Developing a polyepitope vaccine, a

Developing a polyepitope vaccine, a chimeric protein which contains diverse types of antigenic epitopes, is a promising strategy to prevent malaria. Previously, we had constructed a library of polyeptitope chimeric genes against Plasmodium falciparum without any protein tags. In an attempt to develop an efficient and universal procedure for purification of polyepitope chimeric proteins, we assembled an immunoaffinity chromatography (IAC) column with affinity-purified specific polyclonal IgY (mpIgY) antibodies that recognized the same C-terminal epitope tag of chimeric proteins in the library. A single-step and universal protocol was established and successfully applied for the purification of chimeric proteins. Using this protocol, chimeric proteins were specifically purified from an Escherichia coli expression system, and the purity and authenticity were verified by gel electrophoresis and Western blot analysis. Moreover, the comparison between this IAC method and the conventional chromatography, using two anion exchange columns followed by a step of gel filtration, showed that the new method was more efficient with an 8-fold greater yield. The results suggest that this IAC method will be an efficient approach for the purifications of polyepitope vaccine candidates against P. falciparum in our future study, and also be valuable for other similar applications.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พัฒนาวัคซีน polyepitope โปรตีน chimeric ซึ่งประกอบด้วยหลากหลายชนิด antigenic epitopes คือ กลยุทธ์การกำหนดการป้องกันมาลาเรีย ก่อนหน้านี้ เราได้สร้างขึ้นไลบรารีของยีน chimeric polyeptitope กับ falciparum พลาสโมเดียมโดยไม่ต้องมีแท็กโปรตีน ในความพยายามที่จะพัฒนากระบวนการสากล และมีประสิทธิภาพในการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน chimeric polyepitope เรารวบรวมคอลัมน์ chromatography (IAC) immunoaffinity ความบริสุทธิ์ความสัมพันธ์เฉพาะ polyclonal IgY (mpIgY) แอนตี้ที่รู้จักกันสถานี C epitope tag ของ chimeric โปรตีนในไลบรารี โพรโทคอลขั้น ตอนเดียว และสากลก่อตั้งขึ้น และนำไปใช้ในการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน chimeric ใช้โพรโทคอลนี้ chimeric โปรตีนที่บริสุทธิ์โดยเฉพาะจากระบบ Escherichia coli นิพจน์ และความบริสุทธิ์และความถูกต้องถูกตรวจสอบ โดยเจ electrophoresis และวิเคราะห์ตะวันตกคืนในตา นอกจากนี้ การเปรียบเทียบระหว่างวิธีนี้ IAC และ chromatography ปกติ ใช้สอง anion exchange คอลัมน์ตามขั้นตอนของการกรองเจ พบว่า วิธีการใหม่มีประสิทธิภาพมากขึ้น ด้วยผลตอบแทนมากกว่าการ 8-fold ผลแนะนำว่า วิธีนี้ IAC จะเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพสำหรับ purifications ของ polyepitope ผู้สมัครวัคซีนกับ P. falciparum ในการศึกษาในอนาคตของเรา และยัง เป็นประโยชน์สำหรับโปรแกรมประยุกต์อื่นคล้ายกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การพัฒนาวัคซีน polyepitope โปรตีนลูกผสมที่มีความหลากหลายของชนิด epitopes แอนติเจนเป็นกลยุทธ์ที่มีแนวโน้มที่จะป้องกันไม่ให้โรคมาลาเรีย ก่อนหน้านี้เราได้สร้างห้องสมุดของยีนลูกผสม polyeptitope กับ Plasmodium falciparum โดยไม่ต้องแท็กโปรตีนใด ๆ ในความพยายามที่จะพัฒนาเป็นขั้นตอนที่มีประสิทธิภาพและสากลสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ polyepitope โปรตีนลูกผสมที่เรารวบรวมโค immunoaffinity (IAC) คอลัมน์ที่มีความสัมพันธ์ที่บริสุทธิ์เฉพาะโพลี IGY (mpIgY) แอนติบอดีที่ได้รับการยอมรับเหมือนกันแท็ก epitope C ขั้วของโปรตีนลูกผสมใน ห้องสมุด. ขั้นตอนเดียวและโปรโตคอลสากลเป็นที่ยอมรับและนำไปใช้ประสบความสำเร็จในการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนลูกผสม โดยใช้โปรโตคอลนี้โปรตีนลูกผสมบริสุทธิ์โดยเฉพาะจากเชื้อ Escherichia coli ระบบการแสดงออกและความบริสุทธิ์และความถูกต้องถูกตรวจสอบโดยข่าวคราวและการวิเคราะห์ดวงตะวัน นอกจากนี้ยังมีการเปรียบเทียบระหว่างวิธีนี้ IAC และโคธรรมดาโดยใช้สองคอลัมน์แลกเปลี่ยนไอออนตามด้วยขั้นตอนของการกรองเจลแสดงให้เห็นว่าวิธีการใหม่ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นด้วยอัตราผลตอบแทนที่มากขึ้น 8 เท่า ผลการชี้ให้เห็นว่าวิธีนี้ IAC จะมีประสิทธิภาพวิธีการสำหรับบริสุทธิ์ของผู้สมัครวัคซีน polyepitope กับพี falciparum ในการศึกษาในอนาคตของเราและยังมีค่าสำหรับการใช้งานอื่น ๆ ที่คล้ายกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพัฒนา polyepitope วัคซีนที่เป็นโปรตีนซึ่งมีหลากหลายชนิดของแอนติเจนทั้งสองชนิด เป็นกลยุทธ์ที่มีแนวโน้มที่จะป้องกันมาลาเรีย ก่อนหน้านี้ เราได้สร้างห้องสมุดยีนต่อต้านมาลาเรีย พลาสโมเดียม polyeptitope ที่ปราศจากโปรตีน Tags ในความพยายามที่จะพัฒนาประสิทธิภาพและขั้นตอนสากลเพื่อผลิตโปรตีนที่ polyepitope ,เรารวมตัวกันเป็น immunoaffinity chromatography ( IAC ) คอลัมน์ความสัมพันธ์บริสุทธิ์ igy ใช้เฉพาะ ( mpigy ) แอนติบอดีที่รู้จักกันซึ่งแท็กของโปรตีนในไวรัสที่ห้องสมุด ขั้นตอนเดียวและโปรโตคอลสากลก่อตั้งขึ้นและสามารถใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนที่ไม่เป็นจริง การใช้โปรโตคอลนี้โดยเฉพาะโปรตีนที่บริสุทธิ์จากเชื้อ Escherichia coli การแสดงออกของระบบและความบริสุทธิ์แท้และถูกตรวจสอบโดยวิธี Western blot gel และการวิเคราะห์ . นอกจากนี้ การเปรียบเทียบระหว่างวิธีโครมาโทกราฟีแบบ IAC และการแลกเปลี่ยนไอออน , สองคอลัมน์ตามด้วยขั้นตอนการกรองเจลพบว่าวิธีการใหม่ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นด้วย 8-fold มากกว่าผลผลิต พบว่าวิธีนี้จะเป็นวิธีการที่ IAC มีประสิทธิภาพสำหรับ purifications polyepitope วัคซีนของผู้สมัครกับหน้าใหม่ในการศึกษาอนาคตของเรา และยังเป็นประโยชน์สำหรับโปรแกรมที่คล้ายกันอื่น ๆ