3.3. Production of sheep α-TTP monoclonal antibodies
In order to generate monoclonal antibodies that recognize sheep α-TTP, we prepared polypeptides of residues 1–16 (N1) and 266–282 (N2) of sheep α-TTP and used them as immunogens. Altogether, 65 hybridoma clones were obtained after screening by ELISA and 7 positive clones were selected by Western-blot assay, all of which detected a single, ~32 kDa band. The best 5 positive clones were then subcloned by limiting dilution. After confirmed by ELISA, twenty positive clones were screened andfive of them were selected based on the results of Western-blot and immunohistochemical assays. These five clones were named S12, S13, S15, S16 and S17 and among them, S16 had the best ability to recognize sheep α-TTP. Antibodies produced by S16 were then purified over affinity columns and their reactivity was confirmed by different assays including ELISA, Western-blot (Fig. 3) and immunohistochemistry (Fig. 4A). As anticipated, the results showed that the antibodies obtained from S16 were effective in recognizing sheep α-TTP.
To precisely identify the epitope recognized by the S16 monoclonal antibody, we performed Western-blot assay using the polypeptides N1 and N2, respectively. According to the detection of immunoreactivities, S16 did not recognize a residues 1–16 (N1), but reacted only with a residues 266–282 (N2) of sheep α-TTP. Therefore, S16 could recognize an epitope located within the 266–282 a residues of sheep α-TTP.
3.3 . การผลิตแอลฟาแกะ TTP โมโนโคลนอลแอนติบอดี
เพื่อที่จะสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำแกะแอลฟา TTP เราเตรียมโปรตีนตกค้าง 1 16 – ( N1 ) และ 266 – 282 ( N2 ) แกะแอลฟา TTP และใช้พวกเขาเป็นทดลอง . ทั้งหมด 65 ไฮบริโดมาโคลนหลังจากได้รับการตรวจด้วยวิธี ELISA และ 7 โคลนบวกจำนวน Western blot assay ซึ่งทั้งหมดพบเดี่ยว~ 32 แยกวง ที่ดีที่สุด 5 บวกโคลนแล้วของการจํากัดการเจือจาง หลังจากได้รับการยืนยันโดยวิธี ELISA เป็นบวกยี่สิบพันธุ์มี andfive ของพวกเขาได้ถูกเลือกขึ้นอยู่กับผลของ blot ตะวันตกและในเลือด . เหล่านี้ห้าโคลนชื่อ s12 s13 S15 , , , และ s16 s17 และในหมู่พวกเขา s16 มีความสามารถที่ดีที่สุดที่จะยอมรับแกะแอลฟา TTP .แอนติบอดีที่ผลิตโดย s16 นั้นบริสุทธิ์กว่าคอลัมน์กลุ่มปฏิกิริยาของพวกเขาได้รับการยืนยันโดยวิธีต่าง ๆ รวมทั้งวิธี Western blot , ( รูปที่ 3 ) และหลอด ( ภาพที่ 4 ) ตามที่คาดการณ์ไว้ พบว่า แอนติบอดีที่ได้จาก s16 มีประสิทธิภาพในการตระหนักถึงแอลฟาแกะ TTP .
แน่นอนระบุไวรัสที่รู้จัก โดย s16 โมโนโคลนอลแอนติบอดี ,เราทำ Western blot assay โดยใช้ชนิด N1 และ N2 ) ผลการ immunoreactivities s16 , ไม่รับรู้ตกค้าง 1 16 – ( N1 ) แต่ทำปฏิกิริยาเฉพาะกับสารตกค้าง 266 – 282 ( N2 ) ของแอลฟาแกะ TTP . ดังนั้น s16 สามารถรู้จักไวรัสตั้งอยู่ 266 – 282 เป็นสารตกค้างของแอลฟาแกะ TTP .
การแปล กรุณารอสักครู่..