Cell culturesH4IIE hepatoma cells w

Cell cultures

H4IIE hepatoma cells were incubated in 24-well plates (Greiner Bio-One, Monroe, NC) and grown to near confluency in Dubecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), containing foetal bovine serum (FBS) 10% (v/v). Penicillin and gentamicin were always added to
the media at concentrations of 100 IU/mL and 50 lg/mL, respec-
tively. For gene expression experiments, H4IIE cells were treated for 8 h with 500 nM dexamethasone and 0.1 mM 8-CTP-cAMP (Dex-cAMP), to induce G6P gene expression, together with differ- ent concentrations of anthocyanins or anthocyanins + insulin. Three wells were allocated for each experiment, including one neg- ative control (untreated cells) and one positive control (cells treated with insulin). L6 myoblasts from rat skeletal muscles (Loi- ke, Zalutsky, Kaback, Miranda, & Silverstein, 1988) were plated in
1.9 cm2 well uncoated of a 24-well plate (CELLSTAR, Grainer Bio-
One) at a density of 40,000 cells/well and incubated at 37 oC in
5% CO2, 95% air in a medium composed of 10% (vol/vol) FBS and DMEM with 5 mM glucose until confluence was reached, which normally occurred within 2–3 days. DMEM medium was changed every 24 h. Penicillin and gentamicin were added to DMEM to a
concentration of 100 IU/mL and 50 lg/mL, respectively. Once 80–
95% confluency was reached, cells were differentiated using a stan- dard protocol as described elsewhere (Loike et al., 1988). Briefly, cell differentiation was induced by sequential incubation of L6 myoblasts in DMEM with 2% (vol/vol) horse serum, and 100 nM insulin for 48 h. Then media was replaced with DMEM with 2% (vol/vol) horse serum for another 24 h. After the differentiation program, cells were immediately used for glucose uptake experi- ments. The percentage of myotube formation was determined as the percentage of nuclei present in multinucleated myotubes phase-contrast microscopy and Giemsa staining. The differentia- tion protocol used was also validated by evaluation of insulin sen- sitivity. In all the experiments 80–90% of the myoblasts fused into myotubes. All the experiments were performed on cells from pas- sage eight or less.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมเซลล์H4IIE hepatoma เซลล์ถูก incubated ในดี 24 แผ่น (Greiner ไบหนึ่ง มอนโร NC) และเติบโตที่ใกล้ confluency ใน Dubecco ของ Modified อีเกิ้ลขนาดกลาง (DMEM), ประกอบด้วยเซรั่มวัว foetal (FBS) 10% (v/v) ยาเพนนิซิลลินและ gentamicin ถูกเสมอเพิ่มสื่อที่ความเข้มข้น 100 IU/mL และ 50 lg/mL, respec-tively สำหรับการทดลองยีนนิพจน์ เซลล์ H4IIE ได้รับการรักษาสำหรับ h 8 500 nM dexamethasone และ 0.1 มม. 8-CTP-ค่าย (เดกซ์แคมป์), ชวน G6P ยีน กับเอนท์แตกต่างความเข้มข้นของ anthocyanins หรือ anthocyanins + อินซูลิน บ่อที่สามถูกปันส่วนสำหรับแต่ละการทดลอง ตัวควบคุม neg ative หนึ่ง (ไม่ถูกรักษาเซลล์) และควบคุมบวกหนึ่ง (เซลล์รักษา ด้วยอินซูลิน) Myoblasts L6 จากหนูกล้ามเนื้ออีก (ke ลอย Zalutsky, Kaback มิรันดา และ Silverstein, 1988) ได้ชุบใน1.9 cm2 ที่เคลือบด้วยของดี 24 แผ่น (CELLSTAR, Grainer ยาหนึ่ง) ที่ความหนาแน่นของเซลล์ดี 40000 และ incubated ที่ 37 องศาเซลเซียสใน5% CO2, 95% อากาศในสื่อประกอบด้วย 10% (vol/vol) FBS และ DMEM กับกลูโคส 5 มม.