DNA from feces was extracted using

DNA from feces was extracted using the QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen). We used 200 ll of feces RNALater slurry per extraction and followed the protocol from the manufacturer with the exception of the following steps: (1) we initially incubated the sample in buffer ASL for 30 min and (2) the amount of buffer AE used for the final elution was 75 ll. Extractions from blood samples were performed using the QIAmp DNA Micro Kit (Qiagen), following the manufacturer’s protocol for dried blood spots. To extract DNA from hair samples, we used the QIAmp DNA Investigator Kit (Qiagen). We used 2–3 hairs with bulbs per sample and followed the manufacturer’s suggested protocol.
For all but one extraction, we performed an initial long range
PCR amplification targeting a mitochondrial fragment of
6000 bp using the KOD Xtreme™ Hot Start DNA Polymerase⁄ kit. The 25 ll long-range PCR reactions incorporated 12.5 ll of 2 Xtreme Buffer, 5 ll of dNTPs (2 mM each), 0.5 ll each of the heavy and light strand primers (10 lM), 0.5 units of KOD Xtreme™ Hot

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอจากอุจจาระถูกสกัดโดยใช้ชุดอุปกรณ์ขนาดเล็กเก้าอี้ของดีเอ็นเอ QIAamp (Qiagen) เราใช้ 200 จะอุจจาระน้ำ RNALater ต่อแยก และตามโพรโทคอลจากผู้ผลิตยกเว้นขั้นตอนต่อไปนี้: (1) เราเริ่ม incubated อย่างในบัฟเฟอร์ ASL ใน 30 นาที และ (2)จำนวนบัฟเฟอร์ใช้ final elution AE เป็น 75 จะสกัดจากเลือดตัวอย่างที่ดำเนินการโดยใช้ชุดดีเอ็นเอไมโคร QIAmp (Qiagen)ต่อของโพรโทคอลสำหรับจุดเลือดที่แห้ง สกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างผม เราใช้ชุดตรวจสอบ DNA QIAmp (Qiagen) เราใช้เส้นขน 2-3 หลอดต่อตัวอย่าง และตามโพรโทคอลแนะนำของผู้ผลิตทั้งหมดแต่หนึ่งสกัด เราทำระยะยาวเป็นต้นAmplification PCR ส่วน mitochondrial ของการกำหนดเป้าหมาย ใช้ชุดโฮโปรด™ร้อนเริ่มต้นดีเอ็นเอ Polymerase⁄ bp 6000 ที่ 25 จะพิสัย PCR ปฏิกิริยารวม 12.5 จะบัฟเฟอร์ Xtreme 2, 5 ll ของ dNTPs (2 มิลลิเมตรแต่ละ), 0.5 จะทุกของหนักและไฟสแตรนไพรเมอร์ (10 lM), 0.5 หน่วยโปรดโฮ™ร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอจากอุจจาระที่ถูกสกัดโดยใช้ดีเอ็นเอ QIAamp สตูลมินิ Kit (Qiagen) เราใช้ 200 LL ของอุจจาระ RNAlater ผสมต่อการสกัดและการปฏิบัติตามโปรโตคอลจากผู้ผลิตที่มีข้อยกเว้นของขั้นตอนต่อไปนี้ (1) เราเริ่มบ่มตัวอย่างในบัฟเฟอร์ ASL เวลา 30 นาทีและ (2) ปริมาณของบัฟเฟอร์ AE ที่ใช้สำหรับ ไฟชะ NAL ใน 75 LL การสกัดสารจากตัวอย่างเลือดถูกดำเนินการโดยใช้ดีเอ็นเอไมโคร QIAmp Kit (Qiagen) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิตสำหรับจุดเลือดแห้ง ในการสกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างผมเราใช้ดีเอ็นเอ QIAmp สืบสวน Kit (Qiagen) เราใช้ 2-3 ขนร่วมกับหลอดต่อตัวอย่างและตามโปรโตคอลที่ผู้ผลิตเสนอ.
สำหรับทุกคน แต่หนึ่งในการสกัดที่เราดำเนินการเริ่มต้นในระยะยาว
ไอออนบวก PCR Ampli สายการกำหนดเป้าหมายส่วนยลของ
6000 bp ใช้ KOD Xtreme ™เริ่มร้อนดีเอ็นเอชุด Polymerase/ 25 จะระยะยาวปฏิกิริยา PCR นิติบุคคลที่จัดตั้งขึ้น 12.5 LL 2 Xtreme Buffer, 5 LL ของ dNTPs (2 มิลลิแต่ละ), 0.5 LL แต่ละหนักและไพรสาระแสง (10 LM) 0.5 หน่วย KOD Xtreme ™ร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอจากอุจจาระถูกสกัดโดยใช้ qiaamp ดีเอ็นเออุจจาระ Mini Kit ( เพิ่ม ) เราใช้ 200 จะอึ rnalater ที่มีต่อการสกัดและตามขั้นตอนจากผู้ผลิตที่มีข้อยกเว้นของขั้นตอนต่อไปนี้ : ( 1 ) เราเริ่มบ่มตัวอย่างในบัฟเฟอร์ ASL สำหรับ 30 นาที และ ( 2 ) ปริมาณของบัฟเฟอร์ที่ใช้ระบบเอจึงได้มา 75 จะสกัดจากเลือด การใช้ qiamp ดีเอ็นเอไมโครชุด ( เพิ่ม ) ต่อไปนี้ของผู้ผลิตระบบจุดเลือดแห้ง การสกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างผมเราใช้ qiamp ดีเอ็นเอนักสืบชุด ( เพิ่ม ) เราใช้ 2 - 3 เส้น ด้วยหลอดไฟต่อ ตัวอย่าง และ ตามผู้ผลิตแนะนำโปรโตคอล .
ทั้งหมดแต่หนึ่งแยก เราทำการ
ช่วงเริ่มต้นโดยการ ampli จึงเล็งตัดส่วนของ
6 , 000 BP ใช้รหัส โปรด™ร้อนเริ่มต้น DNA polymerase ⁄ kit 25 จะระยะยาว PCR ปฏิกิริยารวม 12.5 จะ 2 , บัฟเฟอร์ , 5 จะ dntps ( 2 มม. แต่ละ ) , 0.5 จะทั้งหนักและเบา ชายหาด ไพรเมอร์ ( 10 LM ) 0.5 หน่วยของรหัส โปรด™ร้อน