An advanced shuttle-vector for effi

An advanced shuttle-vector for efficient nuclear transformation and genetic engineering of Haematococcus Pluvialis has been developed and tested by inserting linked trans-genes. The phytoene desaturase (pds) gene mutated in codon for amino acid at position 504 (from luecine to arginine), yields an enzyme resistant to the herbicide norflurazon and is used as an endogenous selection marker for transformation of H. pluvialis. A novel cloning vector allowing insertion of additional genes, both at the 5’ and the 3’ end of the mutated pds, has been designed by inserting the selection marker into the cloning vector pBluescript II SK (-) to give pBS-pds featuring the genomic mutated pds including 2000 bp of its promoter. In a second version pBS-pds short was created, by shortening the promoter sequence to 1000 pb. Unique restriction sites 5’ and 3’ of the marker have been reserved for insertion and simultaneous transformation with two transgenes. Transformation efficiency was significantly better than previously reported, achieving transformation frequencies of 2x10-5 both with long and short promoter, as well as linear constructs. An expression cassette for the ble derived from vector pGenD-ble was inserted into pBS-pds either 5’ or 3’of the pds, and successfully transformed into H. pluvialis, resulting in engineered strains weakly expressing the ble mRNA driven by the Chlamydomonas reinhardtii PsaD promoter. Both circular plasmids, as well as linear DNA fragments only consisting of the ble cassette fused to the pds selection marker were used successfully to engineer H. pluvialis. The plasmid constructs presented here, as well as the used of an endogenous dominant select marker, represents a blueprint for the future successful production of safe, genetically modified microalgae, for the possible production of high value products or biofuels.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีขั้นสูงรถเวกเตอร์การแปลงนิวเคลียร์มีประสิทธิภาพและพันธุวิศวกรรมของ Haematococcus Pluvialis ได้รับการพัฒนา และทดสอบ โดยการใส่ยีนธุรกรรมที่เชื่อมโยง ยีน (pds) desaturase phytoene กลายในรหัสพันธุกรรมสำหรับกรดอะมิโนที่ตำแหน่งที่ 504 (จาก luecine ให้อาร์จินีน), ทำให้มีเอนไซม์ทนต่อ norflurazon สารกำจัดวัชพืช และได้ใช้เป็นเครื่องหมายสำหรับการเปลี่ยนแปลงของ H. pluvialis endogenous เลือกการ แห่งนวนิยายโคลนเวกเตอร์ให้แทรกเพิ่มเติมยีน ทั้ง 5' และ 3' สิ้น pds กลาย ใส่เครื่องหมายเลือกใน pBluescript เวกเตอร์ cloning SK II (-) ให้มี pds กลาย genomic รวม 2000 bp ของโปรโมเตอร์ของ pds pBS มีสองรุ่น pBS-pds สั้นสร้าง โดยลดลำดับที่โปรโมเตอร์จะ 1000 pb ข้อจำกัดเฉพาะไซต์ 5' และ 3' ของหมายจองไว้สำหรับการแทรกและการเปลี่ยนแปลงพร้อมกับ transgenes สอง ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญดีกว่าก่อนหน้านี้ รายงาน บรรลุการเปลี่ยนแปลงความถี่ของ 2 x 10-5 กับโปรโมเตอร์สั้น และระยะยาว ตลอดจนโครงสร้างเชิงเส้นได้ เทปการนิพจน์สำหรับ ble จากเวกเตอร์ pGenD ble ถูกแทรกลงใน pBS pds 5' หรือ 3' ของ pds และสำเร็จแก่น H. pluvialis เกิดขึ้นในการออกแบบสายพันธุ์สูญแสดง ble mRNA โดย Chlamydomonas reinhardtii โปรโมเตอร์ PsaD ทั้งกลม plasmids รวมทั้งชิ้นส่วนดีเอ็นเอเส้นเท่านั้น ประกอบด้วยเทป ble fused เพื่อทำเครื่องหมายเลือก pds เคยสำเร็จวิศวกร H. pluvialis โครงสร้างของ plasmid ที่แสดงที่นี่ และใช้ของมี endogenous หลักเลือกเครื่องหมาย แทนพิมพ์เขียวสำหรับการผลิตปลอดภัย พันธุ microalgae