tissue dispersion was centrifuged a

tissue dispersion was centrifuged at 1200 rpm at 4 °C for 10 min. The
supernatant was discarded and the pellet was resuspended in 3 ml of
RBC lysing containing 0,83% NH
4
Cl in 100 mM Tris buffer (pH 7,4) and
kept at room temperature for 3 min. The cells were washed three
times with the RPMI-1640 and
fi
nally suspended in 1 ml of complete
media. Viability of cells was performed using the trypan blue exclusion
method (
Abuharfeil et al., 2001
). Spleen cell phenotyping was done as
previously described (
Kubosaki et al., 2008
). Splenocyte cell suspension
in RPMI-1640 (1 × 10
6
cells/ml) was washed with PBS and incubated
with anti-CD3, anti-CD4 and anti-CD8 antibodies according to
manufacturer's instruction. Cell subtypes were determined using BD
FACS Vantage
™
fl
ow cytometer. The absolute number of cells in each
spleen was determined by multiplying differential ratios of these sub-
types by the total spleen cell contents.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การกระจายเยื่อเป็นผลิตภัณฑ์ที่ 1200 rpm ที่อุณหภูมิ 4 ° C 10 นาทีการsupernatant ถูกละทิ้ง และเม็ดถูก resuspended ใน 3 mlRBC ก lysing ที่ประกอบด้วย 0,83% NH4Cl ใน 100 mM ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ (pH 7,4) และเก็บที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 นาที เซลล์ถูกล้างสามเวลา RPMI 1640 และเน็ตnally ใน 1 มิลลิลิตรของสมบูรณ์สื่อ ชีวิตของเซลล์ทำการใช้ยกเว้น trypan blue(วิธีAbuharfeil et al. 2001). ทำเป็น phenotyping เซลล์ม้าม(อธิบายไว้ก่อนหน้านี้Kubosaki et al. 2008). ระงับเซลล์ Splenocyteใน RPMI 1640 (1 × 106ล้าง ด้วย PBS และได้รับการกกเซลล์/มิลลิลิตร)มีแอนติบอดีต่อต้าน CD3 ป้องกัน- และป้องกัน cd4 CD8 ตามคำแนะนำของผู้ผลิต กำหนดประเภทย่อยเซลล์ใช้ BDFACS Vantage™flโอ๊ย cytometer จำนวนสัมบูรณ์ของเซลล์ในแต่ละกำหนด โดยการคูณอัตราส่วนที่แตกต่างเหล่านี้ย่อย-ม้ามชนิด โดยม้ามรวมเนื้อหาของเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกระจายตัวของเนื้อเยื่อถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1200 รอบต่อนาทีที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที
ใสทิ้งและเม็ดถูก resuspended ใน 3 มิลลิลิตร
RBC lysing มี 0,83% NH
4
Cl ใน 100 มิลลิเมตร Tris บัฟเฟอร์ (pH 7,4) และ
เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 นาที เซลล์ที่ถูกล้างสาม
ครั้งด้วย RPMI-1640 และ
Fi
Nally ระงับใน 1 มิลลิลิตรสมบูรณ์
สื่อ ชีวิตของเซลล์ได้รับการดำเนินการโดยใช้สีฟ้า Trypan ยกเว้น
วิธีการ (
Abuharfeil, et al., 2001
) เซลล์ม้าม phenotyping ได้ทำตามที่
อธิบายไว้ก่อนหน้า (
Kubosaki et al., 2008
) เซลล์แขวนลอย Splenocyte
ใน RPMI-1640 (1 × 10
6
cells / ml) ถูกล้างด้วยพีบีเอสและบ่ม
กับการป้องกัน CD3 ป้องกัน CD4 และแอนติบอดีตามต่อต้าน CD8
คำแนะนำของผู้ผลิต เชื้อมือถือได้รับการพิจารณาโดยใช้ BD
มาซึ่ง Vantage
™
FL
โอ๊ย cytometer จำนวนที่แน่นอนของเซลล์ในแต่ละ
ม้ามถูกกำหนดโดยการคูณค่าอัตราส่วนของการย่อยเหล่านี้
ประเภทโดยเนื้อหาของเซลล์ม้ามรวม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกระจายระดับเนื้อเยื่อที่ 1200 RPM ที่ 4 ° C 10 นาทีน่านถูกทิ้งและเม็ดเป็น resuspended 3 มิลลิลิตรเม็ดเลือดแดงที่มีต่อ 0,83 % นเ4 .CL ในบัฟเฟอร์โดย 100 มิลลิเมตร ( pH 7,4 ) และเก็บที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 นาทีเซลล์ก็ซัก สามเวลากับ rpmi-1640 และกง .แนลลี่ แขวนลอยใน 1 มิลลิลิตร สมบูรณ์สื่อ ความมีชีวิตของเซลล์มีการใช้ไตรแพนสีฟ้ายกเว้นวิธีabuharfeil et al . , 2001) อเซลล์ม้ามาเป็น( ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้kubosaki et al . , 2008) เซลล์แขวนลอย splenocyteใน rpmi-1640 ( 1 × 106เซลล์ / มิลลิลิตร ) โดยล้างด้วย pbs คือกับ anti-cd3 anti-cd4 anti-cd8 , และแอนติบอดีตามการสอนของผู้ผลิต เซลล์เชื้อเป็นใช้ BDfacs ได้เปรียบ™ฟลอริด้าโอ้วใช้โมโน . แน่นอนจำนวนเซลล์ในแต่ละม้ามถูกกำหนดจากอัตราส่วนของการคูณอนุพันธ์ย่อยเหล่านี้ประเภทโดยรวมเซลล์ม้ามเนื้อหา