2. Material and methods2.1. C. diff

2. Material and methods
2.1. C. difficile strains and spore preparation
Two C. difficile strains were used in this study. C. difficile M120,
kindly provided by Dr. Trevor Lawley (Wellcome Trust Sanger
Institute, Hinxton, UK) is a PCR-ribotype 78 strain often detected in
farm animals, and even more frequently found in CA-CDI (Goorhuis
et al., 2008). C. difficile R20291, kindly provided by Dr. Nigel Minton
(University of Nottingham, UK), is a ribotype 27 strain that is positive
for tcdA (tcdAþ), tcdB (tcdBþ) and cdtB (cdtBþ). C. difficile strains
were plated and incubated on 1.5% tryptone-yeast extract (TY) agar
(Difco, BD Diagnostic Systems, Sparks, MD) for 7 days at 37 C under
anaerobic conditions (5% H2, 5% CO2 and 90% N2) in a ShelLab
Bactron III-2 chamber (Sheldon Manufacturing, Inc., Cornelius, OR).
Plates were flooded with sterile distilled water to resuspend and
collect sporulating cells which were washed by repeated centrifugation
(10 times, 14000 g, 10 min) using sterile distilled water. Free
spores were separated by density gradient centrifugation (14000 g,
45 min) using 50% Nycodenz (SigmaeAldrich Corp., St. Louis, MO).
After washing five times with PBS to eliminate Nycodenz, spores
were enumerated using a microscope counting chamber. Spore
suspensions of both strains (5  109 spores/ml, >99% free of vegetative
cells, sporulating cells and cell debris) were prepared in
phosphate buffer saline (PBS, 8 g/L NaCl, 0.2 g/L KCl, 1.44 g/L

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. C. difficile สายพันธุ์และเตรียมสปอร์สายพันธุ์ 2 C. difficile ถูกใช้ในการศึกษานี้ C. difficile M120โดยดร.เทรเวอร์ Lawley (Wellcome ใจ Sanger กรุณาสถาบัน Hinxton, UK) จะต้องใช้ PCR-ribotype 78 มักพบในฟาร์มสัตว์ และพบได้บ่อยใน CA-CDI (Goorhuisร้อยเอ็ด al., 2008) C. difficile R20291 ละเมียดละไมโดย Dr. Nigel Minton(มหาวิทยาลัยนอตติงแฮม UK), ไม่ต้องใช้ ribotype 27 ที่เป็นบวกtcdA (tcdAþ), tcdB (tcdBþ) และ cdtB (cdtBþ) สายพันธุ์ C. difficileมี agar ชุบ และ incubated บน 1.5% tryptone-ยีสต์สกัด (TY)(Difco, BD ระบบวินิจฉัย สปาร์ค MD) สำหรับวันที่ 37 C ภายใต้ไม่ใช้เงื่อนไข (5% H2, 5% CO2 และ 90% N2) การ ShelLabห้อง 2 Bactron III (ผลิตภัณฑ์เชลด้อน Inc., Cornelius, OR)แผ่นถูกน้ำท่วม ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ resuspend และเก็บเซลล์ sporulating ซึ่งถูกล้าง โดย centrifugation ซ้ำ(ครั้งที่ 10, 14000 กรัม 10 นาที) ใช้ฆ่าเชื้อน้ำที่กลั่น ฟรีเพาะเฟิร์นถูกคั่น ด้วย centrifugation ไล่ระดับความหนาแน่น (14000 กรัม45 นาที) โดยใช้ 50% Nycodenz (SigmaeAldrich Corp., St. Louis, MO)หลังจากซักห้าครั้งกับ PBS เพื่อกำจัด Nycodenz เพาะเฟิร์นได้ระบุใช้กล้องจุลทรรศน์นับหอการค้า สปอร์บริการของทั้งสองสายพันธุ์ (เพาะเฟิร์น 5 109/ml, > 99% ฟรีของผักเรื้อรังเซลล์ เซลล์ sporulating และเศษเซลล์) ถูกเตรียมไว้ในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS, 8 g/L NaCl, 0.2 g/L KCl, 1.44 g/L