สำหรับการผลิตผลิตภัณฑ์มูลค่าสูงหรือเชื้อเพลิงชีวภาพได้ประสบความสำเร็จในอนาคต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นสูงรถรับส่งเวกเตอร์สำหรับการเปลี่ยนแปลงนิวเคลียร์ที่มีประสิทธิภาพและพันธุวิศวกรรมของ Haematococcus Pluvialis ได้รับการพัฒนาและทดสอบโดยการแทรกการเชื่อมโยงทรานส์ยีน phytoene desaturase (PDS) ยีนกลายพันธุ์ใน codon สำหรับกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 504 (จาก luecine เพื่อ arginine) อัตราผลตอบแทนเ​​อนไซม์ทนต่อสารกำจัดวัชพืช norflurazon และใช้เป็นเครื่องหมายภายนอกเลือกสำหรับการเปลี่ยนแปลงของเอช pluvialis เวกเตอร์โคลนนวนิยายที่ช่วยให้การแทรกของยีนที่เพิ่มขึ้นทั้งใน 5 'และ 3' ในตอนท้ายของ PDS กลายพันธุ์ที่ได้รับการออกแบบโดยการใส่เครื่องหมายเลือกลงในโคลนเวกเตอร์ pBluescript ครั้งที่สองเอสเค (-) เพื่อให้พีบีเอส-PDS เนื้อเรื่อง PDS กลายพันธุ์รวมทั้งจีโนม 2000 bp ของโปรโมเตอร์ของมัน ในรุ่นที่สองพีบีเอส-PDS สั้นที่ถูกสร้างขึ้นโดยการลดลำดับโปรโมเตอร์ 1000 PB เว็บไซต์ที่ไม่ซ้ำข้อ จำกัด 5 'และ 3' ของเครื่องหมายได้รับการสงวนไว้สำหรับการแทรกและการเปลี่ยนแปลงพร้อมกันกับสอง transgenes ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญดีกว่ารายงานก่อนหน้านี้ประสบความสำเร็จในการเปลี่ยนแปลงของความถี่ 2x10-5 ทั้งที่มีผู้ก่อการยาวและระยะสั้นเช่นเดียวกับโครงสร้างเชิงเส้น เทปแสดงออกเบิ้ลที่ได้มาจากเวกเตอร์ pGenD-เบิ้ถูกใส่เข้าไปในพีบีเอส-PDS ทั้ง 5 'หรือ 3'of ปอนด์และประสบความสำเร็จในการเปลี่ยนเอช pluvialis ผลในการออกแบบสายพันธุ์ที่ไม่ค่อยแสดงความ mRNA เบิ้แรงหนุนจากการ Chlamydomonas reinhardtii ก่อการ psad ทั้งพลาสมิดวงกลมเช่นเดียวกับดีเอ็นเอเชิงเส้นเท่านั้นประกอบด้วยเทปเบิ้ลผสมกับเครื่องหมายเลือก PDS ถูกนำมาใช้ประสบความสำเร็จกับวิศวกรเอช pluvialis เป็นผู้ก่อสร้างพลาสมิดนำเสนอที่นี่เช่นเดียวกับที่ใช้ในการเลือกเครื่องหมายภายนอกที่โดดเด่นแสดงให้เห็นถึงพิมพ์เขียวสำหรับการผลิตในอนาคตที่ประสบความสำเร็จของความปลอดภัยสาหร่ายดัดแปลงพันธุกรรมสำหรับการผลิตเป็นไปได้ของผลิตภัณฑ์ที่มีมูลค่าสูงหรือเชื้อเพลิงชีวภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เวกเตอร์สำหรับการรับส่งสูงนิวเคลียร์ที่มีประสิทธิภาพและวิศวกรรมทางพันธุกรรมของสาหร่ายสีเขียวได้รับการพัฒนาและทดสอบโดยการแทรกการเชื่อมโยงทรานส์ยีน ส่วนไฟโทอีน ( PDS ) ที่มียีนกลายพันธุ์ในรหัสสำหรับกรดอะมิโนตำแหน่งที่ 504 ( จากลูซีนจะอาร์ )ผลผลิตเอนไซม์ที่ทนต่อสารกำจัดวัชพืช norflurazon และใช้เป็นเครื่องหมายในการเลือกสำหรับการเปลี่ยนแปลง . สีเขียว . นิยายเวกเตอร์โคลนให้การแทรกของยีนเพิ่มเติม ทั้งใน 5 ' และ 3 ' ปลายกลายพันธุ์ PDS ,ได้รับการออกแบบโดยใส่เครื่องหมายในการโคลนนิ่ง ) เวกเตอร์ 2 SK ( - ) เพื่อให้ภาพที่มีพันธุกรรมกลายพันธุ์ PDS PDS รวมถึง 2000 BP ของโปรโมเตอร์ ในรุ่นที่สองพีบีเอสโปรดักชั่นสั้นที่ถูกสร้างขึ้น โดยการลดลำดับ 1000 ตะกั่วเฉพาะข้อ จำกัด เว็บไซต์ 5 ' และ 3 ' ของเครื่องหมายถูกสงวนไว้สำหรับการแทรกและการ transgenes พร้อมกัน 2 . ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญดีกว่าก่อนหน้านี้รายงานการเปลี่ยนแปลงความถี่ของ 2x10-5 ทั้งยาวและสั้น กับ โปรโมเตอร์ ตลอดจนโครงสร้างเชิงเส้น .การแสดงออกเทปสำหรับ ble มาจากเวกเตอร์ pgend ble ถูกแทรกลงในพีบีเอสโปรดักชั่นทั้ง 5 ' หรือ 3'of PDS แปลงเรียบร้อยแล้วเป็นชั่วโมง สีเขียว เป็นผลในวิศวกรรมสายพันธุ์อย่างอ่อนแสดง ble mRNA ขับเคลื่อนด้วยคลาไมโดโมแนส reinhardtii psad โปรโมเตอร์ ทั้งสองเป็นวงกลมเพื่อเช่นเดียวกับเส้นดีเอ็นเอเท่านั้น ประกอบด้วยเทป ble หลอมรวมเพื่อ PDS เลือกเครื่องหมายถูกใช้เรียบร้อยแล้ว . . . สีเขียว . การสร้างพลาสมิดที่นำเสนอที่นี่ เช่นเดียวกับการใช้เป็นโครงสร้างเด่นเลือกเครื่องหมายเป็นพิมพ์เขียวสำหรับอนาคตที่ประสบความสำเร็จในการผลิตสาหร่ายดัดแปลงพันธุกรรม , ปลอดภัยสำหรับความเป็นไปได้ในการผลิตสินค้ามูลค่าสูง หรือเชื้อเพลิงชีวภาพ .