในเมืองหวู่ฮั่น , หูเป่ย์จังหวัดภาคกลาง
จีน ( 30  280n 114  210e ) ในแต่ละสี่ขั้นตอนการเจริญเติบโต ( ต้นกล้า , bolting ออกดอก และ podding )
5 สุขภาพในแต่ละฤดูกาลพืชให้ดีขึ้น ราก ใช้จอบที่วางไว้
ในถุงพลาสติกแบบทันทีและนำส่งห้องปฏิบัติการ พืช
ถูกล้างในน้ำเพื่อเอาอนุภาคดินที่รากและลำต้น (
. ใบเล็ก ลำต้นหลักและรากแก้ว
ถูกแยกออกจากแต่ละโรงงานสำหรับเชื้อราที่แยก .
ตัวอย่างใบตัดเป็นสี่เหลี่ยม 3-cm สามใบต่อ
พืชการเจริญเติบโตในแต่ละระยะ ลำต้นหลักและรากแก้วเป็น
ตัดเป็น 3-cm-long เซ็กเมนต์ ชิ้น ส่วนของใบและลำต้น และรากก็ฆ่าเชื้อที่ผิว

ตามขั้นตอนที่อธิบายโดย hallmann et al . ( 2006 ) , ในเวลาสั้น ๆ 70% เอทานอล ( v / v )
1 นาที แล้วใน 5 % โซเดียมไฮโปคลอไรต์ ( v / v ) เป็นเวลา 5 นาที อีกครั้ง
ใน 70% เอทานอลสำหรับ 30 วินาที และสุดท้าย ล้างในน้ำ 3 ครั้ง
เป็นหมัน( 3 นาทีแต่ละครั้ง ) ผิวฆ่าเชื้อเนื้อเยื่อพืชที่เปื้อน
แห้งฆ่าเชื้อกรองกระดาษ ส่วนปลายของลำต้นและรากแต่ละถูกตัดด้วยใบมีดที่เป็นหมัน และอีกส่วนหนึ่งของแต่ละกลุ่มได้

2-mm-thick ตามขวางตัดกับชิ้นที่เป็นแบบวางในจานเลี้ยงเชื้อ ( 9 เซนติเมตร )
ที่มีปรับอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) , 5 ชิ้นต่อจาน
และสองจาน ต่อพืช สำหรับตัวอย่างใบ ระยะขอบของแต่ละ
ใบชิ้นถูกตัดส่วนกลางถูกตัดเป็นสี่เหลี่ยม 0.5-cm
และวางไว้บน PDA ที่ปรับในจานเลี้ยงเชื้อ , 5 ชิ้นต่อจาน 2 จาน
และแต่ละใบตัวอย่าง อาหารกับเนื้อเยื่อพืช
อุณหภูมิ 20  C และตรวจสอบรายวันสำหรับเชื้อรา
นานถึง 4 สัปดาห์ อาณานิคมของนักเรียนรายบุคคล
โอนไปยังจาน PDA ใหม่ อาณานิคมต่อจาน และบ่ม
ที่ 20  C ที่เกิดเชื้อราวัฒนธรรมมีความบริสุทธิ์โดย singlespore - หรือแยกปลายไฮฟาเดี่ยว ในที่สุด วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์เป็น
เก็บไว้ใน 20 % กลีเซอรอล ( v / v ) ที่  80  C