A method to directly identify prote

A method to directly identify proteins contained in mixtures by microcolumn reversed-phase liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) is studied. In this method, the mixture of proteins is digested with a proteolytic enzyme to produce a large collection of peptides. The complex peptide mixture is then separated on-line with a tandem mass spectrometer, acquiring large numbers of tandem mass spectra. The tandem mass spectra are then used to search a protein database to identify the proteins present. Results from standard protein mixtures show that proteins present in simple mixtures can be readily identified with a 30-fold difference in molar quantity, that the identifications are reproducible, and that proteins within the mixture can be identified at low femtomole levels. Based on these studies, methodology has been developed for direct LC/MS/MS analysis of proteins enriched by immunoaffinity precipitation, specific interaction with a protein-protein fusion product, and specific interaction with a macromolecular complex. The approach described in this article provides a rapid method for the direct identification of proteins in mixtures.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ศึกษาวิธีการระบุโปรตีนอยู่ในน้ำยาผสม microcolumn chromatography เหลวระยะย้อนกลับวิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionization ตัวตามกันไปรเมท (LC/MS/MS) โดยตรง วิธีการนี้ ต้องผสมโปรตีน ด้วยเอนไซม์ proteolytic ผลิตคอลเลกชันขนาดใหญ่ของเปปไทด์ ส่วนผสมของเพปไทด์ที่ซับซ้อนแล้วแยกออนไลน์ ด้วยเป็นตัวตามกันไปโดยรวมสเปกโตรมิเตอร์ ได้รับจำนวนมากของตัวตามกันไปโดยรวมแรมสเป็คตรา แรมสเป็คตรามวลตัวตามกันไปจะมีการใช้การค้นหาฐานข้อมูลโปรตีนระบุโปรตีนอยู่ ผลจากส่วนผสมของโปรตีนมาตรฐานแสดงว่า โปรตีนอยู่ในน้ำยาผสมง่ายสามารถพร้อมระบุ มีปริมาณสบ ต่าง 30-fold ที่รหัสการจำลอง และที่สามารถระบุโปรตีนภายในผสมในระดับต่ำสุด femtomole ตามการศึกษาเหล่านี้ วิธีได้รับการพัฒนาสำหรับการวิเคราะห์ LC/MS/MS โดยตรงโปรตีนที่อุดมไป ด้วยฝน immunoaffinity โต้ตอบเฉพาะกับผลิตภัณฑ์อาหารโปรตีนโปรตีน และการโต้ตอบกับคอมเพล็กซ์ macromolecular วิธีที่อธิบายไว้ในบทความนี้แสดงวิธีที่รวดเร็วสำหรับการระบุโดยตรงของโปรตีนในส่วนผสม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการในการระบุโดยตรงโปรตีนที่มีอยู่ในส่วนผสมโดย microcolumn เฟสกลับของเหลวโค electrospray ไอออนไนซ์ควบคู่มวลสาร (LC / MS / MS) คือการศึกษา ในวิธีการนี​​้มีส่วนผสมของโปรตีนที่ถูกย่อยด้วยเอนไซม์โปรตีนในการผลิตคอลเลกชันขนาดใหญ่ของเปปไทด์ ส่วนผสมเปปไทด์ที่ซับซ้อนถูกแยกออกจากนั้นในบรรทัดที่มีสเปกโตรมิเตอร์มวลควบคู่ซื้อจำนวนมากของสเปกตรัมมวลควบคู่ สเปกตรัมมวลควบคู่ถูกนำมาใช้ในการค้นหาฐานข้อมูลโปรตีนในการระบุโปรตีนในปัจจุบัน ผลลัพธ์ที่ได้จากการผสมโปรตีนมาตรฐานแสดงให้เห็นว่าโปรตีนที่มีอยู่ในส่วนผสมง่ายสามารถระบุได้อย่างง่ายดายด้วยความแตกต่าง 30 เท่าในปริมาณกรามที่ระบุเป็นซ้ำและโปรตีนภายในผสมสามารถระบุได้ในระดับที่ต่ำ femtomole อยู่บนพื้นฐานของการศึกษาเหล่านี้วิธีการได้รับการพัฒนาสำหรับการวิเคราะห์ LC / MS / MS โดยตรงของโปรตีนที่อุดมไปด้วยฝน immunoaffinity ปฏิสัมพันธ์เฉพาะกับผลิตภัณฑ์ฟิวชั่นโปรตีนและการมีปฏิสัมพันธ์เฉพาะกับโมเลกุลที่ซับซ้อน วิธีการที่อธิบายในบทความนี้จะให้วิธีการที่รวดเร็วสำหรับการระบุโดยตรงของโปรตีนในการผสม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการโดยตรงระบุโปรตีนที่มีอยู่ในส่วนผสมโดยวิธีพ่นละอองไฟฟ้า microcolumn reversed-phase liquid chromatography ไอออนไนซ์ตีคู่มวลสาร ( LC / MS / MS ) คือการศึกษา ในวิธีนี้ , ส่วนผสมของโปรตีนจะถูกย่อยด้วยเอนไซม์เพื่อผลิตคอลเลกชันขนาดใหญ่ของเปปไทด์ ผสมเปปไทด์ คอมเพล็กซ์ แล้วแยกกับตัวแมสสเปกโตรมิเตอร์ ออนไลน์ ,รับ จำนวน มาก จากมวลสเปกตรัม . การตีคู่มวลสเปกตรัมได้ถูกใช้เพื่อค้นหาโปรตีนฐานข้อมูลเพื่อระบุโปรตีนในปัจจุบัน ผลลัพธ์ที่ได้จากการผสมโปรตีนมาตรฐานแสดงให้เห็นว่าโปรตีนที่มีอยู่ในส่วนผสมที่เรียบง่ายสามารถพร้อมระบุมีความแตกต่างในปริมาณ 30 พับฟันกรามที่เป็น ) การแสดงตัวของ ,และโปรตีนภายในส่วนผสมสามารถระบุในระดับ femtomole ต่ำ จากการศึกษาเหล่านี้วิธีการที่ได้รับการพัฒนาสำหรับการวิเคราะห์โดย LC / MS / MS โดยการตกตะกอนของโปรตีนที่อุดมด้วย immunoaffinity ปฏิสัมพันธ์เฉพาะกับโปรตีนโปรตีนผสมผลิตภัณฑ์และปฏิสัมพันธ์เฉพาะกับซับซ้อน macromolecular .วิธีการที่อธิบายไว้ในบทความนี้แสดงวิธีที่รวดเร็วในการระบุโดยตรงของโปรตีนผสม