For the determination of Chatham mu

For the determination of Chatham mutation, Exon 9 of G6PD gene was amplified by PCR using Chat F and Chat R primers (MWG Co, Germany). PCR reaction was performed in a 50-µl volume. For this purpose, 5 µl of buffer, 3 µl MgCl2 (50 mM), 0.5 µl dNTPs (25 mM), 1 µl of each Chat F 5'- CAAGGAGCCCATTCTCTCCCTT-3' and Chat R 5'-TTCTCCACATAGAGGACGACGG-3' primers, and 0.35 µl of 5 unit Taq (Gene Fanavaran Co.) were added to 0.75 µl of DNA. Exon 9 of G6PD gene was amplified by the thermal cycler (Techne/Techgene, England). For this purpose, DNA was first subjected to one round at 94 °C for 2 min. It then underwent ten rounds at 94°C for 30 sec, 67.5°C for 1 min, and 25 rounds at 94, 64, and 72 degree centigrade respectively, each for 1 min. In the end, DNA was subjected to one round of final extension at 72° C for 5 min. After this step, PCR products obtained were electrophoresed on 1.5% agarose gel; the appearance of a 208-nucleotide band was indicative of correct DNA replication.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับกำหนดการของการกลายพันธุ์ชาธัม 9 Exon ของ G6PD ยีนถูกขยาย โดย PCR ที่ใช้สนทนา F และ R แชไพรเมอร์ (MWG Co เยอรมนี) ทำปฏิกิริยา PCR ในปริมาณ 50 µl สำหรับวัตถุประสงค์นี้ µl 5 บัฟเฟอร์ 3 µl MgCl2 (50 mM), 0.5 µl dNTPs (25 mM) µl 1 ของแต่ละแช F 5'-CAAGGAGCCCATTCTCTCCCTT-3' และ 5 R คุย ' ไพรเมอร์ - TTCTCCACATAGAGGACGACGG - 3 และ 0.35 µl ของ 5 หน่วย Taq (ยีน Fanavaran Co.) ได้เพิ่ม µl 0.75 ของดีเอ็นเอ Exon 9 ยีน G6PD ถูกขยาย โดย cycler ร้อน (Techne/Techgene อังกฤษ) สำหรับวัตถุประสงค์นี้ ดีเอ็นเอเป็นครั้งแรกภายใต้หนึ่งรอบที่ 94 ° C สำหรับ 2 นาที มันแล้วแต่ละรอบที่สิบที่ 94° C นาน 30 วินาที 67.5 องศาเซลเซียสใน 1 นาที และ 25 รอบ ที่ 94, 64, 72 องศาองศาเซลเซียสตามลำดับ 1 นาทีละกัน ในสุด ดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้หนึ่งรอบการต่ออายุที่ 72° C สำหรับ 5 นาทีสุดท้าย หลังจากนี้ขั้นตอน ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ถูก electrophoresed ใน 1.5% agarose เจล ลักษณะของวง 208-นิวคลีโอไทด์ถูกส่อจำลองดีเอ็นเอที่ถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการตัดสินใจของการกลายพันธุ์ชาตัม, Exon 9 ของยีน G6PD ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้การพูดคุยและ F ทไพรเมอร์ R (MWG Co, เยอรมนี) ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการในปริมาณ 50 ไมโครลิตร เพื่อจุดประสงค์นี้ 5 ไมโครลิตรของ buffer 3 ไมโครลิตร MgCl2 (50 มิลลิเมตร) 0.5 ไมโครลิตร dNTPs (25 มิลลิเมตร) 1 ไมโครลิตรของแต่ละท F 5'- CAAGGAGCCCATTCTCTCCCTT-3 และท 5'-R TTCTCCACATAGAGGACGACGG-3 'ไพรเมอร์ และ 0.35 ไมโครลิตร 5 Taq หน่วย (ยีน Fanavaran จำกัด ) มีการเพิ่ม 0.75 ไมโครลิตรของดีเอ็นเอ เอกซ์ซอน 9 ของยีน G6PD ถูกขยายโดย Cycler ร้อน (Techne / Techgene อังกฤษ) เพื่อจุดประสงค์นี้ดีเอ็นเอถูกยัดเยียดแรกที่หนึ่งรอบที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที จากนั้นก็เปลี่ยนไปสิบรอบได้ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, 67.5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 25 ออกรอบได้ที่ 94, 64 และ 72 องศาเซลเซียสตามลำดับในแต่ละเวลา 1 นาที ในท้ายที่สุดดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้เป็นหนึ่งในรอบสุดท้ายของการขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที หลังจากขั้นตอนนี้ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ได้มาใน electrophoresed 1.5% agarose เจล; การปรากฏตัวของวง 208 เบื่อหน่ายเป็นตัวบ่งชี้ของการจำลองแบบดีเอ็นเอที่ถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การหา Chatham การกลายพันธุ์ , exon 9 ของยีน G6PD ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้ primers แชทแชท F และ R ( mwg Co , เยอรมัน ) ปฏิกิริยา PCR แสดงใน 50 เล่ม ผมµ . เพื่อวัตถุประสงค์นี้ , 5 µ L ของบัฟเฟอร์ µ L 3 ชุด ( 50 มม. ) , 0.5 µผม dntps ( 25 มิลลิเมตร ) 1 µ l สนทนาแต่ละ F 5 ' - caaggagcccattctctccctt-3 ' และสนทนา R 5 ' - ttctccacatagaggacgacgg-3 ' ไพรเมอร์และ 035 µลิตร 5 หน่วย ทัค ( ยีน fanavaran Co . ) มีการเพิ่มµ 0.75 ลิตร ดีเอ็นเอ 8 9 ของยีน G6PD คือขยายตามวงจรความร้อน ( techne / Techgene , อังกฤษ ) สำหรับวัตถุประสงค์นี้ ดีเอ็นเอ เป็นครั้งแรกภายใต้หนึ่งรอบที่ 94 ° C 2 นาทีจากนั้นเพิ่มรอบสิบที่ 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที , 67.5 องศา C เป็นเวลา 1 นาทีและ 25 รอบที่ 94 , 64 , และ 72 องศาเซนติเกรด ตามลำดับ แต่ละ 1 นาที ในที่สุดดีเอ็นเอที่ถูกยัดเยียดให้ หนึ่ง รอบสุดท้ายของนามสกุลที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที หลังจากขั้นตอนนี้ โดยผลิตภัณฑ์ได้ electrophoresed บน 1.5 % เจล ; ลักษณะของวง 208 นิวคลีโอไทด์เป็นแสดงให้เห็นถึงการถ่ายแบบดีเอ็นเอที่ถูกต้อง