Antibody production. TSWV isolate K

Antibody production.
TSWV isolate KP (TSWV-KP) from
pepper was propagated in Nicotiana rustica after mechanical
inoculation with TSWV-KP particles (Kim et al., 2004).
For TSWV
purification, the systemic leaves of the inoculated N. tabacum
plants were harvested after 14 days inoculation and the leaf
tissues were used for TSWV purification, as described previously
(Joubert et al., 1974).
The purified TSWV-KP particles
were verified using SDS-PAGE analysis, according to standard
protocol (Sambrook et al., 1989).
Polyclonal antibodies were
produced in rabbits by immunization with the purified TSWV-KP
conjugates.
For the first immunization, the immunogen
(0.1 mg) was suspended in 2 ml of 0.5× phosphate buffer saline
(PBS), emulsified with 2 ml Freund’s complete adjuvant and
injected subcutaneously in two rabbits for each immunogen.
Four booster dose immunizations were given at monthly
intervals after the first immunization using 0.1 mg TSWV virions
in 2 ml of 0.5× PBS buffer emulsified with Freund’s incomplete
adjuvant. About 10–12 ml serum was collected from the
marginal ear vein, 14 days after each booster.
Sera that exhibited
a strong immunogenic response were further purified
by affinity chromatography using ProteinA affinity chromatography
columns and dialyzed against 10 mM sodium phosphate
buffer (pH 7.2), according to manufacturer’s instructions (PALL,
USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การผลิตแอนติบอดี TSWV แยก KP (TSWV-KP) จากพริกไทยถูกเผยแพร่ใน Nicotiana อลมาจากเครื่องกลinoculation ด้วยอนุภาค TSWV-KP (Kim et al., 2004)สำหรับ TSWVฟอก ใบไม้ระบบ tabacum ตอนเหนือ inoculatedพืชเก็บเกี่ยวผลผลิตหลังจาก 14 วัน inoculation และใบเนื้อเยื่อใช้สำหรับฟอก TSWV ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Joubert et al., 1974) อนุภาค TSWV KP บริสุทธิ์ถูกตรวจสอบโดยใช้การวิเคราะห์องค์กรหน้า ตามมาตรฐานโพรโทคอล (Sambrook et al., 1989) แอนตี้ polyclonal ได้ผลิต โดยการรับวัคซีนกับบริสุทธิ์ TSWV KP ในกระต่ายconjugates การรับวัคซีนแรก immunogen(0.1 mg) ถูกหยุดชั่วคราวใน 2 ml ของน้ำเกลือ 0.5 ×ฟอสเฟตบัฟเฟอร์(PBS), emulsified กับ 2 ml ของ Freund ประเมินสมบูรณ์ และฉีด subcutaneously ในกระต่ายที่สองสำหรับแต่ละ immunogenImmunizations บูสเตอร์ยาสี่ได้รับในเดือนช่วงหลังรับวัคซีนครั้งแรกที่ใช้ virions TSWV 0.1 มิลลิกรัมใน 2 ml ของ 0.5 × PBS emulsified กับ Freund บัฟเฟอร์ของสมบูรณ์ประเมิน เกี่ยวกับ 10 – 12 ml เซรั่มถูกรวบรวมจากการหลอดเลือดดำหูกำไร 14 วันหลังจากแต่ละบูสเตอร์ นโยบายที่จัดแสดงการตอบสนอง immunogenic ที่แข็งแกร่งได้บริสุทธิ์เพิ่มเติมโดยใช้ ProteinA ความสัมพันธ์ chromatography chromatography ความสัมพันธ์คอลัมน์ และ dialyzed กับฟอสเฟตโซเดียม 10 มม.บัฟเฟอร์ (pH 7.2), ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (แถบวายสหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การผลิตแอนติบอดี.
TSWV แยก KP (TSWV-KP)
จากพริกถูกแพร่กระจายในRustica Nicotiana
กลหลังจากการฉีดวัคซีนที่มีอนุภาคTSWV-KP (Kim et al., 2004).
สำหรับ TSWV
บริสุทธิ์ใบระบบของเชื้อเอ็น tabacum
พืช การเก็บเกี่ยว 14
วันหลังจากการฉีดวัคซีนและใบเนื้อเยื่อถูกนำมาใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์TSWV ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
(ชูแบร์ et al., 1974).
บริสุทธิ์อนุภาค TSWV-KP
ได้รับการยืนยันโดยใช้การวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE
ตามมาตรฐานโปรโตคอล(Sambrook et al, , 1989).
แอนติบอดีโพลีโคลนถูกผลิตในกระต่ายโดยการฉีดวัคซีนกับบริสุทธิ์ TSWV-KP conjugates. สำหรับการฉีดวัคซีนครั้งแรกแอนติเจน(0.1 มก.) ที่ถูกระงับใน 2 มิลลิลิตร 0.5 ×น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์(พีบีเอส) emulsified 2 มล. เสริมสมบูรณ์ Freund และฉีดเข้าใต้ผิวหนังในสองกระต่ายสำหรับแอนติเจนแต่ละ. สี่สนับสนุนการฉีดวัคซีนยาที่ได้รับรายเดือนช่วงเวลาหลังจากการฉีดวัคซีนครั้งแรกที่ใช้ 0.1 มิลลิกรัม virions TSWV 2 มล. 0.5 ×พีบีเอสบัฟเฟอร์ emulsified กับที่ไม่สมบูรณ์ของ Freund เสริม ประมาณ 10-12 มล. ซีรั่มที่ถูกเก็บรวบรวมจากหลอดเลือดดำหูขอบ14 วันหลังจากที่สนับสนุนแต่ละ. ซีรั่มที่แสดงการตอบสนองภูมิคุ้มกันที่แข็งแกร่งบริสุทธิ์ต่อไปโดยใช้ความสัมพันธ์โคโคสัมพันธ์ที่ใกล้ชิดProteinA คอลัมน์และ dialyzed กับ 10 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 7.2) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (พอล, สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผลิตแอนติบอดี
tswv แยก KP ( tswv-kp ) จาก
พริกไทยเป็นจำนวนขนะบ้านหลังกล
การอนุภาค tswv-kp ( Kim et al . , 2004 ) tswv

