Fecal samples were collected from t

Fecal samples were collected from the anus with
sterilized cotton swabs at 21 days of age just before
weaning. The samples were put on ice and immediately
transported to the laboratory. One-hundred milligrams
of feces were homogenized in 10-fold (w/w) volumes
of phosphate-buffered saline (PBS; 140 mmol/L NaCl,
3 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2
HPO4, 2 mmol/L
KH2PO4; pH 7.4). The suspensions were centrifuged at
13000 × g for 10 min at 4°C and the supernatants were
frozen at
30°C until subsequent quantification of IgA
concentration.
Blood samples were collected into vacuum tubes containing
heparin (Venoject® II; TERUMO, Tokyo, Japan)
at 28 days of age (7 days after weaning). The samples
were stored at 4°C and transported to the laboratory
within 24 h after collection. The blood samples were
used to quantify the concentration of plasma IgG and
identify the number of leukocyte subsets. Plasma samples
were recovered by centrifuging the blood at 800 × g
for 10 min at 4°C and frozen at
30°C until use.
Quantification of fecal IgA and plasma IgG
by enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA)
Pig IgA or IgG ELISA Quantification Sets (Bethyl,Montgomery,
TX, USA) were used to quantify the concentrations
of IgA in fecal samples and IgG in plasma samples,
respectively. The assays were performed according to
the manufacturer’s instructions. Tris-buffered saline
(140 mmol/L NaCl, 50 mmol/L Tris; pH 8.0) containing
1% (w/v) bovine serum albumin (BSA; Nacalai Tesque,
Kyoto, Japan) and 0.05% (w/v) polyoxyethylene (20)
sorbitan monolaurate (Wako Pure Chemical Industries,
Osaka, Japan)was added to the samples to obtain appropriate
dilutions (IgA, 1/500; IgG, 1/10000). SureBlue
ReserveTM (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine; Kirkegaard
& Perry Laboratories, Gaithersburg,MD, USA) was used
as the substrate for horseradish peroxidase-conjugated
antibodies and 1 mol/L sulfuric acid (Wako Pure Chemical)
was used to stop the reactions. The absorbance at
450 nmwasmeasured using a microplate reader (Model
550; Bio-Rad, Tokyo, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างอุจจาระถูกรวบรวมจากทวารหนักด้วยเชื้อฝ้ายที่อายุ 21 วันก่อนหย่านม ตัวอย่างที่ถูกวาง บนน้ำแข็ง และทันทีส่งไปห้องปฏิบัติการ หนึ่งร้อยมิลลิกรัมของอุจจาระถูก homogenized ใน 10-fold (w/w)ของน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS; 140 mmol/L NaCl3 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2HPO4, 2 mmol/LKH2PO4 pH 7.4) สารแขวนลอยมีผลิตภัณฑ์ที่ถูก 13000 × g 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสและ supernatantsแช่แข็งที่อุณหภูมิ 30° C จนกระทั่งต่อมานับของอิกะความเข้มข้นตัวอย่างเลือดที่ถูกจัดเก็บลงในหลอดสุญญากาศที่ประกอบด้วยเฮ (Venoject® II บริษัทเทอรูโม โตเกียว ญี่ปุ่น)ที่ 28 วันของอายุ (7 วันหลังจากหย่านม) ตัวอย่างเก็บที่ 4° C และส่งไปห้องปฏิบัติการภายใน 24 ชั่วโมงหลังจากเก็บ การเก็บตัวอย่างเลือดใช้วัดปริมาณความเข้มข้นของพลาสมา IgG และระบุหมายเลขของชุดย่อยเม็ดเลือดขาว