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 C. difficile
สายพันธุ์และการจัดทำสปอร์สองC. difficile สายพันธุ์ที่ถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ C. difficile M120,
ให้ความกรุณาโดยดร. เทรเวอร์ Lawley (Wellcome
ไว้ใจแซงเจอร์สถาบันHinxton สหราชอาณาจักร) เป็น PCR-ribotype 78
สายพันธุ์ที่ตรวจพบมักจะอยู่ในฟาร์มเลี้ยงสัตว์และแม้กระทั่งพบบ่อยครั้งมากขึ้นในCA-CDI (Goorhuis
et al., 2008) C. difficile R20291 ให้ความกรุณาโดยดร. ไนเจลมินตัน
(มหาวิทยาลัยนอตติงแฮมสหราชอาณาจักร) เป็นสายพันธุ์ ribotype 27
ที่เป็นบวกสำหรับtcdA (tcdAþ) tcdB (tcdBþ) และ cdtB (cdtBþ) C. difficile
สายพันธุ์ที่ได้รับการชุบและบ่มใน1.5% สารสกัดจากยีสต์ tryptone (TY) วุ้น
(Difco, BD วินิจฉัยระบบไฟ, MD) เป็นเวลา 7 วันที่ 37
องศาเซลเซียสภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน(H2 5% CO2 5% และ 90 % N2) ใน ShelLab
Bactron III-2 ห้อง (เชลดอนผลิตอิงค์คอร์นีเลีย, OR).
แผ่นถูกน้ำท่วมด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อเพื่อ resuspend
และเก็บเซลล์sporulating ที่ถูกล้างด้วยซ้ำหมุนเหวี่ยง
(10 ครั้ง 14000 กรัม 10 นาที) โดยใช้น้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ ฟรีสปอร์ที่ถูกแยกจากกันโดยการปั่นแยกลาดหนาแน่น (14000 กรัม 45 นาที) โดยใช้ 50% Nycodenz (SigmaeAldrich คอร์ปเซนต์หลุยส์). หลังจากล้างห้าครั้งกับพีบีเอสที่จะกำจัด Nycodenz สปอร์ที่ถูกระบุโดยใช้กล้องจุลทรรศน์นับห้อง สปอร์แขวนลอยของทั้งสองสายพันธุ์ (5? 109 สปอร์ / ml> 99% ฟรีพืชเซลล์sporulating และเศษเซลล์) ได้จัดทำขึ้นน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์(พีบีเอส, 8 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 0.2 กรัม / ลิตร KCl, 1.44 กรัม / L

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . C . difficile สายพันธุ์และ
2 C . difficile เตรียมสปอร์สายพันธุ์ ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ C .
m120 difficile , กรุณาให้โดย ดร. เทรเวอร์ที่ ( Wellcome Trust Sanger
สถาบัน hinxton , UK ) เป็นเทคนิคที่ ribotype 78 สายพันธุ์มักพบใน
ฟาร์มสัตว์ และยิ่งพบบ่อยใน ca-cdi ( goorhuis
et al . , 2008 ) C . difficile r20291 กรุณาให้โดย ดร.ไนเจล Minton
( มหาวิทยาลัยน็อตติงแฮม , UK ) เป็น ribotype 27 สายพันธุ์ที่เป็นบวก
สำหรับ tcda ( tcda þ ) tcdb ( tcdb þ ) และ cdtb ( cdtb þ ) C . difficile สายพันธุ์
ถูกชุบและบ่มที่ 1.5% ทริพโทนยีสต์สกัด ( ไท ) วุ้น
( difco BD การวินิจฉัยระบบ , ประกายไฟ , MD ) เป็นเวลา 7 วัน ที่อุณหภูมิ 37  C ภายใต้สภาวะไร้อากาศ (
5 % H2 , CO2 5 % และ 90 % N2 ) ใน shellab
bactron iii-2 แชมเบอร์ ( เชลด้อน ผลิต ,อิงค์ , คอร์เนลิอุสหรือ ) .
แผ่นเต็มไปด้วยเป็นหมันน้ำกลั่นเพื่อ resuspend
เก็บเซลล์ที่ผลิตสปอร์และล้างด้วยซ้ำ 3
( 10 ครั้ง 10 , 000 G 10 นาที ) ใช้ฆ่าเชื้อน้ำกลั่น สปอร์ฟรี
แยกกันโดยความหนาแน่นของการปั่น ( 14 , 000 G ,
45 นาที ) การใช้ 50% nycodenz ( sigmaealdrich Corp . , St . Louis , MO )
.หลังจากซักห้าครั้งกับ PBS เพื่อขจัด nycodenz สปอร์
ถูกระบุการใช้กล้องจุลทรรศน์นับห้อง . สปอร์
ช่วงล่างของทั้งสองสายพันธุ์ ( 5  109 สปอร์ / มิลลิลิตร > 99% ฟรีของพืช
เซลล์ เซลล์ และเซลล์ผลิตสปอร์ debris ) เตรียมในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (
( PBS , 8 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 0.2 กรัม / ลิตร KCl 1.44 กรัมต่อลิตร