2.3. In vitro antifungal assaysIn o

2.3. In vitro antifungal assays
In order to evaluate the inhibitory effects of extracts on in-vitro growth of A. alternata, each filtrate was poured onto 0.1  Czapek Dox solid medium (Czapek Dox Broth 3.4 g L1, Agar 15 g L1), to reach the final concentrations of 5, 10 and 25 mg mL1, into Petri dishes (3 cm diameter).

A fungal plug (0.5 cm diameter) from a Czapek fungal growing sub-culture was placed upside down on the centre of each plate.

Non-amended plates were used as controls.

Plates were inoculated in triplicate and incubated in the dark at 25
C.

The radius of each colony was measured when the fungi reached the edge of the control plates.

Fungal growth under treatments was expressed as a percentage with respect to that observed in untreated control plates, calculated with the formula: Fungal growth % ¼ 100  [radius on the treatment/radius on thecontrol].

The effects of extracts on A. alternata conidial germination were assessed by a liquid microculture method. Each filter-sterilized extract was diluted into 0.1  Czapek Dox Broth (3.4 g L1) to reach the final concentrations of 5, 10 and 25 mg mL1; 100 mL of these suspensions were then pipetted in each well (96-well microplate) for three replications.

Non-amended Czapek Dox Broth was used in untreated control wells. Afterwards, 10 mL ofconidial suspension (1  105 conidia mL1) were inoculated into all the wells.

After 24 h-incubation at 25
C, at least 100 spores were observed microscopically to determine the germination rate.

Conidia germination under treatments was expressed as a percentage of that observed in untreated control wells, calculated with the formula: Germinated conidia % ¼ 100  [germination rate on the treatment/germination rate on the control].

The experiments were performed twice.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. ในหลอดทดลองเชื้อรา assaysเพื่อประเมินผลยับยั้งของสารสกัดใน A. alternata เจริญในหลอดทดลอง แต่ละฟาร์มถูกเทลง 0.1 Czapek Dox แข็งปานกลาง (Czapek Dox ซุป 3.4 g L 1 วุ้น 15 กรัม L 1), ถึงความเข้มข้นสุดท้ายของ 5, 10 และ 25 มก. mL 1 ลงในอาหารเพาะ (เส้นผ่าศูนย์กลาง 3 ซม.) ปลั๊กแบบเชื้อรา (เส้นผ่าศูนย์กลาง 0.5 cm) จาก Czapek เชื้อราเจริญเติบโตย่อยวัฒนธรรมถูกวางลงบนกึ่งกลางของแต่ละจานคว่ำ แผ่นแก้ไขไม่ถูกใช้เป็นตัวควบคุมแผ่นถูก inoculated ตสแควร์ และรับการกกในมืดที่ 25 c รัศมีของแต่ละโคโลนีซึ่งวัดได้เมื่อเชื้อขอบของแผ่นควบคุม เติบโตของเชื้อรารักษาถูกแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ตามที่สังเกตในจานควบคุมบำบัด สูตรคำนวณ: เชื้อราเจริญเติบโต% ¼ 100 [รัศมีในการรักษาเทียบรัศมีบนควบคุม]ผลของสารสกัดในการงอก conidial A. alternata ถูกประเมิน โดยวิธีการของเหลว microculture สารสกัดแต่ละกรองฆ่าเชื้อถูกเจือจางลง 0.1 Czapek Dox ซุป (3.4 g L 1) ถึงความเข้มข้นสุดท้ายของ 5, 10 และ 25 มก. mL 1 100 มล.ของสารแขวนลอยเหล่านี้ได้แล้ว pipetted ในแต่ละดี (96 หลุม microplate) สำหรับระยะที่สาม แก้ไขไม่ใช่ซุป Dox Czapek ถูกใช้ในบ่อบำบัดควบคุม หลังจากนั้น ระงับ ofconidial 10 mL (1 105 conidia mL 1) ได้ inoculated ลงหลุมทั้งหมด หลังจาก 24 ชม.บ่มที่ 25 C สปอร์น้อย 100 ถูกตั้งข้อสังเกตความเพื่อกำหนดอัตราการงอก การงอกของ conidia ภายใต้รักษาถูกแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของที่พบในบ่อบำบัดควบคุม คำนวณ ด้วยสูตร: เปลือกงอก conidia % ¼ 100 [อัตราการงอกราคารักษา/การงอกการควบคุม] การทดลองดำเนินการสองครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ในการตรวจเชื้อราหลอดทดลอง
เพื่อประเมินผลกระทบต่อการยับยั้งของสารสกัดในหลอดทดลองการเจริญเติบโตของเอ alternata แต่ละกรองถูกเทลงบน 0.1? Czapek Dox สื่อที่เป็นของแข็ง (Czapek Dox น้ำซุป 3.4 กรัม L? 1 วุ้น 15 กรัม L? 1) ไปถึงความเข้มข้นสุดท้ายของ 5, 10 และ 25 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 ลงไปในจานเลี้ยงเชื้อ (3 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง).

เสียบเชื้อรา (0.5 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง) จากเชื้อรา Czapek การเจริญเติบโตของวัฒนธรรมย่อยถูกนำมาวางคว่ำลงบนศูนย์กลางของแต่ละจาน.

ไม่แก้ไขเพิ่มเติมแผ่นถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม.

แผ่นถูกเชื้อในเพิ่มขึ้นสามเท่าและบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส.

รัศมี อาณานิคมของแต่ละวัดเมื่อเชื้อราถึงขอบของแผ่นควบคุม.

เจริญเติบโตของเชื้อราภายใต้การรักษาได้รับการแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ส่วนที่เกี่ยวกับที่พบในแผ่นควบคุมได้รับการรักษาด้วยการคำนวณสูตร: เจริญเติบโตของเชื้อรา% ¼ 100? [รัศมีเกี่ยวกับการรักษา / รัศมีใน thecontrol].

ผลของสารสกัดในเอ alternata งอกเชื้อราได้รับการประเมินโดยวิธี microculture ของเหลว สารสกัดแต่ละกรองฆ่าเชื้อได้รับการปรับลดลงไป 0.1? Czapek Dox น้ำซุป (3.4 กรัม 1 ลิตร?) ไปถึงความเข้มข้นสุดท้ายของ 5, 10 และ 25 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1; 100 มลสารแขวนลอยเหล่านี้ถูกปิเปตแล้วในแต่ละดี (96 หลุม microplate) สามซ้ำ.

ไม่แก้ไขเพิ่มเติม Czapek Dox น้ำซุปที่ใช้ในการควบคุมหลุมได้รับการรักษา หลังจากนั้น 10 มลระงับ ofconidial (1? 105 สปอร์มล? 1) ถูกเชื้อเข้ามาในบ่อทุกบ่อ.

หลังจาก 24 ชั่วโมงบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสอย่างน้อย 100 สปอร์ถูกตั้งข้อสังเกตกล้องจุลทรรศน์ในการกำหนดอัตราการงอก.

สปอร์งอกภายใต้การรักษาคือ แสดงเป็นร้อยละของที่พบในหลุมควบคุมได้รับการรักษาที่คำนวณด้วยสูตร: สปอร์งอก% ¼ 100? [อัตราการงอกเกี่ยวกับการรักษาอัตราการ / ความงอกบนตัวควบคุม].

การทดลองครั้งที่สอง