Plasmid pGA11 for cell surface disp

Plasmid pGA11 for cell surface display of R. oryzae glucoamylase
was constructed as described previously in Ref. [5]. To amplify
a DNA fragment between glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase
(GAPDH) promoter and GAPDH terminator containing the
coding region of the glucoamylase with the 30 half of a-agglutinin
gene, two primers containing artificial SphI and Sse837 I sites
(underlined) (50-ACATGCATGCACCAGTTCTCACACGGAACA-30 and
50-TCCTGCAGGTCAATCAATGAATCG AAAATG-30) were designed and
a 4.3-kbp fragment was amplified by PCR using Ex Taq polymerase
(TaKaRa). The amplified fragments were digested with the cognate
restriction enzymes and inserted between the SphI and Sse837 I
sites of pAUR101 (TaKaRa) to generate pAU101RGA. To integrate
pAU101RGA into the S. cerevisiae K7 genomic DNA, the plasmid was
digested with StuI to generate a linear DNA fragment. This DNA
fragment was transformed into the strain K7 by the lithium acetate
method following manufacturer’s instructions (TaKaRa). Transformants
were obtained on YPD plates containing 1.0 mg/ml Aureobasidin
A (TaKaRa).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PGA11 plasmid สำหรับเซลล์ผิวแสดงของ glucoamylase R. แห้งระดับต่าง ๆถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในอ้างอิง [5] ขยายส่วนดีเอ็นเอระหว่าง dehydrogenase glyceraldehydes-3-ฟอสเฟต(GAPDH) โปรโมเตอร์และ GAPDH เทอร์มิเนเตอร์ที่ประกอบด้วยการรหัสภูมิภาคของ glucoamylase กับเวลาครึ่งหนึ่งของ a agglutininยีน ไพรเมอร์ทั้งสองประกอบด้วย SphI และ Sse837 เทียมฉันไซต์(ขีดเส้นใต้) (50-ACATGCATGCACCAGTTCTCACACGGAACA-30 และ50-TCCTGCAGGTCAATCAATGAATCG AAAATG-30) ถูกออกแบบ และส่วน 4.3 kbp ถูกขยาย โดย PCR โดยใช้พอลิเมอเรส Ex Taq(TaKaRa) ชิ้นส่วนเอาต์ถูกต้องกับ cognateเอนไซม์จำกัด และแทรกระหว่าง SphI และ Sse837 ฉันเว็บไซต์ของ pAUR101 (TaKaRa) เพื่อสร้าง pAU101RGA การรวมมี plasmid pAU101RGA เข้า S. cerevisiae K7 genomic DNAเจ่ากับ StuI เพื่อสร้างดีเอ็นเอส่วนเชิงเส้น ดีเอ็นเอนี้ส่วนที่เปลี่ยนเป็นพันธุ์ K7 โดย acetate ลิเทียมวิธีตามคำแนะนำของผู้ผลิต (TaKaRa) Transformantsได้รับบนแผ่น YPD ประกอบด้วย 1.0 mg/ml Aureobasidinการ (TaKaRa)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พลาสมิด pGA11 สำหรับการแสดงผลเซลล์ผิวของอาร์ oryzae glucoamylase
ถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในการอ้างอิง [5] เพื่อขยายส่วนดีเอ็นเอระหว่าง dehydrogenase glyceraldehydes-3-ฟอสเฟต (GAPDH) โปรโมเตอร์และเทอร์มิ GAPDH ที่มีเขตการเข้ารหัสของglucoamylase กับ 30 ครึ่งหนึ่งของ-agglutinin ยีนสองไพรเมอร์ที่มี SphI เทียมและ Sse837 เว็บไซต์ที่ฉัน(ขีดเส้นใต้) (50 -ACATGCATGCACCAGTTCTCACACGGAACA-30 และ50 TCCTGCAGGTCAATCAATGAATCG AAAATG-30) ได้รับการออกแบบและชิ้นส่วน4.3 KBP ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้อดีตโพลิเมอร์ Taq (Takara) ชิ้นส่วนขยายที่ถูกย่อยด้วยสายเลือดเอนไซม์ข้อ จำกัด และแทรกระหว่าง SphI และ Sse837 ฉันเว็บไซต์ของpAUR101 (Takara) เพื่อสร้าง pAU101RGA เพื่อบูรณาการpAU101RGA เข้าไปในดีเอ็นเอ S. cerevisiae K7 จีโนมพลาสมิดที่ถูกย่อยด้วยStuI ในการสร้างชิ้นดีเอ็นเอเชิงเส้น ดีเอ็นเอนี้ส่วนได้กลายเป็น K7 ความเครียดจากอะซิเตตลิเธียมวิธีการทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต(Takara) Transformants ที่ได้รับบนจานที่มี YPD 1.0 mg / ml Aureobasidin A (Takara)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

pga11 พลาสมิดสำหรับผิวเซลล์ R . oryzae กลูโคอะไมเลส
แสดงถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในอังกฤษ [ 5 ] เพื่อขยายการดีเอ็นเอระหว่าง glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase
( gapdh ) และการ gapdh เทอร์มิเนเตอร์ที่มี
รหัสภูมิภาคของเอนไซม์กลูโคอะไมเลสกับ 30 ครึ่งของยีน a-agglutinin
2 ชนิดที่มี sphi เทียมและ sse837 ฉันเว็บไซต์
( ขีดเส้นใต้ ) ( 50-acatgcatgcaccagttctcacacggaaca-30 และ

50-tcctgcaggtcaatcaatgaatcg aaaatg-30 ) ได้ออกแบบและเป็นส่วน 4.3-kbp ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้อดีตได้ดีโดย
( ทาการะ ) ชิ้นส่วนของที่ถูกย่อยด้วยเอนไซม์จำกัดเชื้อสาย
แทรกระหว่างฉันและ sphi sse837
เว็บไซต์ของ paur101 ( ทาการะ ) เพื่อสร้าง pau101rga . รวม
pau101rga เป็น Sโดย K7 genomic DNA , พลาสมิด
ย่อยด้วย stui สร้างชิ้นส่วนดีเอ็นเอเชิงเส้น นี้ส่วนดีเอ็นเอ
กลายเป็นสายพันธุ์ K7 ตามคำแนะนำลิเธียมเตต
วิธีต่อไปนี้ของผู้ผลิต ( ทาการะ ) พลาสมิด
ได้บนจานที่มี ypd 1.0 mg / ml aureobasidin
( ทาการะ )