Bioluminescence Cell Spectral Imagi

Bioluminescence Cell Spectral Imaging. HT1080 cells expressing various BRET fusion proteins and RLuc8 or RLuc8.6 were plated in 96-well plates in increasing variable numbers (200–60,000). After 24 h, the luciferase substrate (2 μg/well), CLZ (Nanolight Technology), or CLZ-v (Promega) was added. Cells were imaged immediately after the addition of substrate using an IVIS-200 or IVIS-Spectrum imaging system equipped with a cooled charge-coupled device camera (Caliper). Sequential imaging was performed using open/donor/acceptor/open filters. Spectral imaging was performed from 460 to 720 nm in 20-nm increments (each spectral filter used spans for 20-nm wavelength and is denoted by the midpoint); when EnduRen (Promega) was used as substrate, it was added 4 h before imaging. Regions of interest were drawn over each well for all filter sets, and the average radiance was determined. The equations used for calculating BRET ratios and DRs are provided in SI Materials and Methods.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Bioluminescence เซลล์สเปกตรัมภาพ HT1080 เซลล์แสดงโปรตีนเบรตฟิวชั่น และ RLuc8 หรือ RLuc8.6 ต่าง ๆ ถูกชุบในแผ่นดี 96 ในการเพิ่มหมายเลขตัวแปร (200 – 60000) หลังจาก 24 ชม พื้นผิว luciferase (2 μg/ดี), CLZ (เทคโนโลยี Nanolight), หรือ CLZ-v (Promega) มีเพิ่ม เซลล์ถูก imaged ทันทีหลังจากการเพิ่มพื้นผิวที่ใช้ IVIS 200 หรือสเปกตรัม IVIS ถ่ายภาพระบบการพร้อมกล้องอุปกรณ์จุ–ค่าธรรมเนียมเย็น ๆ (ปั้ม) ภาพต่อเนื่องที่ดำเนินการโดยใช้ตัวกรอง เปิด/บริจาค/acceptor/เปิด ภาพสเปกตรัมได้ดำเนินการจาก 460 กับ 720 nm ที 20 nm (ตัวกรองแต่ละสเปกตรัมที่ใช้ครอบคลุมสำหรับความยาวคลื่น 20 nm และสามารถระบุเกณฑ์); EnduRen (Promega) ถูกใช้เป็นพื้นผิว จะมีเพิ่ม h 4 ก่อนภาพ ภูมิภาคน่าสนใจถูกดึงมากกว่าดีแต่ละทั้งหมดกรองชุด และกำหนดหน้าเฉลี่ย สมการที่ใช้สำหรับการคำนวณอัตราส่วนเบรต และ DRs มี SI วัสดุและวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชีวิตเรืองแสงเงาการถ่ายภาพมือถือ เซลล์ HT1080 แสดงโปรตีน BRET ฟิวชั่นต่างๆและ RLuc8 หรือ RLuc8.6 ถูกชุบในแผ่น 96 หลุมในจำนวนที่เพิ่มขึ้นของตัวแปร (200-60,000) หลังจาก 24 ชั่วโมงพื้นผิว luciferase (2 ไมโครกรัม / ดี) CLZ (Nanolight เทคโนโลยี) หรือ CLZ-V (Promega) ถูกเพิ่มเข้ามา เซลล์ที่ถูกถ่ายภาพได้ทันทีหลังจากที่นอกเหนือจากสารตั้งต้นที่ใช้ Ivis-200 หรือระบบการถ่ายภาพ Ivis-Spectrum พร้อมกับกล้องของอุปกรณ์ค่าใช้จ่ายควบคู่เย็น (Caliper) การถ่ายภาพต่อเนื่องได้รับการดำเนินการโดยใช้เปิด / บริจาค / ใบเสร็จ / กรองเปิด การถ่ายภาพผีได้ดำเนินการ 460-720 นาโนเมตรในการเพิ่มขึ้น 20 นาโนเมตร (แต่ละตัวกรองสเปกตรัมใช้ช่วงความยาวคลื่น 20 นาโนเมตรและมีการแสดงโดยจุดกึ่งกลาง); เมื่อ EnduRen (Promega) ถูกใช้เป็นพื้นผิวมันก็เพิ่ม 4 ชั่วโมงก่อนที่จะถ่ายภาพ ภูมิภาคท​​ี่น่าสนใจถูกดึงดีกว่าแต่ละชุดกรองทั้งหมดและความกระจ่างใสเฉลี่ยถูกกำหนด สมการที่ใช้ในการคำนวณอัตราส่วน BRET และอาร์มีอยู่ใน SI วัสดุและวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไบโอลูมิเนสเซนเซลล์แสงถ่ายภาพ เซลล์การแสดงออกต่าง ๆ ht1080 Bret ฟิวชั่นโปรตีนและ rluc8 หรือ rluc8.6 ถูกชุบ 96 ดีแผ่นในตัวเลขที่เพิ่มขึ้นของตัวแปร ( 200 – 60 , 000 ) หลังจาก 24 ชั่วโมง สารลูซิเฟอเรส ( 2 μกรัม / ดี ) clz ( nanolight เทคโนโลยี ) หรือ clz-v ( promega ) ถูกเพิ่มเข้ามาเซลล์มีภาพลักษณ์ทันทีหลังจากเติมสารโดยใช้ ivis-200 หรือระบบการถ่ายภาพสเปกตรัม and พร้อมกับเย็นชาร์จคู่อุปกรณ์กล้อง ( Caliper ) การถ่ายภาพแบบแสดงการเปิด / บริจาค / พระนาสิก / เปิดตัวกรองการถ่ายภาพสเปกตรัมแสดงจาก 460 ถึง 720 nm ใน 20 เพิ่มขึ้น nm ( แต่ละการใช้กรองครอบคลุม 20 nm ความยาวคลื่น เขียนโดยจุดกึ่งกลาง ) ; เมื่อ enduren ( promega ) ใช้เป็นสารตั้งต้นได้เพิ่ม 4 ชั่วโมงก่อนที่จะถ่ายภาพ ภูมิภาคของความสนใจถูกดึงไปแต่ละดีสำหรับชุดตัวกรองทั้งหมด และรัศมีเฉลี่ยกำหนดไว้สมการที่ใช้ในการคำนวณอัตราส่วนและ Bret DRS มีไว้ในวัสดุศรีและวิธีการ