Citrate measurements. Myotubes were

Citrate measurements. Myotubes were incubated 30 min at 37 °C in KRB containing glucose and PAA concentration as stated in the text or figure. Incubation media were collected for citrate measurement and 13% perchloric acid was added to the media. Precipitated proteins were removed by centrifugation, and the supernatants were neutralized by adding 2 N KH2CO3. The precipitated potassium perchlorate salt was eliminated by centrifugation, and the resulting supernatants were stored at −80 °C and subsequently used for citrate measurements. Citrate was assayed by coupling the citrate lyase/malate dehydrogenase (Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany) reactions according to Williamson and Corkey [14]. Sample or citrate standard (0.1–2 nmol) was added to 0.1 M Tris–HCl buffer, pH 7.6, 40 μM ZnCl2, 3 μM NADH, 0.4 μg/ml malate dehydrogenase (EC 1.1.1.37), final volume 0.5 ml. Fluorescence was determined at 340 nm excitation and 465 nm emission, then repeated 10 min after adding of citrate lyase (EC 4.1.3.8) solution.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ซิเตรตวัด Myotubes ได้ incubated 30 นาทีที่ 37 ° C ใน KRB ประกอบด้วยกลูโคสและ PAA ความเข้มข้นตามที่ระบุไว้ในข้อความหรือตัวเลข คณะทันตแพทยศาสตร์สื่อถูกรวบรวมสำหรับประเมินซิเตรต และ 13% perchloric กรดถูกเพิ่มไปยังสื่อ โปรตีนที่ตกตะกอนออก โดย centrifugation และ supernatants มี neutralized เพิ่ม 2 N KH2CO3 เกลือโพแทสเซียมตะกอน perchlorate ถูกตัด โดย centrifugation และ supernatants ได้ถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C และต่อมาใช้สำหรับการประเมินซิเตรต ซิเตรตเป็น assayed โดย coupling ปฏิกิริยา dehydrogenase (Boehringer มา มา เยอรมนี) lyase/มาลา ซิเตรตตาม Williamson และ Corkey [14] ตัวอย่างหรือมาตรฐานซิเตรต (0.1 – 2 nmol) ถูกเพิ่ม 0.1 M ตรี – HCl บัฟเฟอร์ pH 7.6, 40 μM ZnCl2, 3 μM NADH, μg 0.4 ml มาลา dehydrogenase (EC 1.1.1.37) กำหนดสุดท้ายปริมาตร 0.5 ml. Fluorescence ที่ 340 nm ในการกระตุ้นและปล่อยก๊าซ nm 465 แล้ว ทำซ้ำ 10 นาทีหลังจากการเพิ่มของซิเตรต lyase (EC 4.1.3.8)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซิเตรตวัด Myotubes ถูกบ่ม 30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 ° C ใน KRB ที่มีน้ำตาลกลูโคสและความเข้มข้น PAA ตามที่ระบุไว้ในข้อความหรือรูป สื่อบ่มเพาะที่ถูกเก็บรวบรวมสำหรับการวัดซิเตรตและ 13% กรดเปอร์คลอริกถูกบันทึกอยู่ในสื่อ โปรตีนตกตะกอนถูกถอดออกโดยการหมุนเหวี่ยงและ supernatants ถูกลบล้างโดยการเพิ่ม 2 ไม่มี KH2CO3 เกลือโพแทสเซียม perchlorate ตกตะกอนถูกกำจัดโดยการหมุนเหวี่ยงและ supernatants ผลที่ถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสและนำมาใช้สำหรับการตรวจวัดซิเตรต ซิเตรตได้รับการวิเคราะห์โดยการแต่งงานไอเลซิเตรต / malate dehydrogenase (Boehringer Mannheim, มันไฮม์, เยอรมนี) ปฏิกิริยาตามที่วิลเลียมสันและ Corkey [14] ตัวอย่างหรือมาตรฐานซิเตรต (0.1-2 นาโนโมล) ถูกบันทึกอยู่ใน 0.1 M บัฟเฟอร์ Tris-HCl พีเอช 7.6, 40 ไมครอน ZnCl2, NADH 3 ไมโครเมตร 0.4 ไมโครกรัม / มล malate dehydrogenase (EC 1.1.1.37) ปริมาณ 0.5 มลสุดท้าย เรืองแสงถูกกำหนดที่ 340 นาโนเมตรกระตุ้นและ 465 นาโนเมตรปล่อยก๊าซเรือนกระจกจากนั้นซ้ำแล้วซ้ำอีก 10 นาทีหลังจากการเพิ่มของไอเลซิเตรต (EC 4.1.3.8) การแก้ปัญหา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัดคุณภาพ . myotubes ถูกบ่ม 30 นาทีที่ 37 ° C ใน krb ประกอบด้วยกลูโคสและป้าความเข้มข้นตามที่ระบุไว้ในข้อความ หรือ ตัวเลข ระยะเวลาการเก็บรวบรวมสื่อการวัดและ 13% เปอร์คลอริกแอซิดซิเตรตถูกเพิ่มไปยังสื่อ ตกตะกอนโปรตีนถูกเอาออกโดยการเหวี่ยงแยก และ supernatants เป็น neutralized โดยเติม 2 N kh2co3 .ตกตะกอนเกลือโพแทสเซียม Perchlorate ถูกปั่น และผล supernatants อุณหภูมิ− 80 ° C และสามารถใช้สำหรับการวัดซิเตรต . ปริมาณซิเทรตเป็นเปิดตัวซิเตรท ไลเ / malate dehydrogenase ( Boehringer Mannheim Mannheim , เยอรมนี ) ปฏิกิริยาตามวิลเลียมสัน และ corkey [ 14 ] ตัวอย่างมาตรฐานหรือซิเตรท ( 01 – 2 ? ) คือการเพิ่มความเข้มข้น 0.1 M HCl ทริสและบัฟเฟอร์ pH 7.6 , 40 μ M zncl2 3 μ M การμ 0.4 g / ml malate dehydrogenase ( EC 1.1.1.37 ) สุดท้าย ปริมาณ 0.5 ml การตั้งใจที่ 340 nm ไทเทเนียม 465 นาโนเมตรออกมา แล้วอีก 10 นาทีหลังจากที่เพิ่มซิเทรต lyase ( EC 4.1.3.8
) โซลูชั่น