ตัวอย่างพลาสม่าถูกกู้คืน โดยถ้าเลือดที่ 800 × g10 นาทีที่อุณหภูมิ 4° C และ 30° c จนกว่าจะใช้นับจำนวนอุจจาระ IgA และ IgG พลาโดยเอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay(ELISA)หมูอิกะ หรือ IgG ELISA นับชุด (Bethyl มอนต์กอเมอรีTX สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้วัดปริมาณความเข้มข้นของอิกะในตัวอย่างอุจจาระและ IgG ในพลาสม่าตัวอย่างตามลาดับ Assays การดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต น้ำเกลือบัฟเฟอร์ทริสเรทติ้ง(140 mmol/L NaCl, 50 mmol/L ทริสเรทติ้ง pH 8.0) ที่ประกอบด้วย1% (w/v) วัว serum albumin (บีเอสเอ Nacalai Tesqueเกียวโต ญี่ปุ่น) และ 0.05% (w/v) polyoxyethylene (20)sorbitan monolaurate (Wako เพียวเคมีอุตสาหกรรมโอซาก้า ญี่ปุ่น) ถูกเพิ่มลงในตัวอย่างการขอรับที่เหมาะสมเจือจาง (IgA, 1/500 IgG, 1/10000) SureBlueReserveTM (3′ 3 5, 5 ′-tetramethylbenzidine Kirkegaardและห้องปฏิบัติการเพอร์รี Gaithersburg, MD สหรัฐอเมริกา) ใช้เป็นพื้นผิวสำหรับเป็ดน้ำผันฮอสแอนติบอดีและกรดกำมะถัน mol/L 1 (Wako เพียวเคมี)ถูกใช้เพื่อหยุดปฏิกิริยา ค่าที่ใช้ตัวอ่าน microplate (รุ่น 450 nmwasmeasured550 Bio-Rad โตเกียว ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างจากทวารหนักด้วยฆ่าเชื้อ swabs ฝ้าย อายุแค่ 21 วัน ก่อนหย่านม ตัวอย่างที่ใส่ในน้ำแข็งและทันทีขนส่งไปยังห้องปฏิบัติการ 100 มิลลิกรัมของอุจจาระถูกบดใน 10 เท่า ( w / w ) เล่มเกลือฟอสเฟต บัฟเฟอร์ ( PBS ; 140 มิลลิโมล / ลิตรเกลือ ,3 มิลลิโมล / ลิตร KCL 10 mmol / L Nhpo4 2 มิลลิโมล / ลิตรkh2po4 ; pH 7.4 ) สารแขวนลอยคือระดับที่13000 × G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ° C และ supernatants คือแช่แข็งที่อุณหภูมิ 30 องศา C จนถึงปริมาณที่ตามมาของอิกะสมาธิการเก็บตัวอย่างเลือดเข้าไปในท่อสุญญากาศที่มีเฮพาริน ( venoject ® 2 , เบาหวาน , โตเกียว , ญี่ปุ่นที่อายุ 28 วัน ( 7 วันหลังหย่านม ) ตัวอย่างเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C และส่งไปยังห้องปฏิบัติการภายใน 24 ชั่วโมงหลังจากเก็บ ตัวอย่างเลือดถูกใช้วัดความเข้มข้นของพลาสม่า IgG และระบุจำนวนของส่วนประกอบย่อย . ตัวอย่างพลาสมาถูกพบโดยวรรณนาเลือด× 800 กรัม10 นาทีที่ 4 ° C และแช่แข็งที่อุณหภูมิ 30 องศา C จนใช้ปริมาณของอุจจาระปกติอิกะ และ พลาสมาโดยสุรคต( ELISA )หมู กะ หรือ IgG ) ปริมาณ ( bethyl มอนท์โกเมอรี่ , ชุด ,เท็กซัส , สหรัฐอเมริกา ) ถูกใช้เพื่อวัดความเข้มข้นในตัวอย่างอุจจาระของ IgA และ IgG ในตัวอย่างพลาสมาตามลำดับ หรือมีการปฏิบัติตามคำแนะนำของผู้ผลิต ทั้งนี้ ในน้ำเกลือ( 140 มิลลิโมล / ลิตรขนาด 50 มิลลิโมล / ลิตรโดย ; pH 8.0 ) ที่มี1% ( w / v ) อัลบูมิน ( BSA tesque ; nacalai ,เกียวโต , ญี่ปุ่น ) และ 0.05% ( w / v ) พอลีออกซีเอทิลีน ( 20 )monolaurate ซอบิแทนโมโน ( Wako เพียว เคมีอุตสาหกรรมโอซาก้า , ญี่ปุ่น ) คือการเพิ่มจำนวนที่จะได้รับที่เหมาะสมเจือจาง ( อิกะ , 1 / 500 ; IgG , 1 / 10 , 000 ) surebluereservetm ( 3 , 3 - 5 , 5 ’’ tetramethylbenzidine ; เคอร์คีการ์ด ,& Perry ห้องปฏิบัติการ , ตัวแทน , MD , USA ) ถูกใช้เป็นเอนไซม์ conjugated ผสมมะรุมแอนติบอดีและ 1 โมล / ลิตรกรดซัลฟูริก ( Wako เคมีบริสุทธิ์ )ถูกใช้เพื่อหยุดปฏิกิริยา นที่พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน 450 nmwasmeasured โดยใช้แบบจำลอง550 ; ไบแรด , โตเกียว , ญี่ปุ่น )