จนกว่า confluence ถึง ซึ่งโดยปกติจะเกิดขึ้นภายใน 2-3 วัน DMEM สื่อมีการเปลี่ยนแปลงทุก 24 h. ยาเพนนิซิลลิน และ gentamicin ถูกเพิ่มเข้าไป DMEM เพื่อเป็นความเข้มข้น 100 IU/mL และ lg 50/mL ตามลำดับ เมื่อ 80-ถึง 95% confluency เซลล์แตกต่างกันโดยใช้โพรโทคอลสแตน dard ดังที่อื่น ๆ (Loike et al., 1988) Briefly สร้างความแตกต่างของเซลล์ถูกเหนี่ยวนำ โดยคณะทันตแพทยศาสตร์ตามลำดับของ L6 myoblasts ใน DMEM กับซีรั่มม้า 2% (vol/vol) 100 nM อินซูลินสำหรับ 48 h แล้วสื่อถูกแทนที่ ด้วย DMEM กับซีรั่มม้า (vol/vol) 2% ในอีก 24 ชม หลังจากโปรแกรมสร้างความแตกต่าง เซลล์ทันทีใช้สำหรับดูดซับกลูโคส experi-ments กัน เปอร์เซ็นต์ของผู้แต่ง myotube ถูกกำหนดเป็นเปอร์เซ็นต์ของแอลฟาใน multinucleated myotubes ความคมชัดระยะ microscopy และย้อมสี Giemsa โพรโทคอลสเตรชัน differentia ใช้ถูกตรวจสอบ โดยการประเมินของอินซูลินเซ็น-sitivity ในการทดลองทั้งหมด fused 80 – 90% ของ myoblasts ที่เป็น myotubes ทดลองทั้งหมดถูกแสดงบนเซลล์จากปราชญ์ pas 8 หรือน้อยกว่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์เพาะเลี้ยงH4IIE เซลล์ตับถูกบ่มในแผ่น 24 หลุม (Greiner Bio-One มอนโร, NC) และเติบโตขึ้นไปใกล้ขัดแย้ง uency ในสาย Modi Dubecco ของเอ็ด Eagle กลาง (DMEM) ที่มีซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ (FBS) 10% (v / v) . Penicillin และ gentamicin ถูกเพิ่มเสมอที่จะสื่อที่ความเข้มข้น100 IU / mL และ 50 แอลจี / มิลลิลิตรตามลําดับ สำหรับการทดลองการแสดงออกของยีนเซลล์ H4IIE ได้รับการรักษาเป็นเวลา 8 ชั่วโมงกับ dexamethasone 500 นาโนเมตรและ 0.1 มิลลิ 8 CTP-Camp (Dex-ค่าย) เพื่อก่อให้เกิดการแสดงออกของยีน G6P พร้อมกับความเข้มข้นที่แตกต่างของ anthocyanins anthocyanins + หรืออินซูลิน สามหลุมถูกจัดสรรสำหรับการทดสอบแต่ละครั้งรวมถึงการควบคุมหนึ่ง neg- ative (เซลล์ได้รับการรักษา) และควบคุมบวก (เซลล์รับการรักษาด้วยอินซูลิน) L6 myoblasts จากกล้ามเนื้อโครงร่างหนู (Loi- อีตา, Zalutsky, Kaback มิแรนดาและเวอร์ 1988) ได้รับการชุบ1.9 cm2 สารเคลือบกันดีของแผ่น 24 หลุม (CELLSTAR, Grainer Bio- หนึ่ง) ที่อัตราความหนาแน่น 40,000 เซลล์ / ดีและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในCO2 5% อากาศ 95% ในระยะกลางประกอบด้วย 10% (ปริมาตร / ปริมาตร) FBS และ DMEM ที่มีระดับน้ำตาลใน 5 มิลลิจนกว่านักโทษอิทธิพลก็มาถึงซึ่งปกติจะเกิดขึ้นภายใน 2-3 วัน กลาง DMEM ที่มีการเปลี่ยนแปลงทุก 24 ชั่วโมง Penicillin และ gentamicin ถูกเพิ่มเข้าไปใน DMEM ไปที่ความเข้มข้น100 IU / mL และ 50 แอลจี / มิลลิลิตรตามลำดับ เมื่อ 80 95% ขัดแย้ง uency เป็นถึงเซลล์ที่แตกต่างกันโดยใช้โปรโตคอลดาดลี้ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น (loike et al., 1988) Brie ชั้น y ที่แตกต่างของเซลล์ที่เกิดจากการบ่มลำดับ L6 myoblasts ใน DMEM 2% (ปริมาตร / ปริมาตร) ซีรั่มม้าและ 100 นาโนเมตรอินซูลินเป็นเวลา 48 ชั่วโมง สื่อนั้นถูกแทนที่ด้วย DMEM 2% (ปริมาตร / ปริมาตร) ซีรั่มม้าอีก 24 ชั่วโมง หลังจากที่โปรแกรมความแตกต่างของเซลล์ถูกนำมาใช้ทันทีสำหรับการดูดซึมกลูโคส ments ประสบการณ์ ร้อยละของการก่อ myotube ถูกกำหนดเป็นร้อยละของนิวเคลียสอยู่ใน myotubes multinucleated กล้องจุลทรรศน์เฟสความคมชัดและการย้อมสี Giemsa โปรโตคอลการ differentia- ใช้ยังได้รับการตรวจสอบโดยการประเมินผลของอินซูลินเซนเซอร์ไว ในการทดลองทั้งหมด 80-90% ของ myoblasts หลอมละลายเข้า myotubes การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการในเซลล์จากปราชญ์ pas- แปดหรือน้อยกว่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์วัฒนธรรม

h4iie มะเร็งตับ cells ) 24 แผ่น ( ไกรเนอร์ไบโอ ดีหนึ่ง มอนโร , NC ) และเติบโตใกล้คอนfl uency ใน dubecco ของโมไดจึงเอ็ดนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) ประกอบด้วย เซรั่ม ( FBS ) foetal วัว 10% ( v / v ) และก็เพิ่มยาเพนนิซิลิน

สื่อที่ความเข้มข้น 100 IU / ml และ LG / 50 ml respec -
มี . สำหรับการแสดงออกของยีนนี้h4iie เซลล์จะถูก 8 H 500 nm dexamethasone และ 0.1 มิลลิเมตร 8-ctp-camp ( ค่าย DEX ) เพื่อให้เกิดการแสดงออกของยีน g6p พร้อมกับแตกต่าง - ใช้ความเข้มข้นของแอนโทไซยานิน หรือ แอนโทไซยานินอินซูลิน สามบ่อ ได้รับการจัดสรรในแต่ละการทดลอง รวมทั้งไม่แสดงความโน้มเอียงหรืออารมณ์ควบคุม ( รักษาเซลล์ ) และการควบคุม ( บวกหนึ่งเซลล์รักษาด้วยอินซูลิน )l6 myoblasts จากหนูกล้ามเนื้อโครงกระดูก ( LOI - Ke zalutsky kaback , , มิแรนด้า &ซิลเวอร์สไตน์ , 1988 ) ชุบ
1.9 CM2 ดีเคลือบผิวของ 24 ดีจาน ( cellstar grainer , ไบโอ -
) ในอัตราความหนาแน่น 40 , 000 เซลล์ / และบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสใน
คาร์บอนไดออกไซด์ 5% , อากาศ 95% ในขนาดกลาง จำนวน 10 เปอร์เซ็นต์ ( ปริมาตร / ปริมาตร ) FBS และ dmem 5 มม. กลูโคสจนคอนfl uence ได้ถึงซึ่งปกติจะเกิดขึ้นภายใน 2 – 3 วัน dmem ขนาดกลางถูกเปลี่ยนทุก 24 ชั่วโมง และมีการเพิ่มยาเพนนิซิลิน dmem กับ
ความเข้มข้น 100 IU / ml และ LG / 50 มิลลิลิตร ตามลำดับ เมื่อ 80 –
95% con fl uency ได้ถึงเซลล์ที่แตกต่างกัน การใช้สแตน - โปรโตคอล dard ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ( loike et al . , 1988 ) flบรีคการเปลี่ยนสภาพของเซลล์ถูกชักจูงโดยลำดับ l6 myoblasts บ่มใน dmem 2 % ( ปริมาตร / ปริมาตร ) ม้า เซรั่ม และ 100 nm อินซูลินที่เวลา 48 ชั่วโมง จากนั้นสื่อถูกแทนที่ด้วย dmem 2 % ( ปริมาตร / ปริมาตร ) ม้า เซรั่มอีก 24 ชั่วโมง หลังจากที่โปรแกรมการเซลล์ได้ทันทีใช้ประสบการ - การดูดซึมกลูโคส ments .ร้อยละของการเกิด myotube ถูกกำหนดเป็นเปอร์เซ็นต์ของนิวเคลียสอยู่ใน multinucleated myotubes สำปั้นปจิมซา staining การ differentia - ใช้โปรโตคอลผ่านยังผ่านการประเมินของอินซูลิน เซน - sitivity . ในการทดลอง 80 – 90% ของ myoblasts หลอมละลายกลายเป็น myotubes . การทดลองทั้งหมด จำนวนเซลล์จาก PAS - เซจแปด หรือน้อยกว่า