สำหรับฟอกใบทั่วร่างกายของเชื้อเอ็นทาบาคัม
พืชเก็บเกี่ยวหลังจาก 14 วัน การฉีดวัคซีนและใบ
เนื้อเยื่อถูกใช้ tswv ฟอก ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
( จูแบร์ต et al . , 1974 )
และ tswv-kp อนุภาค
ถูกตรวจสอบโดยใช้การวิเคราะห์เอนไซม์ตามมาตรฐาน
( sambrook et al . , 1989 )

ใช้แอนติบอดีถูกผลิตในกระต่าย โดยการแยกสารประกอบด้วย tswv-kp
.
สำหรับภูมิคุ้มกันก่อน รวมทั้ง
( 0.1 มิลลิกรัม ถูกพักงาน 2 ml 0.5 ×ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (
( PBS ) ที่ใช้กับ Freund สมบูรณ์เสริมและ
2 มิลลิลิตรฉีด subcutaneously ในกระต่าย 2 ตัวสำหรับแต่ละอิม .
4 Booster ปริมาณภูมิคุ้มกันที่ได้รับในช่วงเดือนแรกหลังการใช้

tswv 0.1 มิลลิกรัมไวรัส 2 ml 0.5 × PBS buffer ที่ใช้กับ Freund เป็นสมบูรณ์
ผู้ช่วย ประมาณ 10 – 12 ml เซรั่ม รวบรวมจาก
หลอดเลือดดำหูขอบ 14 วันหลังจากที่แต่ละบูสเตอร์

( ที่แสดงแข็งแรง immunogenic ตอบสนองได้โดยโครมาโตกราฟีสามารถใช้โปรตีนบริสุทธิ์

ขี้รังแคคอลัมน์และผ่านกับ 10 mm
โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ) , ตามคําแนะนําของผู้ผลิต ( พอล
, USA )