2. Experimental methods2.1. Reagent

2. Experimental methods
2.1. Reagents, enzymes, PCR primers, proteins, bacterial strains, cell lines and media
Restriction enzymes, T4 DNA Ligase and Klenow polymerase were New England Biolabs products (Beverly, MA, USA). PCR primers were obtained from Integrated DNA Technologies (Coralville, IA, USA). For amplification reactions we used Taq polymerase from Fermentas (Vilnius, Lithuania) or the proof-reading thermostable polymerase Accuzyme (Bioline, London, UK).

The Pichia pastoris expression system was obtained from Invitrogen (Carlsbad, CA, USA), the pCDFDuet-1 bacterial expression vector was the product of Novagen (Gibbstown, NJ, USA). The Escherichia coli JM109 bacterial strain was used for DNA propagation during DNA manipulation steps while bacterial protein expression was performed in E. coli BL21(DE3).

CM5 sensorchips and the reagents for protein coupling to the chips were from Biacore AB (Uppsala, Sweden). Lipopolysaccharide from E. coli 0127:B8 strain and lipid A from E. coli F583 strain were purchased from Sigma–Aldrich (St. Louise, MO, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2 วิธีการทดลอง
2.1 น้ำยาเอนไซม์ไพรเมอร์ pcr โปรตีนสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียสายพันธุ์เซลล์และสื่อ
เอนไซม์, t4 ลิกาเซ dna และ klenow โพลิเมอร์เป็นผลิตภัณฑ์ใหม่ Biolabs อังกฤษ (เบเวอร์ลี, usa) PCR ไพรเมอร์ที่ได้รับจากเทคโนโลยีครบวงจร dna (คอรัลวิลล์, usa) สำหรับปฏิกิริยาที่เราใช้ในการขยาย taq โพลิเมอร์จาก fermentas (วิลนีอุลิทัวเนีย) หรือหลักฐานการอ่าน accuzyme โพลิเมอร์ร้อน (Bioline, ลอนดอน, สหราชอาณาจักร).

ระบบการแสดงออก Pichia pastoris ได้จาก Invitrogen (Carlsbad, CA, USA), เวกเตอร์แสดงออก pcdfduet-1 เชื้อแบคทีเรียเป็นผลิตภัณฑ์ของ Novagen ( GIBBSTOWN, nj, สหรัฐอเมริกา)Escherichia coli สายพันธุ์แบคทีเรีย jm109 ที่ใช้สำหรับการขยายพันธุ์ในระหว่างขั้นตอน dna จัดการ dna ในขณะที่การแสดงออกของโปรตีนของเชื้อแบคทีเรียได้ดำเนินการในอีเมล sensorchips coli BL21 (DE3).

cm5 และสารเคมีสำหรับการมีเพศสัมพันธ์กับชิปโปรตีนมาจาก biacore ข (uppsala, สวีเดน) lipopolysaccharide จากอีเมล coli 0127: ความเครียด b8 และไขมันจากอีเมลสายพันธุ์ f583 coli ถูกซื้อมาจาก Sigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์, mo, usa)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 การวิธีที่ทดลอง
2.1 Reagents เอนไซม์ PCR ไพรเมอร์ โปรตีน สายพันธุ์แบคทีเรีย เซลล์รายการ และสื่อ
เอนไซม์จำกัด T4 DNA Ligase Klenow พอลิเมอเรสนำนิวอิงแลนด์ Biolabs ผลิตภัณฑ์ (เบเวอร์ลี่ MA สหรัฐอเมริกา) ไพรเมอร์ PCR ได้รับมาจากดีเอ็นเอเทคโนโลยี (Coralville, IA สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาขยายเราใช้พอลิเมอเรส Taq จาก Fermentas (วิลเนียส ลิทัวเนีย) หรือพอลิเมพิสูจน์อ่าน thermostable อเรส Accuzyme (นำ ลอนดอน สหราชอาณาจักร)

ระบบนิพจน์ pastoris Pichia ได้รับจาก Invitrogen (คาร์ลส CA, USA) เวกเตอร์นิพจน์แบคทีเรีย pCDFDuet-1 เป็นผลิตภัณฑ์ของ Novagen (Gibbstown, NJ สหรัฐอเมริกา) Escherichia coli JM109 ต้องใช้แบคทีเรียถูกใช้สำหรับการเผยแพร่ของดีเอ็นเอในระหว่างขั้นตอนการจัดการที่ดีเอ็นเอในขณะทำการนิพจน์แบคทีเรียโปรตีนใน E. coli BL21 (DE3)

CM5 sensorchips และ reagents สำหรับโปรตีน coupling เพื่อเศษได้จาก Biacore AB (Uppsala สวีเดน) ต้องใช้ 0127:B8 E. coli และไขมัน A จาก E. lipopolysaccharide ต้องใช้ F583 coli ถูกซื้อจาก Sigma–Aldrich (เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วิธีการทดลองวิธี
2.1 . reagents เอ็นไซม์ pcr primers โปรตีนฆ่าเชื้อแบคทีเรียสายพันธุ์เซลล์และสื่อ
ข้อจำกัดเอ็นไซม์ T 4 และดีเอ็นเอ ligase klenow polymerase เป็น New England biolabs สินค้า( Beverly mA สหรัฐอเมริกา) primers pcr ได้จากดีเอ็นเอแบบอินทิเกรตเทคโนโลยี( coralville IA USA ) สำหรับปฏิกิริยาการขยายสัญญาณเสียงเราใช้ polymerase taq จาก fermentas ( Vilniusลิทัวเนีย)หรือหลักฐานการอ่านหนังสือ thermostable accuzyme polymerase ( bioline , London , UK )

ที่ pichia pastoris สีหน้าระบบได้จาก invitrogen ( Carlsbad , CA ,สหรัฐอเมริกา),ที่ 1 เกิดจากเชื้อแบคทีเรีย pcdfduet เวกเตอร์การแสดงออกถึงความเป็น ผลิตภัณฑ์ ของ novagen ( gibbstown , NJ Transit , USA )ที่ JM ริคีอาและมีเพียงเชื้อ อี 109 เกิดจากเชื้อแบคทีเรียสายพันธุ์ได้ถูกใช้เพื่อแพร่กระจายดีเอ็นเอดีเอ็นเอในระหว่างการจัดการขั้นตอนในขณะที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรียโปรตีนจากการแสดงออกได้ดำเนินการใน e .ผล BL 21 ( de 3 )ซ.ม. 5

sensorchips และ reagents สำหรับโปรตีนถ่ายทอดสัญญาณไปยังที่มาจากชิป biacore AB ( uppsala ,สวีเดน). lipopolysaccharide จากผล 0127 : A 8 และเมื่อยล้า( lipid B จาก E .ผล 583 ความเมื่อยล้า F ก็ซื้อจาก sigma-aldrich ( St . Louise หมอ USA )