2.1. The overexpression of heterolo

2.1. The overexpression of heterologous xylose reductase, xylitol de hydrogenase, and endogenous xylulokinase are essential to permit Y lipolytica to grow on xylose Recently, Stephanopoulos and Tai (2013) patented an en gineered strain of Y lipolytica which overexpresses ssxR and ssXDH from S. stipitis under the control of the promoters TEFin and hp4 respectively. In this work, we constructed a strain that over expressed these genes under the control of the TEF promoter. The expression of both genes was checked by qPCR (Supplementary 1). Like the previously patented strain, our modified strain was unable to grow in xylose (Fig. 2). However, the patented strain was able to slowly utilize xylose following an adaptation of the strain using serial dilutions, as previously reported for S. cerevisiae Stephanopoulos and Tai, 2013). Unfortunately. the adapted strain had a time of 25 h, which strongly limits its industrial doubling application. In our hands, and probably due to the different strengths of the promoters, the strain that overexpressed both genes was unable to grow even after we attempted a similar adaptation. Likewise, strains Polt (prototrophic strain of Polg) and W29 (the parent of both Pold and Polg) were unable to grow with xylose as the sole carbon source (Fig. 2) of the first genes re- In order to study the transcription level ylxDH (YA quired for assimilating xylose, ylXR (YALIODO7634), analysis of LI0E12463) and yixK (YALIF10923), we performed qPCR RNA extracted from wild type Y lipolytica grown either in glucose or in xylose containing media. The highest transcription level was found for ylXR, followed by ylXDH (Fig. 3), which seems to agree

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1. การแสดงออกของสาร heterologous ไซด์ ไซลิทอลเดอ hydrogenase และ xylulokinase ภายนอกมีความจำเป็นอนุญาตให้ Y lipolytica เติบโตบนสารเมื่อเร็ว ๆ นี้ Stephanopoulos และไท (2013) จดสิทธิบัตรเป็นสายพันธุ์ gineered en lipolytica Y ซึ่ง overexpresses ssxR และ ssXDH จาก S. stipitis ภายใต้การควบคุมของก่อ TEFin และ hp4 ตามลำดับ ในงานนี้ เราสร้างสายพันธุ์ที่ผ่านแสดงยีนเหล่านี้ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ใน TEF การแสดงออกของยีนทั้งสองถูกตรวจสอบ โดย qPCR (เสริม 1) เช่นสายพันธุ์จดสิทธิบัตรก่อนหน้านี้ สายพันธุ์ของเราแก้ไขไม่สามารถเติบโตในสาร (2 รูป) อย่างไรก็ตาม จดสิทธิบัตรสายพันธุ์ก็สามารถค่อย ๆ ใช้สารต่อการปรับตัวของสายพันธุ์ที่ใช้เจือจาง serial ตามรายงานสำหรับ S. cerevisiae Stephanopoulos และใต้ 2013) แต่น่าเสียดาย สายพันธุ์ดัดแปลงได้เวลาของ h 25 ซึ่งเป็นข้อจำกัดของอุตสาหกรรมเพิ่มขึ้นเท่าขอ ในมือของเรา และอาจจะเนื่อง จากจุดแข็งที่แตกต่างกันก่อ สายพันธุ์ที่ overexpressed ยีนทั้งสองไม่สามารถเติบโตแม้ว่าเราพยายามปรับตัวที่คล้ายกัน ทำนองเดียวกัน สายพันธุ์ Polt (prototrophic สายพันธุ์อยู่) และ W29 (แม่ของ Pold และอยู่) ไม่สามารถเติบโต ด้วยสารเป็นแหล่งคาร์บอนแต่เพียงผู้เดียว (รูป 2) ของยีนแรก re-เราดำเนินการ qPCR RNA ที่สกัดจากป่าชนิด Y lipolytica ปลูก ในกลูโคส หรือสารที่ประกอบด้วยสื่อเพื่อศึกษา ylxDH ระดับการถอดรหัส (หญ้ากว้างขวางสะดวกสบายสำหรับ assimilating xylose, ylXR (YALIODO7634) การวิเคราะห์ของ LI0E12463) และ yixK (YALIF10923), พบถอดรหัสระดับสูงสุดสำหรับ ylXR ตาม ด้วย ylXDH (3 รูป), ซึ่งดูเหมือนจะยอมรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 แสดงออกของ reductase heterologous ไซโลส, ไซลิทอลเดอ hydrogenase และ xylulokinase ภายนอกมีความจำเป็นที่จะอนุญาตให้ Y lipolytica ที่จะเติบโตในไซโลสเมื่อเร็ว ๆ นี้และ Stephanopoulos ไท (2013) การจดสิทธิบัตรห้องน้ำ gineered ความเครียดจาก Y lipolytica ซึ่ง overexpresses ssxR และ ssXDH จากเอส stipitis ภายใต้ การควบคุมของโปรโมเตอร์ TEFin และ HP4 ตามลำดับ ในงานนี้เราสร้างสายพันธุ์ว่ากว่าแสดงยีนเหล่านี้อยู่ภายใต้การควบคุมของผู้ก่อการ TEF ที่ การแสดงออกของยีนทั้งสองได้รับการตรวจสอบโดย qPCR (เพิ่มเติม 1) เช่นเดียวกับสายพันธุ์ที่จดสิทธิบัตรไว้ก่อนหน้านี้มีการปรับเปลี่ยนสายพันธุ์ของเราไม่สามารถที่จะเติบโตในไซโล (รูปที่. 2) แต่สายพันธุ์ที่จดสิทธิบัตรก็สามารถที่จะใช้ประโยชน์จากไซโลช้าต่อไปนี้การปรับตัวของสายพันธุ์โดยใช้เจือจางอนุกรมการตามที่รายงานก่อนหน้านี้สำหรับ S. cerevisiae Stephanopoulos และใต้, 2013) น่าเสียดาย. สายพันธุ์ดัดแปลงมีเวลา 25 ชั่วโมงซึ่งขอ จำกัด การประยุกต์ใช้เพิ่มขึ้นของอุตสาหกรรม ในมือของเราและอาจจะเกิดจากการจุดแข็งที่แตกต่างกันของการก่อการความเครียดที่แสดงออกของยีนทั้งสองก็ไม่สามารถที่จะเติบโตมากหลังจากที่เราพยายามปรับตัวที่คล้ายกัน ในทำนองเดียวกันสายพันธุ์ Polt (สายพันธุ์ prototrophic ของ Polg) และ W29 (แม่ของทั้งสอง Pold และ Polg) ที่ไม่สามารถที่จะเติบโตไปพร้อมกับไซโลสเป็นแหล่งคาร์บอน (รูปที่. 2) ของยีนแรกอีกครั้งเพื่อที่จะศึกษาระดับถอดความ ylxDH (YA quired สำหรับการปรับไซโลส, ylXR (YALIODO7634) การวิเคราะห์ LI0E12463) และ yixK (YALIF10923) เราดำเนินการ qPCR RNA สกัดจากป่าประเภท Y lipolytica เติบโตทั้งในกลูโคสหรือไซโลที่มีสื่อ ระดับการถอดความสูงสุดพบ ylXR ตาม ylXDH (รูปที่. 3) ซึ่งดูเหมือนว่าจะเห็นด้วย